汤洪敏云南野生大白口蘑遗传多样性研究

应用DALP技术对云南野生大白口蘑遗传多样性进行分析.筛选的5组引物在大白口蘑6个菌塘的56朵子实体中检测到202个位点,其中多态位点151个,多态位点百分比PPB为74.75%.6个菌塘总的观察等位基因数Na为1.7475;总的有效等位基因数Ne为1.4659;Nei＇s基因多样性指数H为0.2722;总的Shannon多样性指数I为0.4053;菌塘总的基因多样度Ht为0.2705,菌塘内基因多样性度Hs 为0.012,菌塘间基因分化系数 Gst 为0.9556,菌塘的遗传一致度在0.60～0.80之间.结果表明大白口蘑遗传变异有95.56%存在菌塘间,4.44%存在菌塘内,即大白口蘑遗传变异绝大多数存在于菌塘之间.

三七栽培居群遗传多样性的EST-SSR分析

利用EST-SSR标记分析比较6个文山三七居群的遗传多样性和遗传结构,并以2个近缘种为对照进行聚类分析。17对人参属EST-SSR引物在8个居群中共检测到205个多态位点。在居群水平上,6个三七栽培居群的平均多态性信息量为0.729,Ne i′s基因多样性为0.1568,Shannon多样性指数为0.2466,居群间的遗传分化系数为0.2350。研究显示三七具有丰富的遗传多样性,但彼此间具较高的基因交流,居群间遗传分化水平低,遗传差异主要存在于居群内;另外,遗传相似度和聚类分析显示,三七及其近缘种被划分为3个大类群,6个三七栽培居群被分为3个小类群,三七与珠子参有较近的遗传关系,而与屏边三七的遗传距离较远。

莲瓣兰DALP遗传多样性研究

采用DALP(Direct amplification of length polymorphism)检测莲瓣兰5个居群的遗传结构。5个引物组合共检测到103个多态位点。和其它具有相似生活史(多年生草本、以动物为媒介的杂交、种子随风散布)的物种相比,莲瓣兰原变种水平(PPB=88.18%,A=1.8818,Ae=1.4880,H=0.2911,I=0.4412)和物种水平(PPB=93.64%,A=1.9364,Ae=1.5262,H=0.3129,I=0.4732)均具有较高的遗传多样性;各居群间(Gst=0.3292)存在较大的遗传分化。基因流的估计值(Nm=1.0186)表明莲瓣兰物种水平上各居群间每代有1.0186个移居个体。地理隔离和选择压力可能是造成莲瓣兰居群间基因流动受到限制的原因。在这些研究的基础上,探讨了野生莲瓣兰资源的保护问题。

云南淡黄花百合10居群核型研究

对云南淡黄花百合 10个居群核型进行了研究 ,结果如下 :普洱居群 2n =2x =2 4 =4m(4SAT ) +8st (1SAT ) +12t;大湾居群 2n =2x =2 4 =4m (4SAT ) +4sm (1SAT ) +6st +10t ;宝山居群 2n =2x =2 4 =4m (4SAT ) +4st (1SAT ) +16t ;元阳居群 2n =2x =2 4 =4m (4SAT ) +8st(1SAT ) +12t;玉屏山居群 2n =2x =2 4 =4m (4SAT ) +4sm (1SAT ) +12st +4t;易门居群 2n =2x =2 4 =4m (4SAT ) +2sm +14st (1SAT ) +4t ;峨山居群 2n =2x =2 4 =4m (4SAT ) +2sm +14st(1SAT ) +4t;老鹰地居群 2n =2x =4m (4SAT ) +2sm +14st (1SAT ) +4t;双柏居群 2n =2x =2 4 =4m (4SAT ) +12st (1SAT ) +8t;牟定居群 2n =2x =2 4 =4m (4SAT ) +8st (1SAT ) +12t。研究表明各居群的核型都属于Stebbins的 3B型 ,不同居群间存在染色体类型和随体染色体的多型性 ,同时还发现了B染色体和 4倍体染色体数目变异 ,本文最后讨论了云南淡黄花百合种内居群间核型分化的原因。

