三七中分离微生物对其转化的初步研究

目的从云南三七材料中分离共生菌,对三七进行发酵转化,研究转化后皂苷成分的变化。方法采用平板划线分离法,从三七根茎、花、种子等材料中分离纯化共生菌,经液体发酵,通过TLC、UV、HPLC等检测方法,对转化前后皂苷变化进行分析。结果共分离出真菌27株,细菌2株初步筛选出两株对皂苷单体转化明显的菌株,转化后总皂苷含量有所增加。结论从三七材料中分离的真菌可以对三七进行定向转化,得到稀有皂苷,并提高总皂苷含量。

滇中蛹虫草居群生物学及其生态学习性研究

通过对滇中地区昆明西山、昆明野鸭湖、嵩明大哨和楚雄紫溪山分布的蛹虫草居群,进行调查和采样,调查分析了蛹虫草的生境,比较研究了蛹虫草不同居群有性型及无性型形态差异,对蛹虫草无性型的产孢结构进行光学显微镜和扫描电镜观察研究。研究发现,蛹虫草子囊壳着生方式及其大小、子囊大小、无性型,随生境不同而发生差异。在云南松常绿阔叶混交林下的子囊壳及子囊较大,分离得到的无性型以拟青霉型(Paecilomyces-type)产孢结构占优势;在华山松林和田埂草丛生境中的子囊壳及其子囊较小,分离得到的无性型以轮枝孢型(Verticillium-type)产孢结构占优势。

红曲中主要活性成分的研究

以红曲为主要成分的药品已成为市场份额最大的降血脂天然药物.采用95%的乙醇对红曲进行浸提,经薄层色谱、氧化铝柱层析和硅胶柱层析等分离纯化手段,从红曲中分离得到三种重要活性成分.经高效液相色谱、红外光谱、质谱和核磁共振确认所得三种化合物分别为麦角甾醇、洛伐他汀和豆甾醇.其中具有降血脂活性的豆甾醇为首次从红曲中分离得到,说明洛伐他汀并非红曲中唯一的降脂成分.

小桐子居群种子表型变异研究

对小桐子8个居群种子表型进行研究,测量种子长度、宽度、重量等11项形态学指标。种子表型性状,居群间的变异系数c.v.%=10.64~19.33,表型频率分化系数平均Pst=10.02%,表型方差分化系数平均Vst=14.27%,表明小桐子种子表型居群内变异是其变异的主要来源。居群间欧氏距离Q-聚类分析表明,种子表型分化基本与居群间的地理距离远近相关联。11个表型性状间多数呈极显著或显著的正相关,种子长度、宽、厚、周长和种子百粒重为小桐子易测定和重要的表型性状。

10种植物内生真菌抗菌活性研究

采用组织块分离法从白木香(Aquilaria sinensis(Lour.)Gilg.)茎秆和叶片中分离得到10株植物内生真菌,并采用滤纸片法检测10种植物内生真菌液体培养粗提物对13种常见致病细菌的抑菌活性.经形态与分子鉴定,白木香中获得的10株内生真菌名称分别为Colletotrichum gloeosporioides、Arthrinium rasikravindrii、Xylaria adscendens、Cladosporium perangustum、Fusarium tricinctum、Cladosporium sphaerospermum、Diaporthe sp.、Phomopsis amygdali、Phomopsis sp.、Periconia macrospinosa.A.rasikravindrii、Diaporthe sp.、P. amygdali、Phomopsis sp.、P. macrospinosa 5株内生菌为首次从白木香中分离得到.活性筛选结果显示有5株内生菌(C. gloeosporioides、C. perangustum、Diaporthe sp.、F. tricinctum、P. macrospinosa)液体培养粗提物具有抗菌活性.其中,Diaporthe sp.对副溶血性弧菌的抑菌圈能达到(17.1±0.04)mm;F. tricinctum粗提物对蜡样芽孢杆菌、无乳链球菌、短小芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌、副溶血性弧菌的最低抑菌质量浓度均为3.125 mg·mL^(-1).

