德宏奶水牛FASN基因乳腺组织表达及生物信息学分析

【目的】研究德宏奶水牛乳腺组织FASN基因表达水平及水牛FASN蛋白的生物学特性。【方法】用乳成分分析仪测定乳脂率,并按照乳脂率将德宏奶水牛分为高(H)、中(M)、低(L)组;运用qPCR法测定乳腺组织FASN基因的表达水平,分析其与乳脂率的相关性;运用生物信息学方法分析水牛FASN蛋白的理化性质及结构特征。【结果】H组德宏奶水牛乳腺组织的FASN基因表达水平极显著高于L组和M组(P<0.01),M组极显著高于L组(P<0.01),其mRNA表达水平与乳脂率呈极显著正相关(P<0.01)。水牛FASN蛋白的分子式为C_(12188)H_(19327)N_(3363)O_(3631)S_(109),分子质量为274.56 ku,蛋白不稳定;在细胞内主要分布于细胞核;具有2个结构域,均与脂类合成代谢有关;二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主;进化树及同源性分析显示:水牛FASN蛋白与牦牛和家牛的亲缘关系较近,序列同源性较高;FASN主要与ACACB、ACACA和ACLY互作较为紧密。【结论】德宏奶水牛乳腺组织中FASN基因表达可能促进乳脂率提高。

德宏奶水牛SCD基因乳腺组织表达及生物.信息学分析

本试验旨在研究德宏奶水牛SCD基因表达规律和探究水牛SCD生物学特性。用乳品分析仪测定乳脂率,依照乳脂率高低进行分组,分为高、中、低组(分别为H组、M组、L组)。采用qPCR法检测SCD基因表达量,与乳脂率进行关联分析。利用生物信息学方法对水牛SCD的结构进行预测。结果表明,H组SCD表达量极显著高于M组和L组(P<0.01),M组极显著高于L组(P<0.01)。其mRNA表达水平与乳脂率呈强正相关。生物信息学分析结果显示,水牛SCD为不稳定亲水蛋白,不存在信号肽,主要在内质网(44.4%)发挥作用。二级结构主要由无规则卷曲(40.39%)、α-螺旋(39.55%)构成。SCD与ELOVL6、SREBP1、FASN等脂质代谢关键分子互作。研究表明,德宏奶水牛SCD基因的表达可能影响乳脂合成。

猪睾丸Dickkopf样顶体蛋白1基因的转录调控分析

【目的】Dickkopf样顶体蛋白1(DKKL1)是一种重要的顶体蛋白,为发掘其重要功能及潜在的临床价值,以版纳微型猪近交系(BMI)为对象,研究其睾丸组织中DKKL1的分子结构、转录调控特征和蛋白质功能。【方法】通过全转录组测序获得BMI DKKL1的表达量,使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得DKKL1编码区序列并分析其基因结构和蛋白质特征,使用UniProt数据库对DKKL1进行功能注释并分析DKKL1与微小RNA(miRNA)、长链非编码RNA(lncRNA)间的竞争性内源RNA(ceRNA)转录调控。【结果】获得的BMI DKKL1编码区全长为702 bp,位于基因第6号染色体上,有5个外显子和4个内含子;蛋白质功能分析表明,DKKL1包含233个氨基酸,具有疏水性,含磷酸化位点、信号肽和较多的无规则卷曲亚结构;系统进化和同源性分析表明,DKKL1氨基酸序列在哺乳动物间高度保守;蛋白互作分析显示,DKKL1与含螺旋结构域的蛋白155(CCDC155)、转录增强缔合域蛋白2(TEAD2)、RAS癌基因家族成员11B(RAB11B)等多种蛋白互作;基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析表明,这些蛋白富集在典型Wnt信号等通路上;GO功能注释表明,DKKL1在睾酮生物合成过程的负向调控、透明带穿透、顶体泡生成等方面具有重要功能;ceRNA转录调控网络分析表明,DKKL1被miR-15a和miR-15b靶向调控。【结论】本研究获得了BMI睾丸全转录数据,阐明了DKKL1的分子特征、蛋白质功能并构建了转录调控网络。

