云南省曲靖市啮齿动物的立克次体血清学和分子流行病学调查

目的调查云南省曲靖市啮齿动物感染立克次体状况。方法用鼠笼法捕鼠,采集鼠血清和脾脏。用间接免疫荧光试验(IFA)检测鼠血清中7种常见立克次体的IgG抗体;用巢氏PCR方法检测鼠脾中嗜单核细胞埃立克体和嗜吞噬细胞无形体16SrRNA基因片段部份序列。结果 2012年7-9月在曲靖市捕获啮齿动物3种592只,褐家鼠(Rattus norvegicus)和黄胸鼠(Rattus flavipectus)构成比分别为61.49%和35.47%。鼠血清中贝氏柯克斯体(Coxiella burentii)、莫氏立克次体(Rickettsia typhi)、恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi)、西伯利亚立克次体(Rickettsia sibirica)、嗜吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum)和嗜单核细胞埃立克体(Ehrlichia chaffeensis)的抗体阳性率依次为21.45%、7.60%、7.09%、3.38%、1.18%和0.51%;未检测到猫立克次体(Rickettsia felis)抗体。从5份褐家鼠脾脏标本中检测到16SrRNA基因序列,同源性和进化分析表明,1株为嗜吞噬细胞无形体,4株为莫氏立克次体。结论曲靖市啮齿动物中存在莫氏立克次体和人粒细胞无形体流行,褐家鼠可能是主要宿主;同时还存在恙虫病东方体、贝氏柯克斯体、斑点热立克次体和埃立克体的感染。当地疾控和医疗机构应加强立克次体病的监测。

云南省新分离蚊浓核病毒的分子特征研究

对云南省新分离的14株浓核病毒进行基因序列测定和分析,以了解浓核病毒基因组结构及特性.用浓核病毒基因组扩增引物（DNV3F,DNV3R）,RT-PCR扩增片段,PCR产物直接测序,拼接后获得基因序列.通过Clustal X（1.8）、DNAStar、GeneDoc （3.2） 等生物学软件进行核苷酸序列及氨基酸序列分析和病毒的系统进化分析.结果表明,2007年7～8月,在云南省西部中缅边境地区采获蚊虫4属29种54 673只,分离到14株浓核病毒,其中来自三带喙库蚊Culex tritaeniorhynchus 10株,中华按蚊Anopheles sinensis、伪杂鳞库蚊Culex pseudovishnui、环带库蚊Culex annulus和致倦库蚊Culex pipiens quinquefasciatus各1株.新分离株与我国其他省市的分离株核苷酸同源性很高,在99.9%～100%之间;氨基酸同源性在99.7%～100%之间.基于NS1和NS2基因进行进化分析显示,云南新分离的14株浓核病毒与以往中国分离株进化关系最接近.

云南省流行性乙型脑炎的调查研究

流行性乙型脑炎(简称乙脑)是我省分布广,发病多,危害大的一种蚊媒传播的自然疫源性病毒病.自北纬20°15',的中缅边境至北纬28°的金沙江流域的112个县(市)均有分布,尤以北纬26°以南的暖温带和亚热带地区的大理、保山、昆明、玉溪、德宏、临沧、西双版纳和红河等州(市)流行较为严重,其中水网丰富、稻谷种植集中的地区发病率较高,山区旱作地区发病较少.……

云南省2005-2012年肾综合征出血热流行现状(英文)

