AFLP技术鉴别罂粟、虞美人和大麻种属差异的初步研究

目的探讨采用AFLP技术检测植物DNA,鉴别罂粟、虞美人和大麻植物种属间差异的方法。方法收集罂粟根、茎、叶、花、果以及虞美人和大麻叶检材,用AxyPrep DNA试剂盒提DNA,经EcoRI/MseI酶切,人工接头及PCR预扩增,用E-ACA/M-CAG、E-ACT/M-CTC、E-ACC/M-CTA、E-ACC/M-CTG、E-AGC/M-CTT、E-AGG/M-CTA6对标记了荧光的选择性引物进行PCR扩增,其产物在的CEQ8000遗传分析仪上检测。结果6对引物分别在罂粟、大麻和虞美人样本中检出27-46、5-20、4-31条扩增片段,种属间存在明显差异;同一罂粟根、茎、叶、花和果的DNA检测结果相同。结论罂粟、虞美人和大麻3种植物的AFLP分析结果显示出的差异性,同一植株不同部位DNA AFLP结果的同一性,有可能用于检测未知植物检材的种属来源。

微生物群落演替在死亡时间推断中的研究进展

死亡时间推断是法医学实践中的重点和难点,国内外法医学者一直在探寻客观、可量化和准确的死亡时间推断方法。随着高通量测序技术和人工智能技术的发展与结合,根据死后尸体相关的微生物群落演替规律建立死亡时间推断模型,成为法医学领域的研究热点。本文就利用高通量测序技术探究微生物群落在死亡时间推断中的技术方法、研究应用及影响因素等方面进行综述,为利用微生物群落推断死亡时间的相关研究提供参考。

利用荧光AFLP技术检测罂粟DNA多态性

目的利用荧光AFLP检测技术检测罂粟植物DNA多态性。方法用Axygen公司的AxyPrep DNA试剂盒提取了12株产于缅甸和中国云南省昆明市宜良县罂粟植株的DNA,用EcoRI和MseI对总DNA进行酶切,连接人工接头,预扩增和选择性扩增,其产物在CEQ8000遗传分析系统上检测。结果64对选择性扩增引物中8对引物能得到20条以上的扩增片断,具有高度多态性。结论荧光AFLP技术可用于罂粟DNA多态性的检测。

TD-RAPD技术用于罂粟品种鉴定初探

目的探索TD-RAPD技术用于罂粟品种鉴定的可行性。方法采用改良CTAB法从罂粟叶片中提取DNA;TD-RAPD技术对种植于云南西双版纳地区的1个罂粟样品进行扩增分析。结果建立了罂粟DNA提取方法,从10个随机引物中筛选出6个引物用于罂粟TD-RAPD分析。结论TD-RAPD技术可用于罂粟DNA的分子标记,为罂粟DNA数据库建立提供技术方法,最终从DNA分子水平上追溯罂粟植物毒源。

CNR1、GAD1和BDNF基因多态性与云南傣族男性海洛因依赖的相关性分析

为了探讨大麻素受体1基因(Cannabinoid receptor 1,CNR1)3个SNP位点(rs6454674、rs1049353和rs806368)、谷氨酸脱羧酶1基因(Glutamate decarboxylase 1,GAD1)3个SNP位点(rs1978340、rs3791878和rs11542313)、脑源性神经营养因子基因(Brain-derived neurotrophic factor,BDNF)2个SNP位点(rs6265和rs13306221)与云南傣族男性海洛因依赖的相关性,文章采用病例对照关联分析,建立8-SNPs复合扩增体系,应用SNaPshot方法检测165例傣族男性海洛因依赖患者和170例健康傣族男性CNR1、GAD1和BDNF基因8个SNPs位点基因型,采用SPSS17.0、Haploview4.2、PHASE2.1和MDR软件进行统计学分析。结果显示,rs13306221基因型频率在海洛因依赖组和对照组中的差异具有统计学意义(P<0.025),海洛因依赖组rs6265 A等位基因显著高于对照组(P<0.05),由rs1978340-rs3791878-rs11542313构建的T-A-C、C-C-C、C-C-T和T-C-C单体型及rs6265-rs13306221构建的A-G单体型频率在海洛因依赖组及对照组中差异具有统计学意义(P<0.05),海洛因依赖组T-A-C、C-C-T和A-G单体型频率明显高于对照组,GAD1基因rs1978340与rs3791878之间可能存在强协同的交互作用。结果表明,CNR1基因rs1049353多态性、GAD1基因rs1978340和rs11542313多态性以及BDNF基因rs6265和rs13306221多态性与云南傣族男性海洛因依赖相关联,并且携带rs6265 A等位基因的个体可能更容易对海洛因产生依赖。

