云南红骨圭山山羊微卫星 ＤＮＡ位点遗传多样性分析

圭山山羊是云南省唯一一个国家级羊类遗传资源保护品种,而红骨圭山山羊是2006年在云南省圭山山羊中发现的特异性个性。本研究选择了分布在全基因组的29个微卫星分子标记分析了红骨圭山山羊和非红骨山羊两个种群的遗传多样性。结果表明,29个微卫星标记中仅7个表现为多态,其中MAF70,SRCRSP23,CSRD247,ILSTS087,TGLA53,DRBP1共计6个微卫星标记表现为2个等位基因,P19(DYA)微卫星座位表现为4个等位基因。非红骨和红骨群体微卫星位点平均等位基因数,平均有效等位基因数基本相同,多态微卫星位点的PIC在0.245 5～0.690 0之间变动。红骨山羊群体位点的平均观测杂合度和平均期望杂合度稍高于非红骨。29个微卫星标记中仅MAF70,SRCRSP23,CSRD247,ILSTS087,TGLA53微卫星座位处于Hardy-Weinberg平衡状态。本研究中有22个微卫星标记在两个群体中表现为纯合子。此外,7个微卫星标记在两个群体中的有效基因类型完全一致。因此,推断红骨圭山山羊不是一个新的品种,与普通圭山山羊为同一个品种。而红骨圭山山羊的"红骨现象"可能是普通圭山山羊由于环境或者其他因素导致的骨骼代谢异常或者个别基因突变而致。

云南出口三七中总砷及无机砷的测定

三七中总砷及无机砷按GB/T5009.11-2003进行了大量的测试。三七试样经湿消解,加入硫脲使五价砷还原为三价砷,再加入硼氢化钾使其还原生成砷化氢,和氩气一起进入石英原子化器中分解为原子态砷,测其荧光强度,得总砷。未经消解的三七试样在6mol/L盐酸和水浴条件下,无机砷以氢化物形式被提取,实现无机砷和有机砷的分离,在2mol/L盐酸条件下测定,同总砷原理。通过对大量测试数据的分析,讨论了其无机砷在总砷中所占含量的百分比及毒性。

应用PCR技术检测鹿流行性出血病病毒

对PCR (包括PCR/化学发光杂交检测、抗体亲和捕获套式PCR检测、原位PCR检测、PCR/RFLP检测 )检测在最近几年鹿流行性出血病病毒 (EHDV ,包括EHDV 1 ,EHDV 2等 )临床诊断的应用和研究成果进行了论述 ,认为该技术为EHD的诊断、流行病学调查、疫情监控及防制等提供了一种更灵敏。

云南圭山山脉地区土壤—植物系统中矿物元素的分布规律研究

本研究以云南圭山山脉地区的弥勒县、泸西县、石林县(以昆明市作为对照)土壤及饲用植物为对象,分析主要矿物元素在土壤和饲用植物中的组成及质量分数,探讨该地区主要矿物元素在土壤及饲用植物中的分布规律。结果表明,与昆明地区相比,云南圭山山脉地区土壤中含有较高的锶、钾、镁、钼和氟元素,而磷、铁、锌、铜与钴元素质量分数较低;同时饲用植物中含有较高的锶、镁、铁、锌、铜、锰元素,而磷元素质量分数较低;磷、钙、镁与锶元素质量分数在土壤与饲用植物间存在显著的正相关,表明该地区饲用植物中钙、磷、锶与镁元素较多来自土壤中。

羊痘病毒实时荧光定量TaqMan PCR检测方法的建立

参照羊痘病毒(CaPV)P32的基因序列,设计合成了2套引物和1条探针,建立了实时荧光定量PCR技术,对细胞培养物、皮肤丘疹、痂皮等组织病料中的GPV进行了特异性检测和敏感性试验。结果显示,用300 nmol／L引物浓度和200 nmol／L探针浓度,获得的Cr值较小,而△Rn最大;可检测到相当于0．1 TCID50的病毒DNA;制作的标准曲线中各浓度范围内有极好的线性关系且线性范围宽,相关系数为0．999 5以上;组内和组间试验重复性的变异系数分别为2．3％和3．4％;与常规的PCR相比较,该方法具有快速、特异、敏感、可定量,可同时检测大量样品等优点。表明。荧光TaqMan PCR是一种检测CaPV的良好方法,可对组织病料中低含量的CaPV或持续带毒宿主进行准确检测。