德宏奶水牛乳腺组织miR-21-5p基因及其脂类代谢靶基因表达研究

试验旨在探究德宏奶水牛乳腺组织miR-21-5p基因及其靶基因的表达规律。选取饲养条件相同、同一胎次、年龄相近、处于泌乳中期的健康德宏奶水牛,分为高乳脂率组(H组)、中乳脂率组(M组)和低乳脂率组(L组)。每组选取3头奶水牛,屠宰后采集乳腺组织,提取总RNA。采用生物信息学方法预测miR-21-5p的靶基因。利用荧光定量PCR技术检测miR-21-5p及其靶基因的表达水平,并与课题组前期测定的乳脂率进行相关性分析。结果显示,miR-21-5p的靶基因可能为AGPAT6和GPAM。L组德宏奶水牛乳腺组织中miR-21-5p的表达水平高于M组和H组(P<0.01)。相关性分析结果显示,miR-21-5p与靶基因AGPAT6的表达水平呈极显著负相关(P<0.01),与靶基因GPAM的表达水平呈显著负相关(P<0.05),德宏奶水牛乳腺组织miR-21-5p表达量与乳脂率呈显著负相关(P<0.05),靶基因AGPAT6和GPAM与乳脂率呈极显著正相关(P<0.01)。蛋白互作网络结果显示,AGPAT6和GPAM互作关系最强。研究表明,miR-21-5p可能通过负调控靶基因AGPAT6和GPAM的表达影响乳脂合成,进而影响乳脂率。

德宏奶水牛TLR8基因乳腺组织表达及生物信息学分析

试验研究不同乳脂率德宏奶水牛乳腺组织中TLR8基因的表达规律及水牛TLR8的结构。利用乳品分析仪测定乳脂率,以7%~8%为中乳脂率组(M组),高于8%为高乳脂率组(H组),低于7%为低乳脂率组(L组)。采用实时荧光定量PCR技术检测TLR8基因表达量,与乳脂率进行相关性分析,利用生物信息学方法分析水牛TLR8的结构特征。结果表明,L组TLR8基因的表达量极显著高于H组和M组(P<0.01)。TLR8基因mRNA的表达水平与乳脂率呈显著负相关(P<0.05)。TLR8分子式为C_(5338)H_(8275)N_(1399)O_(1567)S_(31),分子质量为118 kD,理论等电点为5.90,亲水性总平均值为-0.134。TLR8属于跨膜蛋白,具有信号肽序列MTLRFLLLTSLFLLISDS,第18~19位氨基酸之间存在切割位点。TLR8的胞外区含有12个LRR、3个LRRTYP和1个LRRCT,胞内区具有1个TIR结构域。二级结构以α螺旋为主。TLR8主要与MyD88、IRAK1、IRAK4等蛋白相互作用。研究表明,水牛TLR8结构与TLR家族相似,且德宏奶水牛乳腺组织TLR8基因的表达量随着乳脂率增加呈下降趋势。

云南德宏水牛和杂交牛(摩拉水牛×德宏水牛)血清中两种同工酶的多态性研究

本试验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)对云南德宏水牛和杂交牛(摩拉水牛×德宏水牛)血清中乳酸脱氢酶(LDH)和过氧化物酶(POD)两种同工酶多态性进行研究,并采用GelDocTM.XR凝胶成像系统扫描仪对乳酸脱氢酶进行定量。结果表明两种牛血清中的两种同工酶均出现多态性,且德宏水牛血清同工酶多态性少于杂交牛。德宏水牛LDH1、LDH2、LDH3、LDH4、LDH5相对百分含量依次为47.25±1.62%、25.41±0.75%、14.07±0.49%、10.55±0.97%、5.98±0.45%;杂交牛依次为49.27±0.85%、26.26±0.55%、12.48±0.40%、8.89±0.52%、6.35±0.27%。对LDH相对百分含量进行方差分析的结果显示,两种牛之间只有LDH3差异显著(P<0.05),其余差异均不显著(P>0.05)。该结果为进一步研究血清同工酶的多态性与生产性能之间的关系提供了理论依据。

水牛乳和荷斯坦牛乳中五种常量元素含量的测定

对摩本杂水牛（摩拉水牛×德宏水牛）乳和荷斯坦牛乳中的5种常量元素进行测定。采用火焰光度法测定钾、钠含量,火焰原子吸收分光光度法（FAAS）测定钙、镁含量,磷钼酸比色法测定磷含量。结果表明,水牛乳中钾、钠含量极显著低于荷斯坦牛乳（P〈0.01）,钙、磷含量极显著高于荷斯坦牛乳（P〈0.01）,两种牛乳中镁含量差异不显著（P〉0.05）。元素测定相对标准偏差（RSD）低于5%,平均加标回收率在95.05%～105.18%之间。

