云南省曲靖市啮齿动物的立克次体血清学和分子流行病学调查

目的调查云南省曲靖市啮齿动物感染立克次体状况。方法用鼠笼法捕鼠,采集鼠血清和脾脏。用间接免疫荧光试验(IFA)检测鼠血清中7种常见立克次体的IgG抗体;用巢氏PCR方法检测鼠脾中嗜单核细胞埃立克体和嗜吞噬细胞无形体16SrRNA基因片段部份序列。结果 2012年7-9月在曲靖市捕获啮齿动物3种592只,褐家鼠(Rattus norvegicus)和黄胸鼠(Rattus flavipectus)构成比分别为61.49%和35.47%。鼠血清中贝氏柯克斯体(Coxiella burentii)、莫氏立克次体(Rickettsia typhi)、恙虫病东方体(Orientia tsutsugamushi)、西伯利亚立克次体(Rickettsia sibirica)、嗜吞噬细胞无形体(Anaplasma phagocytophilum)和嗜单核细胞埃立克体(Ehrlichia chaffeensis)的抗体阳性率依次为21.45%、7.60%、7.09%、3.38%、1.18%和0.51%;未检测到猫立克次体(Rickettsia felis)抗体。从5份褐家鼠脾脏标本中检测到16SrRNA基因序列,同源性和进化分析表明,1株为嗜吞噬细胞无形体,4株为莫氏立克次体。结论曲靖市啮齿动物中存在莫氏立克次体和人粒细胞无形体流行,褐家鼠可能是主要宿主;同时还存在恙虫病东方体、贝氏柯克斯体、斑点热立克次体和埃立克体的感染。当地疾控和医疗机构应加强立克次体病的监测。

云南省2005-2012年肾综合征出血热流行现状(英文)

目的为了科学的预防和控制云南省肾综合征出血热，对云南省2005—2012年肾综合征出血热流行现状进行综合分析。方法用描述性的流行病学和统计学方法对收集自云南省疾病报告系统的肾综合征出血热资料进行统计分析。结果共有260个肾综合征出血热病例报道，其中包括45个临床诊断病例，170个实验室诊断病例和45个疑似病例。根据病例数，将云南省肾综合征出血热病例分布分成4个区：1类区为高发地区，是大理州；2类区为次发地区，是昆明市、楚雄州和红河州；3类区为低发地区，是丽江市、怒江州、曲靖市、玉溪市，昭通市和保山市；4类区为不发地区，是迪庆州、德宏州，临沧市、普洱市、西双版纳州和文山州。云南省肾综合征出血热病无明显的季节性；40～50岁的农民发病数较多，且男性多于女性；结论大理州及周边地区是肾综合征出血热预防控制的关键地区，特别是40岁以上的男性农民为防控的重点人群。为了搞好肾综合征出血热预防控制，应该开展爱国卫生运动，减少鼠密度和汉坦病毒双价疫苗的接种。在云南省的部分地区，仍有可能存在肾综合征出血热的暴发流行。

云南省2006-2014年恙虫病发病率的聚类分析（英文）

目的为了科学地预防和控制云南省恙虫病,对云南省2006-2014年恙虫病的发病率(人时)进行聚类分析,为降低其发病率提供科学依据。方法收集云南省疾病报告系统的恙虫病资料,采用Q型聚类分析云南省16个州(市)恙虫病发病率进行评判分类,同时结合分类结果进行恙虫病的地理分布描述。结果云南省16个州市都有恙虫病分布。根据聚类分析结果,将云南省恙虫病分成3个区:1类区为高发地区,是保山市、德宏州、临沧市和西双版纳州;2类区为次发地区,是楚雄州、红河州、玉溪市、丽江市、大理州、普洱市和昆明市;3类区为低发地区,是文山州、怒江州、昭通市、曲靖市和迪庆州。结论保山市、德宏州、临沧市和西双版纳州是云南省恙虫病的高发地区,重点地区应进行重点防控。

云南省西双版纳州鼠型斑疹伤寒暴发的调查(英文)

