PI3K信号过度活化引发免疫病理机制研究进展

目前少数研究发现磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)基因PIK3CD(编码p110δ)发生功能获得性(GOF)变异后,可导致活化的PI3Kδ综合征(APDS)。该突变可通过诱导T细胞减少/衰老/耗竭、B细胞发育受阻、NK细胞毒性降低等多种免疫系统内部缺陷机制导致机体内免疫缺陷、免疫失调甚至肿瘤发生。本文主要对PI3Kδ GOF诱导APDS发生的相关临床疾病特点及免疫缺陷分子机制展开综述,重点阐述该突变导致淋巴细胞发育、分化及功能缺陷的分子机制。

加热灭活对下呼吸道病毒抗原检测结果影响的初步研究

目的探讨采用56℃、30 min,56℃、60 min,60℃、30 min,70℃、15 min加热灭活标本对直接免疫荧光法(DFA)检测7项下呼吸道病毒抗原检测结果的影响。方法收集2020年1月5日至4月29日64例因下呼吸道感染住院患儿的痰液标本进行7项呼吸道病毒抗原DFA检测,采用未灭活常规方法同56℃、30 min,56℃、60 min,60℃、30 min,70℃、15 min加热灭活方法进行检测结果比较。结果通过未灭活常规方法检出39份阳性标本、25份阴性标本,同时采用56℃、30 min,56℃、60 min,60℃、30 min,70℃、15 min加热灭活进行检测,阳性标本结果符合率为100.0%(39/39),阴性标本结果符合率为100.0%(25/25),加热灭活后与未灭活常规方法检测标本的结果具有极好一致性;对荧光显微镜下形态进行比较,阳性结果标本采用56℃、30 min,56℃、60 min,60℃、30 min加热灭活后与未灭活常规方法检测结果比较,阳性细胞荧光状态、阳性细胞数基本一致,采用70℃、15 min加热灭活后,阳性细胞数明显减少、阳性细胞荧光强度明显下降。结论采用加热灭活标本后再进行DFA检测下呼吸道病毒抗原实验,既能保证检测结果的一致性,同时可降低检验人员感染风险,保障实验室生物安全。

基于Orphanet数据库对我国罕见病神经系统表现分类的研究

目的了解罕见病神经系统的基本发病表现,提高对罕见病神经系统表现的认识,为进一步深入研究提供参考。方法筛选出基于Orphanet分类的罕见神经系统疾病,按照相同的神经系统症状和体征进行分类,分析各类别罕见病的异同。结果从罕见病名录中筛选出57种罕见神经系统疾病,占罕见病名录疾病总数的31.49%。这类罕见神经系统疾病表现出无特异性、复杂交错的异常表现,呈现出周围神经病变、癫痫、神经肌肉病等10个类别的神经系统临床症状和体征。结论罕见病多伴有症状和体征复杂的神经系统障碍,鉴别诊断极具挑战性。可结合Orphanet数据库,认真分析疾病与表现之间的关联性,提高罕见病神经系统临床症状和体征的辨认能力。

葡萄糖酸锌辅助治疗小儿轮状病毒腹泻的疗效研究

轮状病毒（RV）是造成小儿肠道感染性疾病最常见的病原体,多见于秋冬季节[1].RV由双链RNA构成,按VP6结构蛋白抗原特异性的不同可将划分为A-G7个组,其中A组人RV是引起婴幼儿非细菌性腹泻首要的致病原.

多重RT-PCR与毛细电泳联用技术在儿童下呼吸道感染病原体检测中的应用

目的采用多重逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)与毛细电泳联用技术对13种儿童呼吸道常见病原体痰液标本进行检测,研讨其在儿童下呼吸道感染病原体检测中的价值。方法采集2019年12月至2020年1月该院38例因下呼吸道感染住院患儿的痰液标本,应用多重RT-PCR技术检测13种呼吸道病原体,同时采用直接免疫荧光法检测7种常见呼吸道病毒抗原。结果38例下呼吸道感染住院患儿的痰液标本中,多重RT-PCR检出至少一种病原体阳性36份,检出率94.7%(36/38),其中乙型流感病毒检出最多,阳性20例(52.6%),其次检出呼吸道合胞病毒14例(36.8%)阳性,甲型流感病毒H1N1(2009)8例(21.0%)阳性,鼻病毒6例(15.8%)阳性,副流感病毒4例(10.5%)阳性,其中检出2种或2种以上呼吸道病原体混合感染14份,检出率为36.8%(14/38)。选取与直接免疫荧光法(DFA)检测相同的7种病毒进行比较,DFA检出阳性16份,检出率仅有42.1%(16/38),多重RT-PCR阳性检出率高于DFA方法,两种方法病毒阳性检出率差异有统计学意义(P<0.01)。结论多重RT-PCR与毛细电泳联用方法是一种高效快速、高通量、准确的检测技术;同DFA比较特别在流感病毒检测方面具有更高灵敏度,可同时检测更多病原体,能指导临床了解儿童下呼吸道感染病原并进行及时有效治疗。