目的为了科学的预防和控制云南省肾综合征出血热，对云南省2005—2012年肾综合征出血热流行现状进行综合分析。方法用描述性的流行病学和统计学方法对收集自云南省疾病报告系统的肾综合征出血热资料进行统计分析。结果共有260个肾综合征出血热病例报道，其中包括45个临床诊断病例，170个实验室诊断病例和45个疑似病例。根据病例数，将云南省肾综合征出血热病例分布分成4个区：1类区为高发地区，是大理州；2类区为次发地区，是昆明市、楚雄州和红河州；3类区为低发地区，是丽江市、怒江州、曲靖市、玉溪市，昭通市和保山市；4类区为不发地区，是迪庆州、德宏州，临沧市、普洱市、西双版纳州和文山州。云南省肾综合征出血热病无明显的季节性；40～50岁的农民发病数较多，且男性多于女性；结论大理州及周边地区是肾综合征出血热预防控制的关键地区，特别是40岁以上的男性农民为防控的重点人群。为了搞好肾综合征出血热预防控制，应该开展爱国卫生运动，减少鼠密度和汉坦病毒双价疫苗的接种。在云南省的部分地区，仍有可能存在肾综合征出血热的暴发流行。

巴泰病毒云南株生物学性状研究

目的掌握巴泰(Batai)病毒生物学特性,为巴泰病毒的监测和调查研究提供科学依据。方法用分离自云南省菲律宾按蚊(Anopheles philippinensis)的巴泰病毒LC92-4株,采用细胞培养、小白鼠感染、血凝抑制、间接免疫荧光、空斑试验以及病理检测和电镜观察等方法进行生物学特性试验。结果巴泰病毒可引起<4周龄小白鼠发病死亡。感染鼠脑病毒颅内、皮下和腹腔接种2周龄小白鼠的LD50分别为5.67logLD50/0.025mL、5.3logLD50/0.03mL和4.5logLD50/0.03mL。感染病毒鼠的心、肝、脾、肺、肾病毒悬液颅内接种2周龄小白鼠,LD50分别为3.75、4.25、2.25、3.0、2.25logLD50/0.025mL。感染发病小白鼠脑、心、肝、脾、肺、肾均发现病理改变。感染鼠的脑组织经电镜检测发现圆形有包膜病毒颗粒,大小约82nm。巴泰病毒能在BHK21和Vero细胞产生明显病变,并可产生空斑;在BHK21细胞上,空斑滴度为6.04logPFU/mL;在C6/36细胞上不产生病变。感染病毒鼠脑接种BHK21和Vero细胞,TCID50分别为5.50logTCID50/0.025mL和5.00logTCID50/0.025mL。在pH5.75～7.0条件下,巴泰病毒不具有与鸽、鹅、鸡、鸭、人O型和绵羊红血球发生凝集的特性;空斑减少中和试验检测云南省357份人血清,阳性2份,中和抗体滴度均为1∶10。结论乳小白鼠和幼年小白鼠对巴泰病毒高度易感。BHK21和Vero细胞对巴泰病毒敏感,可用于病毒分离培养和空斑测定。建立的免疫荧光和空斑减少中和试验具有特异性,可用于巴泰病毒抗体检测。应进一步开展该病毒的分布及其与疾病关系的研究。

云南省2006-2014年恙虫病发病率的聚类分析（英文）

目的为了科学地预防和控制云南省恙虫病,对云南省2006-2014年恙虫病的发病率(人时)进行聚类分析,为降低其发病率提供科学依据。方法收集云南省疾病报告系统的恙虫病资料,采用Q型聚类分析云南省16个州(市)恙虫病发病率进行评判分类,同时结合分类结果进行恙虫病的地理分布描述。结果云南省16个州市都有恙虫病分布。根据聚类分析结果,将云南省恙虫病分成3个区:1类区为高发地区,是保山市、德宏州、临沧市和西双版纳州;2类区为次发地区,是楚雄州、红河州、玉溪市、丽江市、大理州、普洱市和昆明市;3类区为低发地区,是文山州、怒江州、昭通市、曲靖市和迪庆州。结论保山市、德宏州、临沧市和西双版纳州是云南省恙虫病的高发地区,重点地区应进行重点防控。

云南省西双版纳州鼠型斑疹伤寒暴发的调查(英文)