水牛初乳和常乳主要组分的动态变化

试验旨在研究水牛初乳和常乳主要组分的动态变化规律。采用乳品分析仪对摩本杂水牛(摩拉水牛×德宏水牛)初乳和常乳中乳脂、乳糖、乳蛋白、总固形物(TS)和非脂固形物(SNF)等含量进行测定,用SDS-PAGE对乳蛋白各组分进行分离,并利用凝胶成像系统进行扫描定量。结果表明,初乳中乳糖含量随泌乳天数的增加逐渐升高;乳蛋白、总固形物(TS)和非脂固形物(SNF)含量呈下降趋势;初乳中乳脂含量变化不规则,出现小幅波动;蛋白质各组分中乳铁蛋白(LF)、血清白蛋白(SA)、免疫球蛋白(Igs)含量第1天最高,以后开始下降;酪蛋白(CN)在乳蛋白百分比含量中占优势,随着泌乳天数的增加逐渐升高;β-乳球蛋白(β-LG)第1天含量低,第5和7天达到最高值;α-乳白蛋白(α-LA)第1天最低,第2天急剧上升,以后变化平稳。常乳中大部分组分含量比较稳定,有时有波动,但各天数之间差异不显著。研究结果显示,水牛乳中大部分组分的含量在初乳中变化较大,初乳的营养价值高于常乳。

水牛初乳和常乳中锌、铁、铜含量的动态变化

采用火焰原子吸收分光光度法对摩本杂水牛(摩拉水牛×德宏水牛)初乳和常乳中Zn、Fe、Cu等三种微量元素含量进行测定。结果表明,在第1、2d的初乳中Zn含量显著高于其余几天的初乳和常乳(P<0.05),第3d开始Zn含量接近常乳,在3d至90d之间稍有波动,但差异不显著(P>0.05)。Fe和Cu含量随泌乳进行逐渐降低,其在初乳中的含量均高于常乳,常乳之间差异不显著(P>0.05)。其中第1d初乳中Fe含量显著高于第7d(P<0.05),而与其余几天初乳相比差异不显著(P>0.05),第1、2d初乳中Fe含量均显著或极显著高于常乳(P<0.05);第1d初乳中Cu含量显著高于第3、5d的初乳(P<0.05),与第2、7d相比差异不显著(P>0.05),第1、2d初乳中Cu含量极显著高于常乳(P<0.01)。研究显示水牛初乳中Zn、Fe、Cu等三种微量元素的含量大都高于常乳,反映了乳腺在初乳期矿物质的分泌特点。

德宏奶水牛DGAT1基因多态性及其与产奶性状的相关性分析

探讨德宏奶水牛(摩拉水牛×德宏水牛)DGAT1基因多态性与产奶性状的关系,以期为德宏奶水牛产奶性状标记辅助选择侯选基因的选择提供理论依据。以81头泌乳的德宏奶水牛为研究对象,利用PCR-SSCP方法结合候选基因直接测序法检测DGAT1基因第8外显子及第8内含子区的多态性,并采用最小二乘法分析DGAT1基因多态位点对产奶量、乳脂率及乳蛋白率的影响。结果在德宏奶水牛群体中共检测到CTGG,CCGG和CCGT三种基因型,测序结果显示,在检测的群体中未发现K232A位点的突变,而在DGAT1基因第8内含子的第14位检测到C→T突变,第35位检测到G→T突变。多重比较表明,CCGT基因型对德宏奶水牛的乳脂率有显著影响(P<0.05)。

火焰原子吸收光谱法测定水牛和荷斯坦牛乳中锌、铁、铜含量

研究采用火焰原子吸收分光光度法（FAAS法）测定水牛和荷斯坦牛乳中锌、铁、铜含量。结果表明,锌、铁、铜含量在水牛乳中分别为15.520μg/mL、4.267μg/mL、0.586μg/mL,在荷斯坦牛乳中分别为4.374μg/mL、2.756μg/mL、0.866μg/mL。水牛乳中锌、铁含量极显著高于荷斯坦牛乳（P〈0.01）,铜含量极显著低于荷斯坦牛乳（P〈0.01）。三种元素的回收率范围为96.000%~104.333%,相对标准偏差为2.467%~7.857%。该方法精密度和准确度高,可适用于批量牛乳样品中微量矿物元素的分析。