应用实时荧光定量TaqManRT-PCR检测口蹄疫病毒

按照口蹄疫病毒 (FMDV )聚合酶 3D基因序列 ,设计合成了引物和探针 ,经各反应条件的优化 ,建立了实时荧光定量 RT- PCR技术 ,对细胞培养物、水泡液、水泡皮及分泌物、血液中的 FMDV进行了特异性检测和敏感性试验。结果 ,用 30 0 nmol/ L 的引物浓度和 2 0 0 nmol/ L 探针浓度 ,获得的 CT值较小 ,而 ΔRn最大 ;可检测到相当于 0 .1 TCID50 的病毒 RNA;与 VSV和其他水泡性病毒不发生交叉反应 ;制作的标准曲线中各浓度范围内有极好的线性关系 ,且线性范围宽 ,相关系数为 0 .984 ;组内和组间试验重复性的变异系数 (CV)分别为 5 .4 %和 6 .7% ;与常规 RT- PCR相比较 ,该方法具有快速、特异、敏感、可定量 。

羊痘病毒P32蛋白编码基因的克隆及表达

为获得山羊痘病毒膜蛋白重组P32抗原,根据其基因序列设计合成了1对特异性引物, 对CaPV P32基因进行了PCR扩增,产物大小约为969 bp;产物回收纯化后,将其克隆至pBAD／ Thio-TOPO载体中,转化TOP10大肠埃希氏菌感受态细胞,与已报道的多株CaPV P32基因序列的同源性高达99％;相应地,氨基酸序列同源性为98％。经测序筛选出阳性克隆,该重组菌株经 L-arabinose诱导,可稳定、高效地表达CaPV P32抗原。表达蛋白为融合蛋白,分子质量约 51．53 ku。

赤羽病病毒N基因硫氧还蛋白融合表达载体的构建与表达

为获得赤羽病病毒 (Akabanevirus ,AKAV )的核蛋白重组抗原 ,根据其基因序列(SmRNA)设计合成了 1对特异性引物 ,对AKAVN基因进行RT PCR扩增 ,产物大小约为 6 96bp ,回收纯化后 ,将其克隆至 pMD18 T质粒载体中 ,经核苷酸序列分析 ,与已报道的多株AKAV编码核衣壳蛋白N的SmRNA基因比较后发现 ,所测定毒株的核苷酸序列与TIN毒株的同源性高达 98.3% ,推测的氨基酸同源性为 97.6 % ,证实为AKAV的N基因。将该基因片段亚克隆插入pBAD/ThioTOPO表达载体 ,转化TOP10细胞 ,成功地构建了AKAVN基因重组表达载体。经L araboinose诱导表达 ,可稳定、高效地表达AKAV核蛋白抗原。表达蛋白为融合蛋白 ,分子质量约 4 2 .5ku ,其表达产量约占菌体总蛋白的 2 8% ,融合蛋白中含有AKAV特异性核蛋白抗原 。

白酒中总酸测定不确定度的评估研究

按照国家标准GB10345.4-89《白酒中总酸的试验方法》,采用氢氧化钠标准溶液滴定法测定白酒中的总酸。本文通过白酒中总酸测量不确定度的评估实验,介绍了一种新的测量不确定度评估方法。

羊痘病毒

羊痘病毒能引起山羊痘、绵羊痘和牛的结节性疹块病。作者着重综述山羊痘和绵羊痘。羊痘病毒的基因组较大 ,山羊痘病毒和绵羊痘病毒的基因组非常相似 ,但自然条件下一般不会发生交叉感染。临床症状主要以发热和全身性丘疹或结节为特征 ,结合其临床症状实验室用透射电子显微镜检测病毒粒子的典型形态即可做出快速诊断。病毒培养和分离虽有较高的特异性 ,但耗时长 ;因羊痘病毒和副痘病毒有相似的血清型 ,一些血清学的诊断方法如琼脂扩散试验 (AGID)、间接免疫荧光试验、检测抗体的 EL ISA等 ,因会出现抗体交叉反应而无法区分这 2种病毒的感染 ;又因羊痘感染后主要引起细胞介导免疫 ,动物接触病原后仅产生低水平的中和抗体 ,故而病毒中和试验敏感性也不高。近年来 ,用于 EL ISA检测抗原的方法已经建立 ,具有较高的特异性 ;Western印迹试验利用羊痘病毒的 P32抗原与待检血清反应 ,具有较好的敏感性和特异性 ,但价格昂贵、操作难。PCR可用来检查活体或组织培养品中羊痘病毒基因组 ;在此基础上发展了多重 PCR技术 ,不但敏感性和特异性更强 ,且大量节省了时间和精力。治疗羊痘病毒无特效药 ,做好疫苗接种等防制措施很关键 ;目前采用活疫苗和灭活疫苗来控制本病 。