目的阐明云南省西双版纳州鼠型斑疹伤寒的流行状况。方法收集云南省鼠型斑疹伤寒病例资料。于2011年6-9月在西双版纳地区采集鼠型斑疹伤寒临床诊断病例的急性期和恢复期血清,并在发病地区的居民区捕鼠,采集鼠血液和脾脏标本。用间接免疫荧光试验检测患者和鼠血清中的鼠型斑疹伤寒立克次体的IgM和IgG抗体,用实时荧光PCR试验检测急性期病人血块和鼠脾脏中的鼠型斑疹伤寒立克次体热休克蛋白基因(groELgene)。结果 2004-2011年,云南省共报告鼠型斑疹伤寒病例8 361例,所有州(市)均有病例报告,其中西双版纳州发病数和发病率最高(86.6/10万),占全省总病例数的73.1%(6 111/8 361)。发病数具有逐年上升之势,全年均有病例发生,6-10月为主要流行期。2011年云南省共报告鼠型斑疹伤寒1 369例,其中西双版纳州报告病例1 157例,发病率为102.10/10万,病例数占云南省病例数的84.51%。勐海县、勐腊县和景洪市分别占全州病例数的79.95%(n=925,278.74/10万)、18.06%(n=209,74.10/10万)和1.99%(n=23,4.42/10万),勐海县发病率显著高于勐腊县(2χ=346.3,P<0.001)和景洪市(2χ=1369,P<0.001)。对2011年的80例病人进行了实验室检测,在80例急性期病人血清标本中有63例为IgM抗体阳性;75例病人双份血清标本中有61例的恢复期血清滴度高于急性期4倍及以上;80例患者急性期血块中有8例为PCR阳性。依据实验室诊断标准,74例被确诊为鼠型斑疹伤寒,其中血清学诊断73例(包含7例同时为分子诊断),分子诊断1例,临床诊断和实验室检测符合率为92.50%(74/80)。黄胸鼠血清鼠型斑疹伤寒立克次体IgG抗体阳性率为14.0%(14/100),脾脏的PCR阳性率为9.0%(9/100)。结论西双版纳州存在较为严重的鼠型斑疹伤寒流行,其中勐海县流行最为严重。

云南首次分离到辛德毕斯(Sindbis)、巴泰(Batai)和Colti病毒

目的了解云南省虫媒病毒分布情况,为防治提供依据。方法在云南省思茅地区和西双版纳州采集蚊虫以及发热病人血清,液氮冻存。标本常规处理,接种C6/36细胞和乳鼠以分离病毒,并用血清学和分子生物学方法对分离到的病毒进行鉴定。同时采集发热病人和健康人血清,用ELISA和血凝抑制试验检测病毒抗体。结果从西双版纳发热病人血清中分离到1株辛德毕斯(Sindbis)病毒,从澜沧县菲律宾按蚊中分离到1株巴泰(Batai)病毒,从思茅市翠云区和澜沧县三带喙库蚊、中华按蚊、菲律宾按蚊、迷走按蚊等蚊虫中分离到10株Colti病毒。血清抗体检查,西双版纳发热病人血清中辛德毕斯病毒抗体阳性率为2.50%(3/120),巴泰病毒抗体阳性率为4.17%(5/120);思茅和西双版纳地区健康人血清中辛德毕斯病毒抗体阳性率为1.93%(11/571),其中澜沧、思茅、景洪、勐腊和勐海的阳性率依次为4.55%(6/132)、0.89%(1/112)、1.25%(2/160)、1.96%(2/102)和0.00%(0/65);西双版纳发热病人和脑炎病人血清中还检测出Colti病毒抗体。结论云南省分布有经蚊虫传播的辛德毕斯、巴泰和Colti病毒,当地人群中也存在该病毒自然感染。今后应加强这3种虫媒病毒病的调查研究和防治工作。