新疆细虫草抑菌及抗氧化作用的初步研究

分别采用滤纸片琼脂扩散法和二苯代苦味基肼自由基(DPPH)法,对新疆细虫草(Ophiocordyceps gracilis)水提物和醇提物的体外抑菌和抗氧化活性进行研究。结果表明,新疆细虫草水提物和醇提物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、变形杆菌均有很好的抑制效果,醇提物的抑菌效果明显高于水提物;新疆细虫草水提物和醇提物均有很好的DPPH自由基清除能力,IC50值分别为1.77 mg/mL和1.23mg/mL,清除能力随浓度增大而增强,当提取液浓度为5mg/mL时新疆细虫草水提物和醇提物的清除率均达到了97%。

新疆短星火绒草不同极性提取物抑菌作用研究

新疆短星火绒草(Leontopodium brachyactis Gandog.)是一种具有代表性的火绒草属植物,在民间很早就被作为药用植物治疗疾病。为进一步开发利用新疆短星火绒草提供依据,本研究利用不同极性的提取剂提取新疆短星火绒草的有效成分,采用滤纸片法和二倍稀释法研究了6种不同提取物的体外抗菌作用,并对50%乙醇提取物进行了最低抑菌浓度(MIC)和最低杀菌浓度(MBC)的测定。结果表明:新疆短星火绒草具有很好的抑菌作用。水提物和50%乙醇提取物均具有较强的抑菌效果,50%乙醇提取物最低抑菌浓度MIC为0.062 5 g/mL最低杀菌浓度MBC为0.125 g/mL,具有广谱性抑菌作用。

贵州绿僵菌液体培养提取物抑菌活性研究

为了开发虫生真菌潜在的抗菌药用价值,寻找结构新颖的活性化合物,本研究采用单菌多产物策略(OSMAC),研究不同碳源、氮源、接种量、接种时间对贵州绿僵菌菌丝体提取物抑菌活性的影响。结果表明:贵州绿僵菌提取物能对13种常见致病细菌中的蜡样芽孢杆菌、缓慢芽孢杆菌和溶血性葡萄球菌产生抑制作用,提取物最低抑菌浓度分别为6.25、1.56、6.25 mg/m L;不同碳源和氮源对贵州绿僵菌液体培养提取物的抑菌活性影响显著,其中淀粉和马铃薯培养液提取物的抑菌效果最好;不同接种量对贵州绿僵菌提取物抑菌效果的影响不大;随着培养时间的增加,抑菌活性依次增强。

兰坪虫草镇痛作用研究

虫草来源多肽的镇痛作用无成瘾性,因而备受关注。兰坪虫草是新近发现的冬虫夏草近缘种,具有较高药用价值。采用小鼠醋酸扭体法模拟试验,分析了野生兰坪虫草、兰坪被毛孢发酵培养物及其不同极性提取部位的镇痛作用。结果表明:与生理盐水比较,野生兰坪虫草和兰坪被毛孢发酵培养物都能显著抑制因冰醋酸所致的小鼠扭体反应,兰坪被毛孢发酵培养物的镇痛效果较好,与阳性对照罗通定的效果更相近。兰坪被毛孢发酵培养物不同极性部分提取物(石油醚部分、乙酸乙酯部分、无水乙醇部分和水提部分)对外周性疼痛都有不同程度的镇痛效果,但单一极性部分的镇痛效果(30.50%~48.96%)都比兰坪被毛孢发酵培养物的效果(84.15%)差得多,说明不同极性部分的成分需要组合起来才能更好地发挥镇痛效果。本研究结果将为兰坪虫草的药用价值研究奠定基础,为兰坪虫草的开发利用提供参考。