粘取法、直接扩增法联合应用DNA分型3例

随着DNA分析技术在的法医领域的研究和广泛应用,DNA检验的对象已从常规检材拓展到不易被发现而常被忽略的微量检材,如作案工具把手上、衣帽鞋袜上粘附的上皮细胞等目前已成为重要的物证来源[1]。现场微量生物物证一旦获得有价值的DNA分型,在侦破、诉讼中就能发挥重大作用。如何提高微量生物物证的检出率、准确度、时效性,使得许多现场潜在的生物物证在侦查破案中能够发挥应有的价值,就显得愈来愈重要。

马钱子生物碱选择性电极的研制及其在毒物分析中的应用

本文介绍用盐酸士的宁(Strychnine hydrochioride)与四苯硼钠反应生成的四苯硼酸士的宁沉淀作为活性物,制成马钱子生物碱选择性电极。经测试表明,该电极不论在纯溶液中,还是在动物组织体液中,都具有较高的灵敏度和选择性,稳定性和重现性良好,适于痕量毒物分析。

SNaPshot技术检测Y-SNP位点O3-M122单倍群的应用

目的采用SNaPshot技术检测案例检材O3-M122位点6个亚群的分型,并调查其在云南3个民族无关男性人群中的频率分布。方法建立5-plex Y-SNPs复合扩增体系,采用SNaPshot Multiplex试剂盒,检测案例检材O3-M122单倍群下O3*-M122、O3a*-M324、O3a3*-P201、O3a3b*-M7、O3a3c*-M134、O3a3c1*-M117共6个Y-SNPs分型,并对上述6个Y-SNPs在云南佤族、白族、傣族共174名无关男性个体中的分布进行调查。结果 17份案例检材均得到良好的分型结果。上述3个民族分别在3个、5个、5个位点上发现多态性,其中佤族O3a3*-P201分布频率最高(0.430 0);白族O3a*-M324频率最高(0.212 3);傣族O3a3c1*-M117频率最高(0.158 2)。结论多重PCR反应及SNaPshot技术的联合应用适用于法医案件检材DNA检测,3个民族多态性数据可为相关应用所参考。

孔姓人群Y染色体遗传多态性研究及其法医学意义

目的获取孔姓人群Y-SNP和Y-STR遗传标记的信息,探索姓氏与Y染色体的关联性及法医学意义。方法采用等级复合扩增和SNaPshot技术检测255例孔姓男性和330例随机无关男性样本的12个Y-SNPs位点信息;采用Y filer试剂盒检测孔姓人群的17个Y-STRs基因座;应用Arlequin 3.5.1.2、Network4.6.1.1进行统计分析。结果12个Y-SNPs位点构成13种单倍群分型,孔姓人群和无关人群中最高分布频率的单倍群均为O3a2c1a-M117(21.57%,14.85%)。孔姓人群17个Y-STRs基因座构成的196种单倍型,多态性为0.993 9,单倍型14-12-25-28-19-15-12-19-12-11-12-22-12-11-14-10-19出现15次。O3-M122单倍群的中介网络树及不配对差异分析显示孔姓人群有两个中心星型分布,核苷酸不配对曲线呈单峰泊松分布。结论联合Y-SNP和Y-STR遗传标记分析表明孔姓人群存在复杂的基因交流,有多个姓氏起源,且在历史上经历过一定的扩张或持续增长,结合孔姓家谱历史分析其人群结构的遗传差异在法医学方面有潜在的应用价值。

苯丙胺类药物依赖与中枢胆碱能系统关系研究进展

苯丙胺类兴奋剂滥用可致强烈精神依赖,引起精神分裂症以及认知功能损害。研究认为中枢神经胆碱能系统参与药物依赖的调控,苯丙胺类兴奋剂依赖后导致了部分脑区乙酰胆碱释放水平、囊泡转运蛋白、胆碱能受体表达以及受体功能发生了适应性的改变,并与依赖行为的表达存在一定的关系;部分胆碱能受体抑制剂可干预依赖行为的表达。目前尚未有研究证实苯丙胺类兴奋剂对胆碱能神经元有直接损害作用。本文对苯丙胺类药物依赖与中枢胆碱能系统关系的研究进展作一综述。

