人细胞因子IL-12p70与结核分枝杆菌特异性抗原Ag85A融合基因重组卡介苗的构建及鉴定

目的:构建可表达融合蛋白IL-12p70-Ag85A的重组卡介苗,为结核病新疫苗的研制奠定基础。方法:以穿梭表达质粒pMV361为载体,构建重组质粒rpMV361-IL-12p70-Ag85A。将成功构建的重组质粒以电转化方式导入BCG基因组构建重组卡介苗rBCG-IL-12p70-Ag85A。通过抗生素筛选、重组卡介苗基因组PCR扩增及测序,以及western-blotting对重组卡介苗进行鉴定。结果:经鉴定,重组卡介苗成功构建,并可表达融合蛋白IL-12p70-Ag85A。结论:重组卡介苗rBCG-12p70-Ag85A构建成功,并可高效表达目的蛋白。

葛根素减轻乙醇导致大鼠生精细胞的凋亡

目的观察乙醇导致大鼠生精细胞的凋亡及葛根素的干预。方法将大鼠30只随机均分为对照组、乙醇组及葛根素干预组。于实验第40天免疫组织化学法(SABC)检测左侧睾丸各组BCL-2、BAX蛋白在生精细胞的表达;RT-PCR检测右侧睾丸各组BCL-2及BAXmRNA的表达;TUNEL法检测生精细胞的凋亡。结果乙醇组平均每个生精小管断面中BCL-2蛋白阳性细胞数和A值低于对照组(P<0.01),而平均每个生精小管断面中BAX蛋白的阳性细胞数和A值高于对照组(P<0.01);乙醇组BAXmRNA表达较葛根素干预组及对照组强(P<0.05),而BCL-2mRNA表达较葛根素干预组及对照组弱(P<0.05);乙醇组每个生精小管横切面中的凋亡细胞数目高于对照组(P<0.01),葛根素干预组显著缓解上述变化。结论葛根素对乙醇导致的大鼠生精细胞凋亡有干预作用。

双侧肌皮神经变异与正中神经交通一例

笔者在解剖1例12～13岁男童尸体（身高约1．5m）标本时，发现其左、右侧肌皮神经在臂部行程异常。经查阅有关文献，双侧变异同时存在未见报道，为积累解剖学资料并为临床工作提供形态学依据，现报道如下。

胚胎早期心脏发育中Bax、Bcl-2及NF-κB的表达及对心肌细胞分化的调控

目的:研究Bax(Bcl-2 associated X protein)、Bcl-2(B-cell lymphoma-2)蛋白及NF-κB(nuclear factorkappa B)在胚胎心脏发育中对心肌细胞分化的调控作用。方法:取大鼠妊娠8.5～14.5d(E8.5～E14.5)胚胎30只通过组织学及免疫组织化学SABC法观察大鼠早期胚胎心脏的发育过程以及Bax、Bcl-2蛋白及NF-κB在胚胎心脏的表达。结果:大鼠早期胚胎心脏发育中,E8.5,原始心管形成,未见Bax蛋白及NF-κB阳性反应,但Bcl-2呈阳性表达E10.5,心房、心室形成,心肌细胞开始表达Bax、Bcl-2及NF-κB,一直持续表达至E14.5。结论:Bax、Bcl-2及NF-κB在心脏早期发育中可能通过凋亡来调控心肌细胞的分化。

重组结核病疫苗rBCG-IL-12p70-TB10.4的免疫效应

目的将成功构建的重组卡介苗rBCG-IL-12p70-TB10.4免疫BALB/c小鼠,研究其免疫效应,为结核病新疫苗的研发提供依据。方法将融合基因IL-12p70-TB10.4克隆入pMV361构建重组质粒,以电转化方式将重组质粒导入卡介苗基因组,构建重组结核病疫苗rBCG-12p70-TB10.4（rBCG-IT）。将此重组卡介苗免疫BALB/c小鼠,分别于免疫后3、6、9和12周,用间接ELISA检测特异性抗体滴度水平,XTT检测脾细胞增值反应,流式细胞仪检测脾CD4＋T、CD8＋T细胞亚型的比例,ELISA试剂盒检测细胞因子的诱生。结果在免疫后3-12周,rBCG-IT组脾细胞增殖反应均明显强于其他各组（P〈0.01）,该组IFN-γ诱生量及CD4＋T细胞比例均显著高于rBCG-I组、rBCG-T组及BCG组（P〈0.01）。IgG2a/IgG1比值在免疫后各时间点的变化趋势提示rBCG-IT可诱导Th1型细胞免疫应答。结论重组疫苗rBCG-IT可诱导产生较BCG更强、持续时间更长的特异性细胞免疫应答,可对其免疫保护作用进行深入研究。