三七细胞悬浮培养过程中皂苷生物合成的动力学变化

目的:研究三七细胞悬浮培养过程中皂苷生物合成的动力学变化。方法:将三七愈伤组织进行悬浮培养40 d,用HPLC检测细胞生长过程中皂苷的动态变化。结果:三七愈伤组织悬浮培养生物量增长缓慢,但检测到6种皂苷的含量随培养时间而变化,人参皂苷Rg1、Re、Rh1、Rb1初始培养值分别为3.63、2.34、0.42、0.24 mg/g,培养25～30 d后增至最高,分别为9.72、7.02、2.37、1.86 mg/g,而Rh2、F1含量无明显变化,即三七愈伤组织生物合成过程中原人参三醇型皂苷(Rg1、Re和Rh1)增长显著。结论:三七愈伤组织培养25 d,总皂苷含量达到最高20.58mg/g,主要为原人参三醇型皂苷。

兰坪被毛孢粗多糖延缓衰老的功效研究

兰坪虫草是近几年报道的新种,是冬虫夏草的近缘种,具有较高药用价值。为探明兰坪虫草无性型兰坪被毛孢粗多糖延缓衰老的功效,从兰坪被毛孢发酵产物中提取粗多糖,分析不同浓度粗多糖(0.01%~0.3%)对雌、雄果蝇成虫寿命的影响。结果表明,兰坪被毛孢粗多糖对果蝇成虫的平均寿命、最高寿命和半数死亡时间都有不同程度的延长效果。一定剂量范围内,随粗多糖浓度增加延寿效果提高,但其作用具有浓度的最大阈值。粗多糖浓度达到0.2%时延寿效果最好,使雌雄果蝇的平均寿命延长率分别达到42.17%和21.47%。粗多糖浓度超过0.2%后,其延寿效果反呈现下降趋势。兰坪被毛孢粗多糖的延寿效果还具有性别差异,其对雌果蝇的延寿效果较好。研究结果将为进一步解释兰坪被毛孢的药理活性奠定基础。

兰坪虫草生态学特性研究

兰坪虫草是新近发现的冬虫夏草近缘种，具有较高药用价值，其野生资源逐年减少，有必要加强保护研究。本研究从兰坪虫草生境中的海拔、坡向、土壤、温湿度、植被、寄主食物等方面调查了兰坪虫草的生态学特性，结果表明：兰坪虫草主要分布于横断山区海拔2600~3400m的高山草丛，通常呈片状分布；生境中土壤主要为棕壤或黑褐土，土质较疏松、微酸性，含水量适中；寄主云南蝠蛾的食物多样，主要以草本植物如艾蒿、西南鸢尾、血满草、龙牙草、大理蓟等的幼嫩根茎为食，偶以枯枝落叶层的腐殖质为食；生境中分布的昆虫及病原菌是调节兰坪虫草寄主蝠蛾生态平衡的重要生物因子。本研究结果将为兰坪虫草的仿生态栽培及其资源保护提供参考。

兰坪虫草优良菌株的筛选及其化学成分研究

【目的】筛选兰坪虫草优良菌株,并研究其不同极性部分的化学成分,旨在探究其功能性成分。【方法】通过薄层层析色谱分析(TLC)方法从49株兰坪虫草菌株中筛选出不同极性成分丰富的优良菌株。用不同极性溶剂对优良菌株的发酵产物进行成分萃取,通过硅胶柱层析、薄层色谱层析、凝胶柱层析和重结晶等方法对不同极性部分粗提物进行分离纯化,并对分离到的化合物进行核磁共振氢谱、碳谱测定。【结果】筛选得到综合指标最高的优良菌株OLLJ22,从其发酵培养物不同极性部分粗提物中分离得到31段粗品(乙醇部分10段,乙酸乙酯部分12段,石油醚部分9段),进一步分离和纯化得到7个单体化合物,分别鉴定为脂肪酸、甘油酯、乌苏酸、β-谷甾醇、尿苷、D-甘露醇和有机酸。【结论】对兰坪虫草菌株发酵产物不同极性部分的化学成分进行较系统的分离纯化,鉴定到7个化合物,其中乌苏酸为首次在广义虫草属中分离到。