SBi4211通过抑制S100B/RAGE表达减轻gp120诱导的中枢神经损伤

目的研究S100B抑制剂SBi4211(heptamidine)在人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)包膜蛋白gp120损伤中枢神经系统的作用。方法通过U251细胞和SH-SY5Y细胞建立非接触式星形胶质细胞-神经元共培养体系,由gp120蛋白处理U251细胞激活神经炎症反应造成神经元损伤,体外水平探讨SBi4211在gp120诱导的中枢神经毒性中的作用;体内实验中,以8月龄gp120转基因小鼠模拟HIV相关神经认知障碍(HAND)模型,实验分为对照组、gp120组以及gp120+SBi4211组(SBi4211处理组)。采用CCK-8、流式细胞术检测神经元活性及凋亡情况,ELISA检测S100B及炎症因子IL-6、TNF-α表达水平,Western blot和免疫组织化学染色分析RAGE、GFAP、NeuN、Syn、MAP-2蛋白表达情况。结果体外实验结果显示SBi4211可以显著抑制gp120刺激后U251细胞S100B、RAGE的表达(P<0.001),降低炎症因子iNOS、IL-6和TNF-α的表达水平(P<0.001),维持神经元相关标记蛋白NeuN、Syn的表达(P<0.001)。体内实验结果显示SBi4211显著降低gp120转基因小鼠S100B、RAGE表达及炎症水平(P<0.05),并且抑制脑内星形胶质细胞活化,保护神经元的完整性(P<0.05)。结论SBi4211可能通过下调S100B/RAGE表达,抑制gp120引发的神经炎症反应,继而阻断gp120的中枢神经毒性作用。

孤儿药临床试验伦理保护的思考

罕见病又称孤儿病,治疗罕见病的药物亦称孤儿药。药物临床试验是孤儿药研发上市的重要途径。鉴于罕见病患者特殊的病理特征和我国孤儿药可及性差的困境,伦理审查既是保障孤儿药临床试验受试者权益的重要手段,又是指导孤儿药临床试验规范操作的道德规范。本文对孤儿药临床试验方案、知情同意、隐私保护等方面的伦理保护进行探讨,以期提高对孤儿药临床试验伦理审查重要性的认识和关注。

Vimentin基因敲除HIV-1 gp120转基因小鼠模型的构建

目的构建波形蛋白(VIM)基因敲除和gp120转基因(gp120 Tg)小鼠模型。方法将VIM基因敲除小鼠(VIM-/-)和gp120Tg小鼠杂交(F0代),然后在产生的子代(F1)中,取分组为VIM+/-/gp120Tg的小鼠一公一母杂交,得到基因型分别为VIM+/+、VIM+/-、VIM-/-和VIM+/+/gp120 Tg、VIM+/-/gp120 Tg、VIM-/-/gp120 Tg的6组小鼠。其中VIM+/+、VIM-/-、VIM+/+/gp120Tg和VIM-/-/gp120这4组小鼠互为对照。用PCR法鉴定这上述6组小鼠的基因型,免疫印迹法检测小鼠脑组织中VIM和gp120的表达情况。结果4组基因型VIM+/+、VIM-/-、VIM+/+/gp120Tg和VIM-/-/gp120Tg小鼠的PCR结果符合预期,免疫印迹结果显示VIM-/-/gp120Tg小鼠VIM无表达,gp120过表达(P<0.001),符合预期结果。结论成功构建了VIM基因敲除gp120转基因小鼠模型,为深入研究波形蛋白在gp120神经毒性作用中的作用机制提供了坚实的研究基础。

农村妇女孕全程拟除虫菊酯类农药暴露对2岁儿童神经发育影响的队列研究

目的探讨孕期全程拟除虫菊酯类农药(pyrethroid pesticides,PYRs)暴露对2岁儿童神经发育的影响及其关键窗口期。方法2016年1月至2018年12月在云南省宣威市2个乡镇招募孕早期妇女建立出生队列。采用超高效液相色谱-串联质谱法检测482名妇女孕8~12^(+6)周、20~23^(+6)周和32~35^(+6)周尿PYRs代谢产物水平,贝利婴幼儿发育量表-第3版评估2岁儿童神经发育水平。采用多元线性回归分析模型和二元Logistic回归分析模型分析孕期PYRs暴露与儿童神经发育之间的关联。结果共完成360个母子对孕期尿液PYRs代谢产物检测和儿童神经发育水平评估。孕早、中、晚期至少检出一种PYRs代谢产物的检出率分别为93.6%(337/360)、90.8%(327/360)和94.2%(339/360)。2岁儿童认知、语言、运动、社会情感和适应性行为得分分别为(102.3±18.9)、(100.2±16.3)、(102.0±20.3)、(107.8±23.3)和(85.8±18.6)分。调整其他混杂因素后,孕早期尿PYRs代谢产物4-氟-3-苯氧基苯甲酸暴露可降低2岁儿童运动(β=-5.02,95%CI:-9.08~-0.97)和适应性行为(β=-4.12,95%CI:-7.92~-0.32)得分,可增加2岁儿童适应性行为发育迟缓的风险(OR=2.07,95%CI:1.13~3.82)。结论农村妇女孕早期日常生活PYRs暴露可能会影响2岁儿童神经发育,孕早期可能是其关键窗口期。孕中、晚期同等水平PYRs暴露可能对2岁儿童神经发育影响不明显。