目的阐明云南省西双版纳州鼠型斑疹伤寒的流行状况。方法收集云南省鼠型斑疹伤寒病例资料。于2011年6-9月在西双版纳地区采集鼠型斑疹伤寒临床诊断病例的急性期和恢复期血清,并在发病地区的居民区捕鼠,采集鼠血液和脾脏标本。用间接免疫荧光试验检测患者和鼠血清中的鼠型斑疹伤寒立克次体的IgM和IgG抗体,用实时荧光PCR试验检测急性期病人血块和鼠脾脏中的鼠型斑疹伤寒立克次体热休克蛋白基因(groELgene)。结果 2004-2011年,云南省共报告鼠型斑疹伤寒病例8 361例,所有州(市)均有病例报告,其中西双版纳州发病数和发病率最高(86.6/10万),占全省总病例数的73.1%(6 111/8 361)。发病数具有逐年上升之势,全年均有病例发生,6-10月为主要流行期。2011年云南省共报告鼠型斑疹伤寒1 369例,其中西双版纳州报告病例1 157例,发病率为102.10/10万,病例数占云南省病例数的84.51%。勐海县、勐腊县和景洪市分别占全州病例数的79.95%(n=925,278.74/10万)、18.06%(n=209,74.10/10万)和1.99%(n=23,4.42/10万),勐海县发病率显著高于勐腊县(2χ=346.3,P<0.001)和景洪市(2χ=1369,P<0.001)。对2011年的80例病人进行了实验室检测,在80例急性期病人血清标本中有63例为IgM抗体阳性;75例病人双份血清标本中有61例的恢复期血清滴度高于急性期4倍及以上;80例患者急性期血块中有8例为PCR阳性。依据实验室诊断标准,74例被确诊为鼠型斑疹伤寒,其中血清学诊断73例(包含7例同时为分子诊断),分子诊断1例,临床诊断和实验室检测符合率为92.50%(74/80)。黄胸鼠血清鼠型斑疹伤寒立克次体IgG抗体阳性率为14.0%(14/100),脾脏的PCR阳性率为9.0%(9/100)。结论西双版纳州存在较为严重的鼠型斑疹伤寒流行,其中勐海县流行最为严重。

云南腾冲县新分离乙型脑炎和盖塔病毒的分子生物学特征

目的分析云南省腾冲县新分离流行性乙型脑炎病毒(JEV)和盖塔病毒(GETV)的分子生物学特征。方法2007年7月在中缅边境地区腾冲县采集蚊虫标本,用BHK-21和C6/36细胞分离病毒,阳性分离物用RT-PCR方法进行鉴定,用相关生物学软件进行分子生物学特征分析。结果从腾冲县采集的4属25种26 702只蚊虫中分离到20株JEV,1株GETV。系统进化分析表明,新分离20株JEV均属于基因Ⅰ型,与邻近省份和东南亚流行株亲缘关系较近;PreM和E基因核苷酸同源性和氨基酸位点分析表明,这20株JEV之间及其与国内外流行株间均存在一定差异,但它们的抗原和毒力位点未发生明显改变。本次分离的GETV的Capsid基因和E2基因与其他国内外分离株的同源性较高。结论首次证实云南省西部地区存在基因Ⅰ型JEV和GETV流行,这些流行株具有较为稳定的遗传特征和地域特征。

巴泰病毒云南株生物学性状研究

目的掌握巴泰(Batai)病毒生物学特性,为巴泰病毒的监测和调查研究提供科学依据。方法用分离自云南省菲律宾按蚊(Anopheles philippinensis)的巴泰病毒LC92-4株,采用细胞培养、小白鼠感染、血凝抑制、间接免疫荧光、空斑试验以及病理检测和电镜观察等方法进行生物学特性试验。结果巴泰病毒可引起<4周龄小白鼠发病死亡。感染鼠脑病毒颅内、皮下和腹腔接种2周龄小白鼠的LD50分别为5.67logLD50/0.025mL、5.3logLD50/0.03mL和4.5logLD50/0.03mL。感染病毒鼠的心、肝、脾、肺、肾病毒悬液颅内接种2周龄小白鼠,LD50分别为3.75、4.25、2.25、3.0、2.25logLD50/0.025mL。感染发病小白鼠脑、心、肝、脾、肺、肾均发现病理改变。感染鼠的脑组织经电镜检测发现圆形有包膜病毒颗粒,大小约82nm。巴泰病毒能在BHK21和Vero细胞产生明显病变,并可产生空斑;在BHK21细胞上,空斑滴度为6.04logPFU/mL;在C6/36细胞上不产生病变。感染病毒鼠脑接种BHK21和Vero细胞,TCID50分别为5.50logTCID50/0.025mL和5.00logTCID50/0.025mL。在pH5.75～7.0条件下,巴泰病毒不具有与鸽、鹅、鸡、鸭、人O型和绵羊红血球发生凝集的特性;空斑减少中和试验检测云南省357份人血清,阳性2份,中和抗体滴度均为1∶10。结论乳小白鼠和幼年小白鼠对巴泰病毒高度易感。BHK21和Vero细胞对巴泰病毒敏感,可用于病毒分离培养和空斑测定。建立的免疫荧光和空斑减少中和试验具有特异性,可用于巴泰病毒抗体检测。应进一步开展该病毒的分布及其与疾病关系的研究。