水牛初乳和常乳中五种酶活性的动态变化

对摩本杂水牛(摩拉水牛×德宏水牛)初乳和常乳中AMS、γ-GT、NAGase、ALP以及LP的活性进行测定。结果表明,初乳中5种酶的活性大多显著或极显著高于常乳(P<0.05或P<0.01),而常乳之间差异均不显著(P>0.05)。初乳中AMS活性第1、2、3天差异不显著(P>0.05),第1、2天极显著高于第5、7天(P<0.01)。γ-GT活性第1天显著高于第7天(P<0.05),但与第2、3、5天相比差异不显著(P>0.05)。NAGase活性第1、2天极显著高于第3、5、7天(P<0.01)。ALP活性第1、2、3、5天之间差异不显著(P>0.05),但第1天极显著高于第7天(P<0.01)。LP活性第1、2天之间差异显著(P<0.05),且均极显著高于第3、5、7天(P<0.01)。

奶牛乳房炎乳样中链球菌的PCR检测

奶牛乳房炎（BovineMastifs）是限制奶业发展最重要的疾病之一,是一种世界性并且引起严重经济损失的疾病。其特征是乳腺发生各种不同类型的炎症,同时乳汁的理化性质也发生变化,乳房炎的发病率在奶牛各种疾病中占首位,给奶牛业造成很大的损失。

德宏水牛乳和荷斯坦牛乳中上皮粘蛋白的遗传多态性

本文采用SDS-PAGE对56头云南德宏水牛和47头中国荷斯坦牛的乳上皮粘蛋白MUC1进行了基因分型。结果表明:德宏水牛乳和荷斯坦牛乳中的MUC1均呈现多态性。德宏水牛乳中共发现3种分子量分别为208,185,168 kD的电泳谱带,命名为A,B和C等位基因;荷斯坦牛乳中共发现5种分子量分别为196,191,188,176,159 kD的电泳谱带,命名为D,E,F,G和H等位基因。德宏水牛乳MUC1基因座A,B,C3个等位基因频率分别为0.223 2,0.330 4和0.446 4,群体期望杂合度为0.647 5;荷斯坦牛乳MUC1基因座D,E,F,G,H 5个等位基因频率分别为0.468 1,0.010 6,0.212 8,0.255 3和0.053 2,群体期望杂合度为0.674 7。结果揭示德宏水牛乳MUC1蛋白与荷斯坦牛乳MUC1蛋白遗传组成存在显著差异,该座位遗传多态性较丰富。

一步法RT-PCR同时检测CSFV和PRRSV方法的建立及应用

猪瘟(CSF)和猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是严重危害云南养猪业的传染病,为了建立一种能快速诊断猪瘟和猪繁殖与呼吸综合征混合感染的方法,根据NCBI上已发表的猪瘟病毒(CSFV)保守基因Erns和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)保守基因M基因的核苷酸序列,利用Oligo 6.0设计了2对特异性引物,经过PCR反应条件优化后,建立了CSFV和PRRSV一步法RT-PCR的检测方法。对云南部分地区猪高热病病料检测的结果表明,本方法具有良好的特异性、重复性和稳定性,为云南猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合征病毒混合感染的快速检测提供了重要的技术支持。

德宏奶水牛初乳和常乳中五种常量元素含量的动态变化

为了积累德宏奶水牛初乳和常乳中五种常量元素的基础数据,本试验对德宏水牛第1、2、3、5、7天的初乳及第15、30、60、90天的常乳进行测定。结果显示,初乳中钠、镁和磷的含量随泌乳天数的增加呈下降趋势,初乳略高于常乳,常乳中含量在一定范围内变化,差异不显著。钾在初乳中含量略微上升,初乳略高于常乳,常乳中钾含量变化差异不显著。钙含量在初乳中呈上升趋势,初乳中钙含量低于常乳,常乳中钙含量变化差异不显著。

不同乳脂率德宏奶水牛乳腺组织中FATP1基因表达研究

为研究不同乳脂率德宏奶水牛乳腺组织中FATP1基因的表达情况,试验选取216头处于泌乳盛期的健康德宏奶水牛,分为高乳脂率组(H组)、中乳脂率组(M组)和低乳脂率组(L组),采集乳样,用乳品分析仪测定乳脂率,利用气相色谱法测定脂肪酸含量。采集乳腺组织,利用荧光定量PCR法检测FATP1基因的mRNA表达水平,并与乳脂率和脂肪酸含量进行相关性分析。结果表明:H组乳脂率、总脂肪酸含量和长链脂肪酸含量均极显著高于M组和L组(P<0.01),M组显著高于L组(P<0.05)。不饱和脂肪酸含量H组极显著高于L组(P<0.01),显著高于M组(P<0.05),而M组与L组无显著差异(P>0.05)。FATP1基因mRNA表达水平为H组极显著高于L组(P<0.01),而H组与M组、M组与L组均无显著差异(P>0.05)。相关性分析表明,乳脂率与乳中总脂肪酸、长链脂肪酸和不饱和脂肪酸含量间呈极显著正相关(P<0.01),FATP1基因mRNA表达量与乳脂率、脂肪酸总量、长链脂肪酸含量、不饱和脂肪酸含量均呈极显著正相关(P<0.01)。研究表明在乳脂合成的过程当中FATP1基因对脂肪酸的摄取和转运起到重要的调控作用。

