云南烟草丛枝症病害研究 Ⅺ 病原研究:类病毒问题

感染云南烟草丛枝症病害的病苗的细胞切片中观察到类似于旁壁体的质膜体，旁壁体是类病毒侵染植物形成的特征病变结构，但多次双向电泳实验均未检测到类病毒分子，质膜体的形成可能和莫笑晗等发现的与云南烟草丛枝症病害相关的稳定ＲＮＡ有密切关系，但线性开环结构和失活温度说明其不具有类病毒核酸特征．

云南烟草丛枝症病害研究 V传染途径

在隔离环境中，按植物病毒学的标准程序，测试云南烟草丛枝症病害的传染途径，结果表明：云南烟草丛枝症病害具有广泛的传染途径，可以通过机械传染（嫁接、摩擦）和介体传染（菟丝子、蚜虫、烟盲蝽、叶蝉）等方式传播．

云南烟草丛枝症病害研究 VI综合防治技术的研究与示范推广

１９９４至１９９８年，在云南烟草丛枝症病害的重病区进行药剂治疗和治虫防病等研究，并进行大面积综合防治技术示范（３１１５ｈｍ２）和推广工作（６４０３２ｈｍ２），结果表明：抗生素类药剂和抗病毒制剂无治疗效果，单纯治虫防病的效果也不理想，采用以网罩隔离育苗培育无毒苗、药剂控制传媒昆虫、淘汰和更换病苗、保健栽培为技术核心的综合防治措施，能够有效地控制病害的发生和流行，防治效果在９５％以上．

云南烟草丛枝症病害研究 Ⅶ 激素的变化

采用植物激素ＥＬＩＳＡ测定试剂盒，对比测定了烟草感染丛枝症的病株与健株体内细胞分裂素（ｉＰＡ和ＺＲ）与生长素（ＩＡＡ）含量的变化．结果表明：生长素含量在整个发病期间健株都较高于病株，细胞分裂素含量在发病初期明显高于健株，随后呈下降趋势并趋于稳定，Ｃ／Ａ值在病程中相对处于较高水平．

云南烟草丛枝症病害研究I田间发病规律

系统地调查云南烟草丛枝症病害的田间自然发病情况和介体发生情况，并实验测定烟草品种的抗病性，结果表明：烟草丛枝症病害在病区常年均有发生，最早发病时间在４月下旬，保山市１９９４，１９９５和１９９７年属一般年份，１９９３，１９９６和１９９８年属流行年份，导致病害流行的主要因素是苗期和移栽初期的两次蚜虫迁飞期高峰，以网罩隔离培育无毒烟苗、避开蚜虫迁飞高峰期移栽并同时施药是最有效的防治方法．目前生产上审定推广的品种全为高感品种，测定３１个烤烟和１４５个晒晾烟品种未发现抗病品种．

云南烟草丛枝症病害研究 II细胞的超微病变

超薄切片观察云南烟草丛枝症病害的病叶组织，并抽提试验材料的总核酸电泳检测，结果表明：病组织中检测到与烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ，切片中未观察到病毒粒子，薄壁细胞中发现细胞膜系统的畸变：质膜体（ｐｌａｍａｌｅｍｍａｓｏｍｅ）和双层膜泡囊（ｄｏｕｂｌｅｍｅｍｂｒａｎｏｕｓｖｅｓｉｃｌｅｓ）．质膜体由细胞质膜或液泡膜伸入空泡形成，直径约１０００～２０００ｎｍ，结构类似于类病毒侵染寄主形成的旁壁体．双层膜泡囊是含纤维状物内含物的泡囊，直径约１００～２００ｎｍ，结构类似于某些病毒侵染寄主形成的细胞质泡囊（ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃｖｅｓｉｃｌｅｓ）和植原体（ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａｓ），但因其广泛分布于寄主细胞中，不能认为是植原体．文献显示这些病变是类病毒和某些病毒侵染的特征，初步认为云南烟草丛枝症病害可能是病毒病害，发病早期细胞内出现小分子核酸侵染的细胞病变特征，此与莫笑晗等发现病株体内含有大量低分子量ＲＮＡ可能有密切关系．