云南登革4型病毒的鉴定及NS1和NS2a基因序列分析

目的对1989年8月分离自云南省盈江县蚊虫的2株登革病毒进行生物学及分子特征的鉴定,明确这两株病毒的血清型及基因型。方法蚊虫用BHK21细胞和乳鼠法分离病毒,用间接免疫荧光试验、RT-PCR等方法进行鉴定,并对这两株病毒的分子生物学特征进行分析。结果从白纹伊蚊和达勒姆阿蚊中各分离到一株病毒,分别命名为M110和M113,这两株病毒对BHK21细胞能产生明显的细胞病变,脑内接种乳鼠4d左右导致乳鼠死亡。该病毒经血凝、血凝抑制和间接免疫荧光试验提示为黄病毒。分别用黄病毒属特异引物、登革4型病毒NS1和NS2a基因片段特异引物进行RT-PCR扩增、序列测定,证实为登革4型病毒。NS1和NS2a基因序列片段分析表明,M110和M113的NS1核苷酸序列与登革4型病毒基因Ⅰ型的H241株(Y19176)同源性最高,分别为99%、98%;NS2a基因片段与H241的核苷酸序列的同源性分别为96.5%、97.1%。结论从盈江县蚊虫分离到的M110和M113病毒为登革4型病毒基因Ⅰ型,表明云南省西部边境地区在20世纪80年代发生过登革4型病毒的流行。

首次从云南蚊虫分离到辛德毕斯病毒及其鉴定

目的了解云南省虫媒病毒的存在和流行情况。方法2005年8月,在云南省勐海县采集蚊虫,蚊虫标本经研磨后,上清液接种BHK21细胞以分离病毒,用间接免疫荧光试验和RT-PCR等方法进行鉴定,并对病毒的分子生物学特征进行分析。结果采集到蚊虫标本9400只,其中分离到一株对BHK-21细胞能产生明显细胞病变的病毒(MX10)。该病毒经间接免疫荧光试验提示为甲病毒。用甲病毒属特异引物和Sindbis病毒E1基因特异引物对MX10病毒的RT-PCR扩增为阳性,经核酸序列测定分析证实该序列与Sindbis病毒泰国分离株(AF492770)同源性最高,为90.0%;与1987年分离自云南发热患者的YN87448株和1991年新疆按蚊分离株XJ-160的同源性分别为73.1%和72.0%。结论本次从勐海县蚊虫分离到的MX10病毒株为Sindbis病毒,并可能是Sindbis病毒的新亚型或新株系。

云南腾冲县新分离乙型脑炎和盖塔病毒的分子生物学特征

目的分析云南省腾冲县新分离流行性乙型脑炎病毒(JEV)和盖塔病毒(GETV)的分子生物学特征。方法2007年7月在中缅边境地区腾冲县采集蚊虫标本,用BHK-21和C6/36细胞分离病毒,阳性分离物用RT-PCR方法进行鉴定,用相关生物学软件进行分子生物学特征分析。结果从腾冲县采集的4属25种26 702只蚊虫中分离到20株JEV,1株GETV。系统进化分析表明,新分离20株JEV均属于基因Ⅰ型,与邻近省份和东南亚流行株亲缘关系较近;PreM和E基因核苷酸同源性和氨基酸位点分析表明,这20株JEV之间及其与国内外流行株间均存在一定差异,但它们的抗原和毒力位点未发生明显改变。本次分离的GETV的Capsid基因和E2基因与其他国内外分离株的同源性较高。结论首次证实云南省西部地区存在基因Ⅰ型JEV和GETV流行,这些流行株具有较为稳定的遗传特征和地域特征。

