云南羊肚菌rDNA的ITS序列与亲缘关系分析

采用ITS（Internal Transcribed Spacers）序列比对技术分析了根据形态挑选的14个羊肚菌子实体（其中11个来自云南，3个来自浙江）。结果表明，云南的11个羊肚菌子实体（M1～M11）可分为4个种；高羊肚菌（Morchella elata），尖顶羊肚菌（Morchella conica），粗柄羊肚菌（Morchella crassipes）和大孔（宽肋）羊肚菌（Morchella costata）。浙江的3个羊肚菌子实体（M12～M14）经鉴定为未知羊肚菌种。14个羊肚菌子实体样品和GenBank中黑脉（小顶）羊肚菌[Morchella angusticeps（AJ698476）]、美味羊肚菌[Morchella esculenta（AJ698475）]以及羊肚菌科常见属钟菌属Verpa conica（AJ544206）的ITS序列聚类，以钟菌（AJ544206）作为外类群，可分为三大聚类群：高羊肚菌、大孔（宽肋）羊肚菌和黑脉（小顶）羊肚菌为第1类群（Group1）；美味羊肚菌和尖顶羊肚菌为第2类群（Group2）；粗柄羊肚菌和浙江的3个羊肚菌为第3类群（Group3）。

采用变性梯度凝胶电泳研究羊肚菌土壤真菌群落结构

采用变性梯度凝胶电泳(Denaturing Gradient Gel Electrophoresis)技术以土壤微生物群体的基因组DNA为研究对象,通过比较羊肚菌(Morchella sp.)出菇土壤及对照土壤中各种真菌的28S rDNA基因信息来了解土壤微生物的多样性。结果发现,测得的12种真菌中,盘菌纲的有10种,异担子菌纲1种,还有1种未确定。所取2份土样中仅羊肚菌生长土壤中检测出有羊肚菌;2份样品在优势真菌种群上有一定的区别,盘菌纲真菌群落存在很大的差异,羊肚菌出菇土壤的真菌丰度低于对照,可能与土壤中羊肚菌优势种群对其它种群的抑制作用有关。

羊肚菌内生细菌DGGE鉴定

试验采用DGGE电泳技术避开传统的纯培养不能全面反映内生菌种群的弊端,首先从子实体中含有的细菌着手,通过对其种类的鉴定,寻找与羊肚菌生长关系密切的细菌种群。结果显示:测序共得到7种细菌,PCR-DGGE方法可以在一定程度上反应微生物群落结构。