嗜神经病毒穿越血脑屏障入侵中枢神经系统的相关致病机制研究进展

血脑屏障是位于血液与脑组织之间的天然屏障,可严格控制血液中的感染性病原体入侵大脑,维持大脑内环境稳定。然而,嗜神经病毒却能破坏或逃避血脑屏障入侵脑部,引发脑炎或脑膜炎等严重的中枢神经系统并发症,有些甚至威胁生命。本文主要对一些较常见的嗜神经病毒穿越血脑屏障入侵大脑的不同致病机制研究进展进行综述。

昆明地区儿童感染的GII型诺如病毒分子分型研究

了解昆明地区诺如病毒在儿童中的流行特征和分型特点。统计整理昆明地区哨点医院,2018年6月-2019年10月内的1588例通过荧光定量PCR鉴定为诺如病毒(Norovirus,NV)阳性的病例资料,包括检测时间、年龄及性别,分析流行病学特征。收集到其中荧光定量结果显示病毒相对含量较高的485份儿童腹泻标本,通过逆转录PCR方法成功获得107-ORF1和94-ORF2基因序列信息,进一步进行分子分型。昆明地区2018年11月开始,检出NV的病例逐步增加,至2019年1月,NV检出率开始降低。NV相关性腹泻的易感人群为3岁前幼儿,其中1岁以下患儿占40%,1岁~3岁患儿占56%,其余3岁~16岁患儿仅占4%。分子分型结果显示,流行株根据ORF1分为GIIP16、GIIP12、GII31三种亚型,依据ORF2的结果,属于GII.4、GII.2、GII.3个分支。Tajima中性检验预测RdRp(GII.P16),RdRp(GII.P31),VP1(GII.3),VP1(GII.3)的D值分别为-2.03,-1.51,0.14,-1.13,其中大部分D值小于0。其中VP1(GII.3)的D值为正值,有别于其他大部分预测结果,原因可能是样本量不足,需要在未来扩大样本量开展研究。NV对儿童的感染率在各年龄组间存在差异,在3岁以下儿童感染NV患病率较高。病毒呈季节性流行,主要集中在11月到次年2月。针对儿童患者,昆明地区同时流行3种不同基因型病毒株,优势流行株为GII.P31-GII.4。对突变频率较高的样本进行分析,其基因进化不遵循中性模型,需要进一步对病毒间基因重组进行分析。

EV71感染诱导小鼠海马细胞发生自噬的作用研究

肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)是引发手足口病(Hand,foot,and mouth disease,HFMD)儿童死亡的主要致病病原体。其引发的重症手足口病可出现病毒性脑膜炎、神经源性肺水肿等严重的神经系统并发症,但具体致病机制尚不明确。自噬(autophagy)是一种在进化中保守的、溶酶体依赖的分解代谢反应途径,可通过自噬途径清除细胞内细菌、病毒等,发挥天然免疫效应。本文旨在研究EV71感染诱导小鼠海马细胞发生自噬的作用机制,以期为探讨发现其关键致病机制找到新的突破口。本研究主要采用小鼠海马细胞作为EV71感染的神经细胞,分别采用电镜、流式细胞术、Western Blot、蚀斑实验、激光共聚焦显微镜等技术对其作用机制展开研究。EV71感染后,在小鼠海马细胞内可观察到自噬小体的产生,并且随感染时间延长,自噬分子LC3-II蛋白持续高表达;在加入自噬抑制剂后,自噬被抑制,说明EV71感染可诱导小鼠海马细胞发生自噬;此外还发现随着感染时间延长,细胞内EV71滴度显著增加;细胞内自噬小体上有EV71蛋白聚集;而且CTAB量子点标记的EV71-RNA与EGFP-LC3标记的自噬小体能够发生共定位,说明EV71感染与细胞内自噬发生可能存在很大的相关性,推测其可能利用细胞内自噬机制发生免疫逃逸。因此,EV71感染可以诱导小鼠海马细胞发生自噬,且病毒在细胞内的复制可能与细胞内自噬发生密切相关。本研究将为探索EV71关键致病机制提供新的参考依据及研究思路。