云南烟草丛枝症病害研究 I病害的症状学及其病程

以云南烟草丛枝症病株为毒源，通过蚜虫传染接种大十字期、猫耳朵期、摆盘期、团棵期、旺长期和现蕾期的烟株，观察症状反应并检测与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ．研究表明：云南烟草丛枝症病害的病程可分为４个阶段：潜育期、过敏反应期、缩顶期和丛枝期，烟株从感染到表现丛枝要经过约１个月；蚜虫接种后约１周，在蚜虫口针刺吸部位开始出现褪绿斑，继而产生强烈的过敏反应，即从褪绿斑中心开始坏死出现蚀点斑，叶片上布满坏死斑纹，有典型的环纹和蚀纹，严重的烟株叶片破裂，细脉坏死；随后进入缩顶期，烟株生长缓慢，叶间距明显缩短，顶部几乎成为一个平面，叶色稍黄，大十字期和猫耳朵期接种烟株缩顶后生长极其缓慢，萎缩成为僵苗，不表现丛枝症状，也不会开花结实；感染约４周后，摆盘期、团棵期、旺长期和现蕾期接种的烟株开始腋芽丛生，生长速度加快，几天后便表现为典型的黄化丛枝症状，叶黄化且变圆，能够开花结实．其症状和文献记载的所有烟草丛枝、丛顶和丛蔟类病害有明显区别，初步认为是１种未见记载的新病害，建议称之为“烟草簇矮病（Ｔｏｂａｃｏｂｕｓｈｙｄｗａｒｆ）”．文中附病程症状图２版．

云南烟草丛枝症病害研究 Ⅷ 验证与烟草丛枝症病害相关的稳定RNA

来自云南省２２个县市的烟草丛枝症标本均检测到与云南烟草丛枝症病害相关的稳定ＲＮＡ，大小相当于８００ｂｐ左右的ＤＮＡ；病株的根、茎、叶、花和枯叶中含有此ＲＮＡ，种子中未检测到此ＲＮＡ；此ＲＮＡ的最大吸收峰为２６９ｎｍ；能被蛇毒磷酸二酯酶Ｉ消化，不具有类病毒结构特征，推测可能是病毒的基因组分；支持莫笑晗等对此ＲＮＡ的结构推测，即可能是有广泛内部配对、具有类似发叉结构的线性长度为１６１ｋｂ的单链ＲＮＡ．与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ目前发现的超稳定ＲＮＡ．

云南烟草丛枝症病害研究 Ⅸ 追踪致病因子

云南烟草丛枝症病害病株的粗汁液、ＰＥＧ沉淀物、粗提纯物、酚处理物、总核酸均具有致病性．

云南烟草丛枝症病害研究 IV建立标准毒株

以蚜虫传染发生云南烟草丛枝症病害的烟株为材料进行组织培养，连续培育３代，以第３代组培烟苗为毒源经蚜虫传染健康烟株，提取毒源和各实验烟株的总核酸进行琼脂糖凝胶电泳．结果表明：第３代组培烟苗为毒源经蚜虫传染的烟株发病表现丛枝症，并检测到与云南烟草丛枝症病害相关的低分子量ＲＮＡ．说明与云南烟草丛枝症病害相关的病原能在寄主离体培养组织中长期保存，成功建立云南烟草丛枝症病害的标准毒株．

云南烟草丛枝症病害研究 ⅩⅤ 白肋烟品种的抗性测定

采用人工接虫方法， 对２１５ 个白肋烟品种进行了抗烟草丛枝症病害的抗性测定， 有７个品种表现较好的抗性， １１ 个品种表现出中抗， ３８ 个品种表现出中感， １５９ 个表现出感高感．