金铁锁居群在水分限制下的叶解剖结构研究

[目的]对金铁锁居群在水分限制下的叶解剖结构进行研究。[方法]选取引种至实验大田的多年生草本植物金铁锁的2年生实生苗为研究对象,在给水和不给水2种条件下,采用常规石蜡切片法和印迹法,对2个居群的叶解剖结构及气孔的生理特性进行了对比研究。[结果]在冬春季干旱期,不给水栽培条件下的金铁锁表现为叶片上角质层变厚,栅栏组织和海绵组织比值增加,维管束直径增加,主脉木质部维管数增加;叶气孔口变小,气孔密度增加等变化,可以将这些性状的可塑性作为金铁锁居群对水分亏缺作出反应的重要指标。同时,这些指标的变化幅度存在居群间差异。丽江阿西居群在不给水的栽培条件下,叶解剖结构和气孔特性变化显著,从而可能使该居群对干旱环境具有更强的适应能力。[结论]对筛选抗旱金铁锁种质资源及探讨居群在自然干旱条件下的适应性分化具有参考价值。

蒜头果中植物内生真菌烟曲霉的抗菌活性研究

植物内生真菌是一类生活在植物体内的微生物,能够产生化学结构新颖、生物活性多样的次生代谢产物。本研究用纸片法检测从我国特有植物蒜头果中分离得到的植物内生真菌烟曲霉的抗菌活性,并采用单菌多产物(OSMAC)策略寻找植物内生真菌烟曲霉产生抗菌化合物的最佳条件。结果表明:该烟曲霉液体发酵提取物对供试的6种人体致病细菌均有抑菌活性(蜡样芽孢杆菌、副溶血性弧菌、无乳链球菌、福氏志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌),其中对副溶血性弧菌、藤黄微球菌最低抑制浓度达到6.25mg/mL。以马铃薯粉为氮源,麦芽糖或葡萄糖为碳源,提取物得率较大且抑菌活性最好,接种量为60mg/100mL时提取物收获量最高。此外,改变培养温度能提高提取物对除无乳链球菌及藤黄微球菌以外的4种致病菌的抗菌活性。与细菌共培养后对蜡样芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、藤黄微球菌的抗菌活性有所增强,但对副溶血性弧菌、无乳链球菌、福氏志贺氏菌的抗菌活性下降。本研究为植物内生真菌抗菌化合物的开发利用奠定基础。

牛樟芝发酵液提取物抗耐药性细菌活性研究

采用抑菌圈法评价牛樟芝乙酸乙酯提取物对7种多重耐药性人体致病细菌(肺炎克雷伯菌、溶血性葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、粪肠球菌、鲍曼不动杆菌、绿脓杆菌)的抗菌活性,并检测相应致病细菌的最低抑制质量浓度.结果表明:牛樟芝提取物对7种供试细菌均有显著的抗菌活性.对多重耐药性鲍曼不动杆菌的最低抑制质量浓度达到6. 25 mg·m L-1,而质量浓度为50. 00 mg·m L-1的6种抗生素(氯霉素、庆大霉素、氨苄青霉素、链霉素、四环素、卡那霉素)对鲍曼不动杆菌均没有抑菌效果. 50. 00 mg·m L-1的牛樟芝提取物对绿脓杆菌的抑菌效果优于相同质量浓度下庆大霉素、氨苄青霉素、氯霉素.该研究有利于新型抗耐药性细菌药物的研发.

蝙蝠蛾拟青霉的抑菌活性与菌丝体发酵化学组分的研究

目的检测从云南省德钦县白马雪山采集的冬虫夏草分离到的内生真菌蝙蝠蛾拟青霉Paecilomyces hepiali Chen et Dai JY 8-8的抑菌活性,了解其菌丝体发酵物的部分化学组分.方法选择26种病原指示菌,采用纸片扩散法对蝙蝠蛾拟青霉Paecilomyces hepiali Chen et Dai JY 8-8进行抑菌活性试验.采用检测方法 NY/T 1653和GB 5009.5分别检测蝙蝠蛾拟青霉Paecilomyces hepiali Chen et Dai JY 8-8菌丝体发酵物干品中8种矿质元素和总氮的含量.结果蝙蝠蛾拟青霉Paecilomyces hepiali Chen et Dai JY 8-8对病原细菌、植物病原真菌和皮肤致病真菌共19种病原微生物有较为明显的抑制作用.菌丝体发酵物中含有8种矿质元素,总氮平均含量是3.19%.结论蝙蝠蛾拟青霉Paecilomyces hepiali Chen et Dai JY 8-8中存在抗菌活性物质,菌丝体发酵物中化学组分全面,为进一步开发保健药物提供了资源.