非洲猪瘟病毒PCR检测方法的建立

根据GenBank公布的非洲猪瘟病毒(ASFV)结构蛋白基因vp73的序列,设计一对特异性检测引物,扩增片段251 bp,建立了检测ASFV的PCR方法。与OIE推荐使用的2组PCR引物进行比对试验,结果表明,3组引物的检测特异性相当,但本研究设计的引物灵敏度至少高出100倍。表明所建立的PCR方法能敏感、快速地检测非洲猪瘟病毒。

ICP-AES测定铅及铅合金中铁、铜、镉和锡

铅及铅合金样品经硝酸溶解,使用电感耦合等离子体-原子发射光谱仪(ICP-AES)测定铁、铜、镉、锡含量,加标回收率铁82.6%—108.9%、铜93.7%—111.4%、镉87.2%—99.1%、锡90.0%—100.6%,测定相对标准偏差(RSD)Fe≤3.32%、Cu≤4.36%、Cd≤2.16%、Sn≤3.26%。方法简便,测定速度快,结果准确,适用于铅及铅合金的检测。

小反刍兽疫病毒H糖蛋白基因原核表达载体的构建及表达

参照GenBank中小反刍兽疫病毒(PPRV)H抗原基因序列,人工合成了PPRV H基因,将其克隆至pUC18-T质粒中,转化E.coliJM109感受态细胞,构建并选择PPRV H基因克隆重组质粒,经核苷酸序列分析正确,将其克隆至pBAD/Thio-TOPO载体中,转化E.coliTOP10感受态细胞,核苷酸序列分析证实,成功构建了PPRV H基因重组表达载体。经不同浓度L-阿拉伯糖诱导,可稳定、高效地表达PPRV H抗原。SDS-PAGE分析结果表明,用终浓度为0.2 g/L的L-阿拉伯糖诱导5 h的表达量最高,表达蛋白为分子质量约83 ku的融合蛋白;经薄层扫描分析,其表达产量约占菌体总蛋白的10%。Western-blotting检测表明,诱导的蛋白能与PPRV H蛋白单抗发生特异性反应,说明表达的融合蛋白中含有PPRV H糖蛋白抗原。

水泡性口炎病毒核蛋白基因的克隆和序列分析

目的 对水泡性口炎病毒编码群特异性抗原的N基因进行PCR扩增、克隆和序列分析。方法 将水泡性口炎病毒编码群特异性抗原的N基因片段克隆至pMD18 T载体中 ,构建N基因重组质粒载体。进行PCR及限制性内切酶分析 ,筛选获得N基因插入的阳性克隆。经核苷酸序列分析 ,并与Genbank中的VSV编码核衣壳蛋白N基因序列进行比较。结果 该序列与VSVNewJersey型的 0 9/ 82 HD B株同源性最高 ,核苷酸和推测氨基酸的同源性分别为 98.9%和 98.8% ,有 13个核苷酸差异 ,伴有 5个氨基酸改变 ,第 72位的酪氨酸变为组氨酸 ,第 89位的缬氨酸变为异亮氨酸 ,第 183位的天冬氨酸变为天冬酰胺 ,第 2 0 5位的苯丙氨酸变为亮氨酸 ,第 4 18位的丙氨酸变为缬氨酸 ;与In diana型各株的同源性较低 ,与Glasgow株相比 ,核苷酸和氨基酸的同源性分别为 6 7.9%和 71.6 %。结论 已成功地克隆了水泡性口炎病毒N基因 。