云南5种百合形态多样性研究

利用SAS统计软件对卷瓣组紫斑百合2个居群、川百合2个居群、宝兴百合1个居群、卷丹1个居群以及外类群泸定百合1个居群的17个可测量性状进行统计分析。旨在从形态学角度阐明这7个居群的变异式样。所测量的17个数量性状都具有多样性。方差百分率在种水平上分布较高,卷瓣组百合种间差异明显。在紫斑百合2个居群中,变异主要来源于居群内个体间,即居群内多样性丰富。川百合与紫斑百合相同居群内存在着较大的遗传变异。在Q-聚类分析中7个居群被聚为两大类-卷瓣组及外类群。这一结果与经典分类一致。在R-聚类分析中17个性状被分为4类,第一主成分主要由花部各性状组成,其贡献率已达50 95%。对该组植物进行形态学分析时,花部特征应受到充分的重视。

正交实验法优化千金藤属植物的DALP反应体系

目的建立一套稳定的千金藤植物DALP反应体系,为开展该属植物的DALP分子标记奠定基础.方法采用正交实验设计,以云南地不容Stephania yunnanensesLo与地不容Stephania epigaeaLo基因组DNA为模板,对DALP反应程序的重要参数进行优化.结果最佳的反应体系为20μL,包含模板DNA2.0μL,2.5 mmol/L的MgCl22.5μL,2.5 mmol/L的dNTPs 2.0μL,5 pmol/L的选择性引物1μL,5 pmol/L的反向引物3μL,0.5 U/μL的Taq酶5μL,10×Buffer 2.0μL,灭菌超纯水2.5μL.结论该DALP应用反应体系稳定、可靠、重现性好,可有效的地应用于千金藤植物的种间及居群间分类鉴定.

火焰原子吸收光谱法测定中草药川东獐牙菜中的八种微量元素

用火焰原子吸收光谱法对川东獐牙菜中K,Ca,Na,Mg,Fe,Zn,Mn和Cu八种微量元素进行了分析测定。结果显示,用HNO3-HClO4（5∶1）混酸作消化液处理样品,精密度和回收率较好。在选定的实验条件下,川东獐牙菜各元素间相互不干扰,可在一份样品液中进行八种元素的分别测定。川东獐牙菜中含有较丰富的K,Ca和Na,以及Mg和Zn,其含量K〉Ca〉Mg〉Na〉Zn〉Fe〉Cu〉Mn。方法的检出限均小于0.097μg·mL^-1,RSD≤2.34%（n=8）,加标回收率89.32%-106.65%。

大白口蘑生物学特性的观察

大白口蘑Tricholoma giganteum Massee,是一种大型簇生的食、药用真菌（Chang ＆ Mao,1995）。从大白口蘑菌丝发酵液中分离出的多糖蛋白复合物（PSPC）具有抗癌活性并能提高免疫反应（Liu et al．, 2000）。其子实体中含有angiotensin I-converting enzyme血管紧张素Ⅰ转变酶（ACE）抑制肽,该抑制肽作为一种主要抑制物能竞争性抑制ACE的活性,因此具有抗高血压的药效（Lee et al．,2004）。

ICP-AES法测定滇重楼中的微量元素

探讨滇重楼中多种金属元素的测定方法,采用湿法硝酸-双氧水进行消解,用电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)同时测定试样中钾、镁及多种微量元素铅、铜、铁、铬、锌和锰等的方法。其检出限为0.0013～0.0846μg.mL-1,变异系数为0.7%～4.6%,回收率在93.7%～108.2%,结果令人满意。发现中药滇重楼中含有比较丰富的铁元素,微量元素在中药中可能起到一定的药理作用,用ICP-AES测定中药微量元素以评价中药价值具有重要的意义。