降钙素基因相关肽对急性肺损伤幼鼠水通道蛋白1、5表达的影响

目的 探讨降钙素基因相关肽（CGRP）对脂多糖（LPS）诱导的幼鼠肺水肿及水通道蛋白（AQP）的影响。方法 84只SD幼鼠按随机数字表法随机分为对照组（12只）、急性肺损伤（ALI）组（36只）和CGRP组（36只）。对照组不做任何干预；ALI组腹腔注射LPS（5 mg/kg），分别处理2、6、12、24 h；CGRP组在LPS注射1 h后进行腹腔注射CGRP（1 mg/kg）。于2、6、12、24 h处死幼鼠，取出肺组织，苏木精－伊红染色对肺组织进行病理分析，称重法计量各组湿/干质量比值，荧光定量PCR和Western blot分别检测各组幼鼠肺组织中AQP1和AQP5的mRNA和蛋白表达水平。结果 病理切片显示：与对照组相比，ALI组幼鼠组织肺泡腔明显变窄；肺泡壁毛细血管扩张，肺间质出现炎性细胞浸润。CGRP组肺水肿和炎症浸润程度明显减轻。荧光定量PCR结果显示：24 h后，ALI组AQP1和AQP5 mRNA（0.009±0.001和0.055±0.006）与对照组（0.035±0.002和0.167±0.006）相比均明显降低（均P〈0.001），CGRP处理后两者水平增高（0.024±0.002和0.134±0.012），与ALI组相比，差异均有统计学意义（均P〈0.001）。Western blot结果显示：24 h ALI组AQP1和AQP5蛋白水平（0.397±0.041和0.215±0.029）均低于对照组（0.850±0.020和0.741±0.032）（均P〈0.001），而CGRP组AQP1和AQP5蛋白水平（0.593±0.065和0.461±0.039）亦低于对照组（均P〈0.001），但明显高于ALI组（均P〈0.001）。结论 CGRP能够增加AQP1和AQP5的表达，减轻肺水肿，对ALI幼鼠肺损伤具有保护作用。

降钙素基因相关肽与肺部疾病

肺部疾病涉及肺部感染、肺损伤、哮喘、肺间质疾病、肿瘤和肺高压等，其机制尚不完全清楚。降钙素基因相关肽（Calcitoningene—relatedpeptide，CGRP）是一个含37个氨基酸的神经肽，在多个物种中广泛分布和表达。尽管临床尚无CGRP治疗肺部疾病的案例，但大量的研究证实CGRP在肺相关细胞或者某些肺部疾病动物模型中能够发挥重要的生物学效应。该文综述CGRP在肺部常见疾病中的生物学效应以及相应受体拮抗剂的作用及影响。

SBi4211阻断HIV-1 gp41促进新生隐球菌对人脑微血管内皮细胞的黏附作用

【背景】目前艾滋病和新型隐球菌性脑膜炎共病因素导致其高发病率和死亡率的机制尚不明确。【目的】探索S100B抑制剂SBi4211对HIV-1 gp41促进新生隐球菌黏附人脑微血管内皮细胞的影响和可能机制。【方法】黏附实验分析SBi4211是否能阻断HIV-1 gp41诱导下新生隐球菌黏附人脑微血管内皮细胞。使用免疫印迹方法进一步检测在此过程中SBi4211对脑微血管内皮细胞上新生隐球菌透明质酸受体CD44表达的影响。【结果】SBi4211可显著抑制HIV-1gp41对新生隐球菌黏附脑微血管内皮细胞的增强作用,且呈时间、剂量效应(P<0.05);免疫印迹结果显示SBi4211可抑制新生隐球菌和/或HIV-1 gp41增加脑微血管内皮细胞上新生隐球菌透明质酸受体CD44的表达。【结论】SBi4211可通过下调受体CD44来阻断HIV-1 gp41对新生隐球菌黏附人脑微血管内皮细胞的增强效应,这为了解HIV-1与新生隐球菌共病机制及其防治策略提供了新思路。

外泌体在病毒感染中的双重作用:免疫激活及免疫逃逸

外泌体又被称为胞外体,含有多种细胞膜分子以及相关蛋白,是细胞间传递信息的重要信使,可携带功能性RNA、蛋白质和脂质至受体细胞,诱导受体细胞表型发生变化,促进其活化或抑制效应产生。近年来,一些研究表明外泌体在病毒感染后既能发挥免疫激活作用,促进机体产生抗病毒免疫应答;同时又能帮助病毒在细胞间传播、扩散,产生免疫逃逸。它的双重作用直接决定于其感染病原体及来源细胞特征,可作为后期药物及疫苗研发的重要靶点。本文将综述外泌体在不同病毒感染后的表现机制及其在疾病发生中扮演的角色。