6个不同产地铁皮石斛功效成分的分析研究

目的对比6个产地铁皮石斛功效成分的差异,以期为铁皮石斛进一步开发利用以及石斛行业的质量规范提供试验数据支撑。方法通过高效液相色谱法和紫外分光光度法分别测定不同产地3年生铁皮石斛的干燥茎中多糖、D-甘露醇、总黄酮、总皂苷、总生物碱、核苷类成分及甾族化合物等多种化学成分,并对6个产地进行Q-聚类分析。结果浙江省乐清市双峰乡所产石斛的多种功效成分相对较高,聚类结果显示昆明市官渡区所产石斛与文山广南县最为接近,德宏州盈江县石斛与其他产地相距最远。结论铁皮石斛功效成分众多,开发潜力极大,但各地区材料功效成分差异明显,而这些差异与地理位置关联不大,推测种质资源与人工繁育体系影响更大,说明急需统一的质量标准约束。

兰坪虫草多糖组分分析及免疫活性研究

从兰坪虫草中提取多糖,对其分子量、单糖组成和官能团特征进行分析,并探讨兰坪虫草多糖对免疫力的影响。结果表明,兰坪虫草多糖分子量为3.2×10~5 Da,主要由甘露糖、半乳糖和葡萄糖组成,其摩尔百分比为13.38∶5.31∶81.31,可能为含有糖醛酸和吡喃环的酸性多糖。兰坪虫草多糖可显著提高免疫抑制小鼠的免疫器官指数,减少免疫抑制小鼠脾脏组织红髓区域充血,改善碳粒廓清能力,提高免疫抑制小鼠单核-巨噬细胞的吞噬功能,促进抗绵羊红细胞抗体的生成,促使ConA诱导的T淋巴细胞增殖,提高免疫相关细胞因子IL-2和IL-10的基因表达水平,说明兰坪虫草多糖具有增强小鼠免疫力的作用。

云南虫生真菌粉棒束孢遗传分化研究

对云南粉棒束孢8个当地居群和蝙蝠蛾拟青霉2个当地居群进行ITS测序和RAPD扩增分析,结合Gen Bank中相关序列,对粉棒束孢开展遗传多样性、居群遗传结构及其种内分化研究。共获得大范围内地理距离远的6个居群共97条粉棒束孢ITS序列,共有33种单倍型,单倍型多样性Hd=0.546和总核苷酸多样性Pi=0.00276,显示粉棒束孢在物种水平上遗传多样性较低。云南粉棒束孢共37条序列,有14种单倍型(10种为云南特有),具有较高单倍型多样性和核苷酸多样性(Hd=0.659,Pi=0.00274);单倍型聚类和网状分支分析表明云南粉棒束孢单倍型类型丰富,遗传多样性高,暗示云南为粉棒束孢多样性分布中心之一。ITS序列分析表明,云南当地居群间遗传分化系数Fst=51.95%;RAPD分析表明,居群间遗传分化系数Gst=0.5547,基因流Nm=0.4014;说明云南当地居群粉棒束孢分化剧烈。居群遗传距离与地理距离相关性研究表明,粉棒束孢居群遗传距离与地理距离无明显相关。中性检验和失配分析表明粉棒束孢经历过近期居群扩张。结合单倍型聚类和网状分支分析,表明Hap 19为扩张建群单倍型,但原始祖先单倍型(Hap 1)依然是粉棒束孢居群中最优势单倍型(频率为48.45%),表明粉棒束孢并不存在明显的因地理原因造成的生殖隔离。值得重视的是,通过ITS单倍型和RAPD分析,支持将蝙蝠蛾拟青霉作为粉棒束孢异名处理。