云南首次分离到辛德毕斯(Sindbis)、巴泰(Batai)和Colti病毒

辛德毕斯(Sindbis)病毒病是由披膜病毒科甲病毒属中的辛德毕斯病毒引起的人和畜(羊、牛等)共患的疾病.经蚊虫传播,库蚊和伊蚊等是该病毒的传播媒介.主要表现为发热、关节痛和皮疹.本病在世界上广泛流行,在非洲、亚洲、大洋州和欧洲都有本病发生.1987年我们从西双版纳一例发热患者急性期血液中分离到1株甲病毒,1997年对该病毒基因组作了序列测定及分析,从分子水平确认该毒株为辛德毕斯病毒,为云南首次发现.用ELISA法检测西双版纳发热病人血清中该病毒抗体,阳性率为2.5%(3/120).用血凝抑制试验检查31个县市健康人血清中的该病毒抗体,总阳性率为19.27%(356/1847),不同县市抗体阳性率有差异,以滇西南及金沙江河谷地带较其它地区为高,表明我省人群中存在该病毒感染,应引起临床医生的注意.……

云南省乙型脑炎病毒基因分型研究

目的对近30年来云南省分离的19株乙脑病毒进行PrM基因核苷酸序列测定，以确定病毒基因分型。方法乙脑病毒接种3日龄乳鼠，取发病濒死的乳鼠脑组织经研磨制成上清液。提取核酸，通过RT-PCR扩增PrM-C基因片段，用病毒PrM-C（456．695）区核苷酸序列与国内外不同年代分离的72株各基因型乙脑病毒相应序列作比较，用Woan-Ru Chen建立的方法进行基因型分析。结果云南省分离的乙脑病毒均可引起3日龄乳鼠在78h之内死亡；核酸序列分析结果显示，19株乙脑病毒中，17株属基因Ⅲ型，2株属基因I型，其中M28分离自1977年；两株I型病毒与17株Ⅲ型病毒间核苷酸序列的差异大于15％。分离自不同地区、不同时间、不同宿主的Ⅲ型乙脑病毒核苷酸间仅存在3.8％-5.2％的差异。结论云南省广泛存在基因Ⅲ型和I型乙型脑炎病毒流行，Ⅲ型为主要流行型。

云南省东北等地区蚊虫及蚊媒病毒调查研究

目的了解滇东北等地区蚊虫及蚊传虫媒病毒分布特点,为虫媒病毒病防治提供科学依据。方法 2009年在滇东北等地区的6个县采集蚊虫标本;蚊虫经分类鉴定后,用细胞培养法分离病毒,对病毒分离物进行分子生物学鉴定。结果共采集到4属(库蚊、按蚊、阿蚊、伊蚊)24种18562只蚊虫,其中三带喙库蚊、中华按蚊为主要蚊种,构成比分别为58.37%和28.45%;从蚊虫标本中分离到15株病毒,经分子生物学鉴定,其中2株(YN0911和YN0967)为基因Ⅰ型流行性乙型脑炎(乙脑)病毒,均分离自三带喙库蚊;1株(YN0922)为版纳病毒,分离自中华按蚊;12株为淡色库蚊浓核病毒,其中9株分离自三带喙库蚊,3株分离自中华按蚊。结论三带喙库蚊和中华按蚊为调查地区的优势蚊种,并携带乙脑病毒、版纳病毒和淡色库蚊浓核病毒;滇东北地区首次分离到乙脑病毒。

云南省楚雄州汉坦病毒宿主动物及分子流行病学研究

目的掌握汉坦病毒（HV）在云南省啮齿动物中的流行情况及其遗传特征。方法采用笼夜法捕鼠，鼠肺标本用直接免疫荧光法检测HV抗原，用RT-PCR法检测HV核酸及分型，对产物进行序列测定，用PHYLIP软件包进行系统发生分析。结果2005--2006年在云南省楚雄州10个县（市）居民区共捕获鼠类4属8种1421只，其中褐家鼠1056只，构成比高达74.31％，其次为黄胸鼠（19．70％）。检测鼠肺组织1029份，HV抗原阳性53份，总带病毒率为5．15％，带病毒鼠种为褐家鼠（5．08％，38／748））、黄胸鼠（5．97％，12／201）、大足鼠（7．69％，2／26）和斯氏家鼠（6．25％，1／16）。HV汉城型（SEO）核酸检测阳性21份（褐家鼠15份，黄胸鼠4份，大足鼠2份）。获得的12个病毒S片段核苷酸序列与GenBank中国SEO型病毒R22、L99和HLD65株同源性较高，为87．1％～99．7％；与汉滩型（HTN）76—118株同源性仅为64．4％～69．1％。系统进化分析显示，楚雄州12个病毒S片段核苷酸序列与SEO型亲缘关系较近，与HTN型及其他型HV相距较远，证实这12份病毒标本均为SEO型病毒，并可分S1和S3两个亚型。结论首次证实楚雄州10个县（市）广泛存在以褐家鼠为主要传染源的HFRS家鼠型疫源地及SEO型病毒的流行。分析发现SEO型不同亚型病毒的分布有其地域特点和独立性。