气候条件对大理州烤烟产量和质量的影响

为了进一步深入的了解气候条件对大理州烤烟生产的影响,利用1985～2010年大理州烤烟生产数据和气象资料通过相关分析和烤烟气候年景分析探讨了气候条件对大理州烤烟产量和质量的影响。结果显示,整个烤烟生育期的气候条件都对烤烟产量和质量有明显影响,大田期的影响更为突出。在移栽期和旺长期烤烟高产和优质对气候条件的要求有明显差异,而成熟期对气候条件的要求基本一致。由于烤烟产量对质量有一定的制约作用,适当限产有利于提高烟叶质量,实现烤烟效益最大化。

云南烟草丛枝症病害研究 ⅩⅥ 网罩隔离培育无毒烟苗防治病害

云南烟草丛枝症病害是经烟蚜和烟盲蝽传染的病毒病， 在 “治虫防病”为主的防治技术的基础上， 本文研究网罩隔离技术培养无毒烟苗应用于大田控制病害的方法， 并进行一定面积的技术示范工作， 结果表明： 网罩隔离育苗在田间成功地培育出无毒烟苗， 病苗率为０２３ ％ ～３６ ％ ， 较对照下降约７５ ％ ～９５ ％ ， 移栽后结合优质烟栽培技术， 封顶时烤烟的田间发病率为２ ～５ ％ ， 说明以无毒苗应用技术为核心、辅之介体控制和病苗拔除等技术的综合防治体系能够有效和稳定地控制烟草丛枝症病害的危害．

大理州植烟土壤肥力质量现状与演变趋势

在大理州乡镇、村、户典型的连片烟田作了调查访问 ,并采集了 5 0 6个耕层土样进行系统的化验。结果发现 ,本州植烟土壤肥力质量的主要指标有蜕化的趋势 ,土壤有机质平均 2 7.7g/ kg,有下降趋势 ;p H平均值 6 .4 7,呈酸化趋势 ;有效磷 P2 O5平均 2 7.2 3mg/kg,老烟区已累积偏高 ,且有继续上升趋势 ,对烟叶生产不利 ;速效钾 K2 O平均 189.15 mg/ kg,总体水平较高 ,有上升趋势 ,但也有水平偏低的 ;交换性镁 Mg平均 139.5 mg/ kg,约一半土壤偏低 ;速效硼 B0 .31mg/ kg,普遍缺乏或偏低 ;有效钼 Mo平均 0 .2 4 mg/kg,约 1/ 3缺乏 ;速效硫、钙、锰、铁、铜含量偏高 ,而含氯量偏低。烤烟施肥应减氮减磷稳钾 ,普遍施硼 ,因土施镁。在土壤 p H<5 .5时 ,应适施石灰 ,调节酸度。有机无机相结合 ,适当改变氮肥形态防治土壤进一步酸化。实施科学施肥确保植烟土壤可持续利用。

云南烟草丛枝症病害研究 ⅩⅣ 感染时期与病害发生及经济性状的相关性

以云南烟草丛枝症病株为毒源， 通过蚜虫传染接种不同生育期的烤烟， 测定烟株的发病率， 以及烤烟生物学性状和产量产值的变化． 结果表明： 烤烟整个生育期都会感染烟草丛枝症病害， 感染时期与发病率相关性不显著， 但与潜育期相关性极显著， 烟叶产量田间损失率取决于感病时期， 相关方程为： Ｙ＝ １２９４１９ － １７１７ Ｘ （ Ｘ 为假植至接种的天数） ． 由此可确定适宜的防治时间， 测定防治效果， 对提高防效和增加效益具有重要意义．

烟草DNA的提取与SRAP反应体系优化

以8个烤烟栽培品种为试验材料,对烟草基因组DNA的提取方法进行比较,并对建立烟草SRAP-PCR反应体系的影响因子设置梯度试验.结果显示:改进的CTAB法能较好地满足烟草基因组DNA的提取,在20μLSRAP-PCR的反应体系中,DNA模板40ng、Mg2+1.5mmol/L、dNTP0.25mmol/L、引物0.2μmol/L、Taq聚合酶1.5U,8个烤烟品种的扩增多态性高,带型清晰,差异明显.