半夏中铜和锰的原子吸收光谱直接测定方法

报道了用次灵敏线原子吸收光谱法直接测定半夏中高含量Cu和Mn的分析方法;解决了以往高Cu和Mn半夏测定中,由于称样量小、稀释倍数过大所引起的分析误差;Cu和Mn的线性范围分别为0～25mg·L-1和0～12mg·L-1,相对标准偏差分别为0·42%和0·66%,加标回收率分别为96%～103%和97%～102%;该方法简便、快速、实用性强,已广泛应用于实际半夏样品的分析,获得满意结果。

昆明地区滇韭形态及染色体多态性研究

对昆明地区滇韭的 8个当地居群开展了形态及核型研究 ,并对形态及染色体性状进行了巢式方差分析。结果表明 :滇韭的形态性状在居群内具丰富多态性 ,在居群间具明显多型性 ;核型较对称 ,存在两种倍性的分化 :梁王山居群为二倍体 (2x) ,昆明居群为四倍体(4x)。二倍体核型公式为K (2n ) =2x =16 =14m +2sm ,四倍体核型公式为K (2n ) =4x =32=2 8m +4sm。滇韭的染色体因存在倍性变化、B -染色体形态和数目变化及随体染色体的形态和大小变化而具有一定程度的多态性。

巨大口蘑中微量元素的光谱测定

采用火焰原子吸收法同时测定了巨大口蘑中K,Ca,Na,Mg,Fe,Zn,Mn和Cu8种微量元素的含量。方法的相对标准偏差介于0.1%～2.2%,回收率介于98.1%～106.4%。结果表明,巨大口蘑中Zn,K,Ca,Mg和Mn等人体必须的生命元素含量较高,揭示了巨大口蘑具有较高的营养价值。

云当归与土壤中微量元素的测定及其相关性分析

采用电感耦合等离子体原子发射光谱(ICP-AES)法对云当归以及土壤中11种微量元素进行了分析。结果显示,土壤中微量元素的含量依次为Zn>Cu>Pb>Fe>Mg>Mn>Ni>Cr>Cd>As>Hg;云当归中Mg、Fe、Mn、Zn中含量较高,而As、Cd、Cu、Pb、Hg等元素中含量相对较低,均低于药典标准。土壤中As与Cr、Pb与Zn存在极显著正相关(r=0.785,0.808);Mn与Cr存在极显著负相关(r=-0.733),As与Cu存在显著负相关(r=-0.631)。云当归中Fe与Ni极显著正相关(r=0.731),Cd与Cu极显著负相关(r=-0.714);Zn与Hg显著相关(r=0.655),Ni与As、Fe与Pb、Fe与Cd显著负相关(r=-0.658,-0.637,-0.673)。云当归与土壤中的As存在显著相关(r=0.707)。

亚洲系百合九个品种的亲缘关系研究——来自nrDNAITS证据

对亚洲系百合9个品种的nrDNA的内转录间隔区(ITS)进行了PCR扩增和产物直接测序,扩增出约670bp的序列(ITS1、5.8S和ITS2及部分18S和26SrRNA基因片段)。选取亚洲系百合祖先种泸定百合和岷江百合等6个野生种序列为参考外类群,确定其ITS全序列(ITS1、5.8S和ITS2)的长度约为627bp,并根据nrRNAITS区碱基序列差异计算品种间的遗传距离和构建UPGMA系统树,探讨了9个百合品种之间的亲缘关系。

黄褐牛肝菌子实体营养成分分析

采用氨基酸分析仪、原子吸收分光光度计等测定了黄褐牛肝菌(BoletusimpolitusFr.)子实体中的氨基酸、矿质元素、可溶性总糖、粗蛋白、粗脂肪、灰分和粗纤维含量。结果表明,黄褐牛肝菌子实体富含蛋白质和矿物质,并含有18种氨基酸,其中8种必需氨基酸含量占氨基酸总量的40.53%;其子实体中铅、镉、砷含量均在国家规定的食品安全标准范围之内。