三带喙库蚊和致倦库蚊经口感染乙型脑炎病毒疫苗SA14-14-2株的研究

目的通过实验,确定被SA14-14-2乙脑减毒活疫苗免疫的宿主动物和人在被媒介蚊虫叮咬后,是否存在感染和传播的可能.方法建立三带喙库蚊和致倦库蚊的实验室种群,用乙型脑炎SA14-14-2疫苗株病毒和乙脑野毒株经口感染两种库蚊,感染后不同时间取一定数量的蚊,研磨制成悬液,应用空斑试验方法检测感染后不同时间蚊体内的病毒存在情况和病毒滴度.结果在用6.06logPFU/ml SA14-14-2病毒经口感染的两种库蚊中,没有检测到病毒空斑,即没发现蚊虫的感染;在用较高的6.18logPFU/ml病毒经口感染的三带喙库蚊和致倦库蚊中,分别有一组蚊虫出现低滴度感染,空斑形成单位分别是1.24和1.11log10PFU/ml;在用野毒株经口感染的两种库蚊,共计19组蚊虫中,有14组发生感染,空斑形成单位在3.18～4.79log10PFU/ml.结论作为乙脑主要传播媒介的三带喙库蚊和致倦库蚊对SA14-14-2疫苗株病毒的经口感染和病毒在体内的复制严重受限,当叮咬接种疫苗的人后,不具备发生乙脑病毒感染和传播的能力.

云南省蚊虫分布特点及自然感染乙型脑炎病毒的研究

目的分析云南省蚊虫分布特点及其与流行性乙型脑炎(乙脑)等虫媒病毒的关系,为防制提供依据。方法在云南省农村居民区住房、畜圈和野外竹林等生境捕蚊。结果采获成年雌蚊10属88种158909只,以库蚊、按蚊和伊蚊属蚊虫数量最多,分别占56.66%、25.35%和13.88%。在捕蚊总数中,居民区夜间捕获成蚊7属63种132081只,其中三带喙库蚊的构成比最高(42.12%);其次为中华按蚊(23.31%);野外白天捕获成蚊5属48种26828只,白纹伊蚊构成比最高(31.89%),其次为圆斑伊蚊(20.21%)。对8属29种3957批131538只雌性成蚊进行病毒分离,结果从5属17种蚊虫体内分离到乙脑病毒81株,以库蚊分离出的毒株最多(59株),占72.84%;其次为按蚊8株(9.88%)和伊蚊9株(占11.11%);曼蚊和阿蚊均为2株(各占2.47%)。分离到乙脑病毒最多的蚊种为三带喙库蚊(27株),占分离毒株总数的33.33%。结论居民区夜间活动蚊虫群落的优势种为三带喙库蚊、中华按蚊、棕头库蚊、霜背库蚊、伪杂鳞库蚊和迷走按蚊;野外白天活动蚊虫群落的优势种为白纹伊蚊、伪白纹伊蚊、圆斑伊蚊、骚扰阿蚊和刺扰伊蚊。三带喙库蚊和白纹伊蚊分别是云南省乙脑和登革热的主要传播媒介。