万寿菊对烟草根结线虫的杀线活性

[目的]探究万寿菊不同组织粗体物和α-三联噻吩的杀线活性。[方法]以线虫拮抗植物万寿菊为试验材料,烟草根结线虫为靶标,分别测定和比较了不同浓度万寿菊各部分组织粗提物的杀线活性、万寿菊各部分组织粗提物中α-三联噻吩的含量以及α-三联噻吩标准品的杀线活性。[结果]万寿菊的各部分组织粗提物中,叶和花的杀线活性较高;万寿菊中起主要杀线作用的活性物质不是α-三联噻吩。[结论]试验结果为寻找烟田中环境友好型杀线虫剂的研究与应用提供了理论依据。

烟草赤星病对不同部位烟叶产值量的损失研究

在烤烟调制期分下二棚叶、腰叶、上二棚叶及顶叶四个部位,进行赤星病不同危害程度对烟叶产值量的损失研究.结果表明:烤烟受赤星病的危害后,腰叶、项叶各危害级别间产量损失差异不显著;下二棚叶、上二棚叶当危害达3～4级时烟叶产量出现损失;下二棚叶病害级别与产量损失呈显著负相关;上二棚叶、顶叶病害级别与产量损失呈极显著强负相关.当危害程度达0.5级时,各部位烟叶值量开始下降,并随危害加重,值量损失逐渐增大;顶叶病害级别与值量损失呈显著负相关,下二棚叶、腰叶、上二棚叶病害级别与值量损失呈极显著强负相关.各部位烟叶病害级别与中等烟比例呈极显著强负相关,病害级别与下等烟比例呈极显著强正相关.

从烟草丛顶病病原复合物中分离烟草扭脉病毒的方法

烟草丛顶病是由烟草丛顶病毒（TBTV）、烟草丛顶病毒类似卫星RNA（Sat-TBTV）、烟草扭脉病毒（TVDV）和烟草扭脉病毒相关RNA（TVDVaRNA）复合侵染引起的一类特殊病害,目前尚不清楚这些病原物各自在病害症状形成和病害传播中的作用。本文根据蚜虫传播烟草丛顶病复合病原物传毒特性的差异,探索了3种分离TVDV的生物学方法。方法A为将获得了烟草丛顶病复合病原物的蚜虫饥饿24h后,以单虫单苗的方式接到健康烟株上传毒,24h后灭虫。方法B为将无毒蚜虫饥饿2-4h后转接到感病烟株上饲毒48h,再以单虫单苗的方式接到健康烟株上传毒,24h后灭虫。方法C为将无毒蚜虫于感病烟株上饲毒48h后,以单虫单苗的方式接到健康烟株上传毒24h,此后每隔24h将蚜虫移到另一健康烟株上传毒,直到蚜虫死亡。其中方法 A和B均可将TVDV从烟草丛顶病病原复合体中分开,方法A操作简单、分离周期短且TVDV的分离效率高。单独TVDV侵染的烟株无明显的丛顶症状,叶片靠近主脉的地方会出现皱缩,生长后期叶片变得细长且顶端会发生扭曲。本试验可为研究TVDV与其他病原物、寄主植物和传播介体的相互作用提供很好的试验材料,也可为蚜虫传播的复合侵染病毒的生物学分离提供参考。

云南烤烟新品种与常规品种的种质特性比较研究

为了验证大理新品种的种子品质,探索它们与遗传亲本之间的关系和差异,为新品种的鉴定提供一定的试验依据,对种子的物理性状、人工培育箱中各品种的萌发特性进行了初步的分析,并通过自动分析仪测定了蛋白质、淀粉和氧化钾的含量。结果表明:常规品种云烟85综合表现最好,4个大理新品种在种子千粒重、发芽率、发芽指数、活力指数、发芽速率、蛋白质含量等方面较其它的3个常规品种都表现出一定的优良性,值得在生产中试用。