水泡性口炎病毒核蛋白基因的表达及初步应用

将水泡性口炎病毒编码群特异性抗原的N基因片段克隆至pMD18 T克隆载体质粒中 ,构建N基因克隆重组质粒 ,进行核苷酸序列分析。然后亚克隆插入pBAD ThioTOPO表达载体 ,经PCR限制性内切酶分析、测序鉴定 ,筛选获得N基因正向插入、有正确读码框的阳性克隆 ,成功构建了水泡性口炎病毒N基因重组表达载体。经L Arabinose诱导表达 ,可稳定、高效地表达N蛋白抗原。SDS PAGE、Westernblotting及间接ELISA试验结果表明 ,表达蛋白为融合蛋白 ,质量约 6 3 5kD ,其表达产量约占菌体总蛋白的 16 % ,相当于 92mg L。融合蛋白中含有水泡性口炎病毒群特异性的核蛋白抗原 ,应用表达的VSV核蛋白抗原建立了酶联免疫吸附试验 ,通过对 186份山羊、豚鼠实验动物人工感染VSV的血清样品和参考血清样品的检测 ,并与微量血清中和试验进行了比较 ,结果表明 :以表达的VSV核蛋白为包被抗原的酶联免疫吸附试验是一种特异性强、敏感性高、快速、简单、安全的检测方法 ,抗原制备成本低。

多重PCR同时检测口蹄疫病毒、猪水疱病病毒和水疱性口炎病毒

根据基因库中的口蹄疫病毒(FM-DV),猪水疱病病毒(SVDV)和水疱性口炎病毒(VSV)各基因序列,设计了与FMDV,SVDV和VSV互补的3对特异性引物,对样品中的cDNA模板进行了多重PCR扩增及反应条件的优化,结果同时得到与设计相符合的3条特异性条带,分别为189 bp,125 bp和300 bp。用这3对引物对病毒样品cDNA模板进行多次扩增,均能稳定得到与设计相符合的3条特异性条带。本试验能特异、敏感、快速地鉴定FMDV,SVDV和VSV。

分光光度法测定磷矿石中五氧化二磷及二氧化硅的含量

试样经碱熔 ,酸化后 ,以磷 -钼 -钒黄分光光度法测定五氧化二磷 ;在草酸存在下 ,以抗坏血酸为还原剂 ,硅钼蓝法测定二氧化硅。本方法操作简单、快速 。

测定甘蔗中铅、铜、镉方法的研究

甘蔗(Sugar cane)是禾本科植物,产于热带、亚热带地区,是生产白砂糖、赤砂糖、红糖等食糖的主要原料,由于生长地气候、土壤、地质条件、环境的不同,甘蔗中的有害物质、有害元素的含量也不同。本研究采用电感耦合等离子体-原子发射光谱仪(ICP-AES)同时测定甘蔗中的3个有害元素铅、铜、镉。方法简便,检测速度快,结果准确,适用于甘蔗检验。

宣威火腿加工过程中生物胺变化规律

用40条重量在9～11 kg的原料腿按照传统工艺加工宣威火腿,分别在腌制前(24 h)、腌制结束(18d)、风干结束(125 d)、成熟中期(250 d)与成熟结束(360 d)这5个加工阶段随机取出5条火腿,以股二头肌为中心取约100 g样品,以HPLC方法测定生物胺含量。结果表明,宣威火腿样品中共检测出7种生物胺,分别是色胺、苯乙胺、腐胺、酪胺、尸胺、亚精胺和精胺。在各个加工阶段,精胺的含量都是最高的,其次是酪胺与亚精胺。酪胺、亚精胺与精胺的含量在5个加工阶段都没有显著变化(P>0.05)。苯乙胺与腐胺含量显著增加(P<0.05),在成熟中期(250 d)时达最高值,随后含量有所降低(P>0.05)。生物胺总量随着加工过程的进行有所增加,在成熟中期(250 d)达最大值11.51mg/100 g,随后生物胺总量有降低的趋势,但差异不显著(P>0.05)。

偶氮胂Ⅲ光度法同时测定硅钡合金中钡和钙

用偶氮胂 为显色剂 ,在 p H7.0下 ,以 Ba- ASA - Zn- Phen多元配合物形式测定 Ba,并用 EGTA掩蔽 Ca,消除对 Ba的干扰 ;在 p H10时测定 Ca,并用硫酸铵消除 Ba对 Ca的干扰。此法经过简单分离后 ,可同时测定硅钡合金中 Ba和