20号染色体与X染色体上的8个SNP位点与云南汉族雄激素性脱发的相关性

目的探讨20号染色体上4个SNP位点（rs6152、rs16990427、rs1352015、rs1385699）以及X染色体上4个SNP位点（rs6137444、rs2180439、rs913063、rs1160312）与云南汉族雄激素性脱发的相关性。方法采用病例-对照关联分析，建立8-SNPs复合扩增体系，应用SNaPshot方法检测115例男性雄激素性脱发患者和125例健康男性20号染色体及X染色体基因上8个sNPs位点的基因型。采用SPSS17．0、Haploview4．2、SHEsis和MDR软件进行统计学分析。结果X染色体上的4个SNP位点的分布在病例组与对照组之间无差异。rs2180439、rs913063、rs1160312基因型频率在两组中的差异具有统计学意义（P〈0．05），病理组rs2180439T等位基因显著多于对照组（P〈0．05），病理组rs913063和rs1160312A等位基因显著高于对照组（P〈0．05）。由rs6137444-rs2180439-rs913063-rs1160312构建的c—T-C-G、T-GC-G和T-T-A-A单倍型的分布在两组中的差异具有统计学意义（P〈0．05），rs6137444、rs21804393与rs1160312之间存在较强的协同交互作用。结论X染色体可能与云南汉族雄激素性脱发无相关性。rs2180439、rs913063、rs1160312多态性与云南汉族雄激素性脱发相关联，携带rs2180439T等位基因、rs913063和rs1160312A等位基因者更易发生雄激素性脱发。

藏族、白族18个面部相关SNPs位点多态性及群体差异性研究

目的获取18个面部相关SNPs位点在藏族人群和白族人群的遗传多态性,探索不同民族群体间遗传结构的差异性。方法采用SNa Pshot技术建立18-SNPs位点复合检测体系并检测192名藏族人群和159名白族人群18个SNPs位点的基因型。应用SPSS23.0软件进行统计学分析,R v3.3软件进行主成分分析。结果除了rs987525位点仅检测出一种等位基因G,其余位点的基因分型均具有很好的多态性,其中rs502393、rs7559271、rs920683、rs974448、rs6555969、rs13267109、rs2724626、rs1258763、rs1978860、rs2788888、rs934498 11个SNPs位点的等位基因频率在两个民族群体间差异有显著统计学意义(P<0.01),rs502393、rs7559271、rs920683、rs974448、rs642961、rs13267109、rs2724626、rs1978860、rs2788888、rs934498 10个SNPs位点的基因型频率在两个民族群体间差异有显著统计学意义(P<0.01),主成分分析(PCA)散点图中4个群体相互独立分布(云南傣族、北京汉族群体数据来自Ensembl千人数据库),群体间遗传结构差异明显。结论藏族、白族18个面部相关SNPs位点的基因分型具有很好的多态性,丰富了我国少数民族面部相关SNPs位点的数据库,其人群结构差异性在法医学应用具有重要的意义。

两种方法提取毛干mtDNA并研究其HVSⅠ的多态性

目的通过比较两种方法提取毛干线粒体DNA(mtDNA)的提取效率并探究其高变区Ⅰ(HVS-Ⅰ)遗传多态信息,以发挥此类检材在案件侦破中的作用。方法收集8名随机个体3-5cm长毛干各2份,分别使用M48磁珠法和QIA Investigator硅膜法提取模板DNA;同时收集8名个体的少量指甲,用QIA Investigator试剂盒法提取模板DNA。巢式PCR或普通PCR扩增HVS-Ⅰ片段,扩增产物用G-50胶纯化,电泳后进行测序。结果磁珠法和硅膜法均能获到模板DNA,QIA试剂盒法提取的模板DNA普通PCR即可扩增出目标片段,磁珠法提取的模板DNA需经过巢式扩增得到目标产物。同一个体的头发和指甲测序结果相同,未检见异质性。8个个体测序比对结果显示序列以转换多态为主,2个样本出现颠换多态。结论硅膜法可作为提取毛干DNA的有效方法。

建立检测制式长枪上DNA多态性的新方法

目的建立快速、准确检测制式长枪上基因分型的新方法。方法联合使用直扩法、硅膜法对48支制式长枪上5个不同部位共240份检材进行DNA检测。结果联合使用直扩法及硅膜法,在48支制式长枪中检测出DNA完整分型42支,检出率达87.50%。结论联合使用直扩法、硅膜法,可有效快速、准确地检测出制式长枪上DNA多态性。

犬mtDNA高变区Ⅰ多态性及法医学意义初探

目的对犬毛发mtDNA高变区Ⅰ多态性进行检测,并探讨其在法医学中的应用价值。方法 54只家犬(拉布拉多犬7只、史宾格犬7只、德国牧羊犬6只、罗威纳犬4只、藏獒4只、昆明犬4只、杜伯文犬3只、金毛寻猎犬1只、昆明本地犬18只)。采用复合巢式PCR对54只家犬mtDAN HVRⅠ15803～16114区域进行测序分析。结果 54只家犬在mtDNA HVRⅠ15458～16100区域共检测到643个碱基对信息,共检出分属3大单倍群26个多态点;15个单倍型,频率在1.9%～20.4%之间,其中单倍型A11频率最高;个体识别概率为0.898,平均核苷酸差异和平均核苷酸多样度为7.62±3.61和0.011 9±0.006 3。结论采用本文方法,可检测犬mtDNA HVR-Ⅰ多态性,并可利用其较高的个体识别概率为相关案件侦察提供线索或依据。