云南桃儿七遗传多样性的DALP分析

目的进行药用植物桃儿七Sinopodophyllum hexandrum的遗传多样性研究,为桃儿七资源的保护和开发利用提供分子遗传理论基础。方法对6个桃儿七居群进行DALP分析,利用PopGene 1.31软件分析遗传多样性相关数据,UPGMA方法聚类,结合Treeview软件生成树状图。结果筛选5对引物组合,扩增共产生150条DNA片段,其中104条谱带具有遗传多态性,占69.33%,平均每组引物扩增所得多态条带为20.8,6个居群平均多态百分率为14.22%。6居群总的观察等位基因数Na为1.693 3,平均1.142 2;总的有效等位基因数Ne为1.417 1,平均1.083 8;基因多样性指数H为0.244 3,平均0.048 8;总的Shannon多样性指数I为0.364 3,平均0.073 0;居群总的基因多样性Ht为0.244 3,居群内基因多样性Hs为0.048 7。基因分化系数Gst为0.800 5,即遗传变异有80.05%发生在居群间,19.95%发生在居群内,居群每代迁移数Nm为0.124 6。结论桃儿七居群间存在较大的遗传分化,基因流受到阻碍,这与桃儿七的繁育系统和生存环境紧密相关。

影响杏黄兜兰种子萌发的因素

通过在不同条件下杏黄兜兰 (Paphiopedilumarmeniacum)种子萌发的观察 ,对影响其萌发的诸因子报道如下 :1)果实的生长期与种子的萌发率有关。实验表明种子采自生长期为 6 0d的果实 ,发芽率为 3 5 % ,采自 12 0d的果实 ,发芽率为 4 0 % ,采自 180d的果实 ,发芽率为 18 3%。 2 )培养基也会影响到种子的萌发 ,种子在 1 5MS内培养 ,萌发率明显高于培养于MS ,RE和改良HyponexNo 1内的种子。 3)培养基 (1 5MS)掺入添加物也会影响到种子的萌发率 ,如掺入 10 %椰子水会促使种子的萌发率达到很高的水平 ,掺入马铃薯泥 (5 0g L)或胰化胨 (2g L) ,种子的萌发率会达到较高的水平 ,而掺入香蕉泥则会对种子的萌发率产生负面影响 ,掺入活性炭 (2g L)会促使种子萌发和幼苗发育。 4 )与固态培养基相比 ,种子在液体悬浮培养基内的萌发速度更快 ,幼苗更为整齐划一。

流动注射-冷原子吸收法测定黄褐牛肝菌中的痕量汞

探讨了流动注射还原气化-冷原子吸收光谱法测定微量汞时的最佳条件,建立了黄褐牛肝菌中痕量汞的流动注射还原气化-冷原子吸收光谱分析方法。本法操作简便、快速、灵敏度高,自动化程度高,测定汞的线性范围为0～60μg.L-1,相对标准偏差小于3.0%,加标回收率为96%～107%。应用于实际黄褐牛肝菌样品中痕量汞的测定,结果满意。

韭不同倍性及其非整倍体的ITS序列变异研究

对不同倍性及其非整倍体韭Alliumtuberosum和野韭Alliumramosum核糖体DNA的内部转录区 (ITS)进行了PCR扩增和克隆 ,并测定 10个ITS1和ITS2的序列 ,用ITS1+ITS2的序列探讨Alliumtuberosum和Alliumramosum的系统发育关系。研究表明 ,Alliumtuberosum与Alli umramosum种间的平均Kimura遗传距离仅为 0 0 14 6 ,二者是一对近缘种。虽然韭经历了长期的人工选择和自然选择 ,但与野韭的分化仍然较小。韭不同倍性及其非整倍体之间 ,其ITS序列亦无明显差异。