德宏奶水牛乳腺组织CD36基因的表达研究

【目的】研究不同乳脂率德宏奶水牛乳腺组织CD36基因的表达差异。【方法】选取同一养殖小区中饲养条件相同的健康德宏奶水牛216头,采集乳样,用乳成分分析仪测定乳脂率;以乳脂率(7.5±0.5)%为基准,将德宏奶水牛分为高、中、低乳脂率组(分别为H、M、L组),每组选取胎次相同、年龄相近、处于泌乳中期的德宏奶水牛各3头,屠宰后采集乳腺组织,提取总RNA,利用实时荧光定量PCR技术检测CD36基因mRNA表达水平,并与乳脂率进行相关性分析。【结果】H组的CD36基因m RNA表达水平极显著高于M组和L组(P<0.01),M组极显著高于L组(P<0.01)。相关性分析表明:CD36基因表达量与乳脂率呈极显著正相关(P<0.01)。【结论】CD36基因表达对德宏奶水牛乳质量可能具有促进作用。

不同乳脂率德宏奶水牛乳腺组织脂滴形成相关基因的表达研究

本研究旨在探索脂滴形成相关基因嗜乳脂蛋白(BTN1A1)、黄嘌呤脱氢酶(XDH)、围脂滴蛋白1(PLIN1)和PLIN2在不同乳脂率德宏奶水牛乳腺组织中的表达差异。试验选取同一养殖小区的健康德宏奶水牛216头,采集乳样,用乳品分析仪测定乳脂率。根据乳脂率测定结果,分为低乳脂率组(L组,<7.0%)、中乳脂率组(M组,7.5%±0.5%)和高乳脂率组(H组,>8.0%),每组选取第2胎、年龄相近、处于泌乳中期的德宏奶水牛各3头,采集乳样,进行乳脂率测定;屠宰后采集乳腺组织,提取总RNA,利用实时荧光定量PCR技术检测脂滴形成相关基因的mRNA表达水平,并与乳脂率及脂肪酸含量进行相关性分析。试验结果显示,BTN1A1、XDH、PLIN1和PLIN2基因具有相同的表达趋势:H组>M组>L组;其中H组德宏奶水牛乳腺组织BTN1A1、XDH、PLIN1和PLIN2基因mRNA表达水平均极显著高于M组和L组(P<0.01);M组BTN1A1基因表达水平与L组差异不显著(P>0.05),但XDH、PLIN1和PLIN2基因mRNA表达水平均极显著高于L组(P<0.01)。相关性分析表明,BTN1A1、XDH、PLIN1和PLIN2基因表达水平均与乳脂率、总脂肪酸、长链脂肪酸及不饱和脂肪酸含量呈极显著正相关(P<0.01)。本研究结果表明,BTN1A1、XDH、PLIN1和PLIN2基因在乳腺组织的表达可能对德宏奶水牛的乳脂合成及分泌有显著促进作用,可为深入解析脂滴形成相关基因在泌乳过程中的调控机制提供参考。

一株猪丹毒杆菌的分离鉴定及spaA基因序列分析

从猪丹毒疑似病例肺脏中分离到1株革兰阳性小杆菌,编号为YN19071,对其进行形态学、分子生物学鉴定,并研究其致病性、耐药性以及spaA基因遗传进化关系。16S rRNA基因序列在NCBI数据库中进行BLAST比对,结果显示分离株YN19071与猪丹毒杆菌(Erysipelothrix rhusiopathiae)模式菌株ATCC 19414~T同源性99.9%,对小鼠有较强的致病性。spaA基因进化分析显示,YN19071与10株猪丹毒杆菌中国分离株之间的同源性为98.8%~99.5%,与疫苗株G4T10同源性为99.3%。与疫苗株G4T10相比较,云南分离株YN19071的spaA基因存在3个突变位点T609G、A635G和A671G,对应的氨基酸序列也存在3个突变位点I203M、E212G和E224G。本研究在首次对云南猪丹毒杆菌spaA基因遗传进化分析,对云南猪丹毒杆菌的疫苗免疫防控具有指导意义。