云南省大理州发热患者血液中检测斑点热群立克次体

目的调查云南省大理州不明原因发热患者是否存在斑点热。方法用巢式-聚合酶链反应法扩增患者血液中的立克次体属groEL基因,并进行核酸序列鉴定和分析。结果 20例患者血液中检出1例立克次体核酸阳性(检出率5%),其序列分析与GenBank中Rickcttsia rickcttsii Iowa、Rickcttsia peacockii Rustic、Rickcttsia sibirica等斑点热群立克次体株的同源性最高(为99%)。结论首次证实云南大理地区存在斑点热患者,医疗部门应加强对斑点热的诊断与鉴别。

云南大理地区恙虫病血清学诊断及病原体基因序列分析

目的对云南大理地区恙虫病做血清学诊断及病原体基因序列分析。方法采用间接免疫荧光方法(IFA)检测不明原因发热患者血清中的恙虫病东方体(Ot)IgG抗体,用巢式PCR(nPCR)法扩增患者血液中的Ot groEL与sta56基因并对扩增基因做序列分析。结果 19例不明原因发热病例中恙虫病患者8例,其中血清Karp型4例、Kato型3例、Karp和Kato混合型1例;3例确认恙虫病的血样本扩增到groEL基因片段,其序列同源性为100%,基因序列做系统进化树显示该Ot与Karp和Kato株在同一分支上。从Karp和Kato混合血清型病例血样本扩得sta56基因片断,序列分析显示该Ot与台湾分离株在同一分支上。结论这些云南大理的恙虫病患者由恙虫病东方体Karp或Kato血清型感染;个别患者可能Karp+Kato混合血清型感染,Karp+Kato混合血清型菌株可能在遗传进化上与某些台湾Ot株关系密切。

云南省楚雄州汉坦病毒宿主动物及分子流行病学研究

目的掌握汉坦病毒（HV）在云南省啮齿动物中的流行情况及其遗传特征。方法采用笼夜法捕鼠，鼠肺标本用直接免疫荧光法检测HV抗原，用RT-PCR法检测HV核酸及分型，对产物进行序列测定，用PHYLIP软件包进行系统发生分析。结果2005--2006年在云南省楚雄州10个县（市）居民区共捕获鼠类4属8种1421只，其中褐家鼠1056只，构成比高达74.31％，其次为黄胸鼠（19．70％）。检测鼠肺组织1029份，HV抗原阳性53份，总带病毒率为5．15％，带病毒鼠种为褐家鼠（5．08％，38／748））、黄胸鼠（5．97％，12／201）、大足鼠（7．69％，2／26）和斯氏家鼠（6．25％，1／16）。HV汉城型（SEO）核酸检测阳性21份（褐家鼠15份，黄胸鼠4份，大足鼠2份）。获得的12个病毒S片段核苷酸序列与GenBank中国SEO型病毒R22、L99和HLD65株同源性较高，为87．1％～99．7％；与汉滩型（HTN）76—118株同源性仅为64．4％～69．1％。系统进化分析显示，楚雄州12个病毒S片段核苷酸序列与SEO型亲缘关系较近，与HTN型及其他型HV相距较远，证实这12份病毒标本均为SEO型病毒，并可分S1和S3两个亚型。结论首次证实楚雄州10个县（市）广泛存在以褐家鼠为主要传染源的HFRS家鼠型疫源地及SEO型病毒的流行。分析发现SEO型不同亚型病毒的分布有其地域特点和独立性。

云南省蚊虫分布特点及自然感染乙型脑炎病毒的研究

目的分析云南省蚊虫分布特点及其与流行性乙型脑炎(乙脑)等虫媒病毒的关系,为防制提供依据。方法在云南省农村居民区住房、畜圈和野外竹林等生境捕蚊。结果采获成年雌蚊10属88种158909只,以库蚊、按蚊和伊蚊属蚊虫数量最多,分别占56.66%、25.35%和13.88%。在捕蚊总数中,居民区夜间捕获成蚊7属63种132081只,其中三带喙库蚊的构成比最高(42.12%);其次为中华按蚊(23.31%);野外白天捕获成蚊5属48种26828只,白纹伊蚊构成比最高(31.89%),其次为圆斑伊蚊(20.21%)。对8属29种3957批131538只雌性成蚊进行病毒分离,结果从5属17种蚊虫体内分离到乙脑病毒81株,以库蚊分离出的毒株最多(59株),占72.84%;其次为按蚊8株(9.88%)和伊蚊9株(占11.11%);曼蚊和阿蚊均为2株(各占2.47%)。分离到乙脑病毒最多的蚊种为三带喙库蚊(27株),占分离毒株总数的33.33%。结论居民区夜间活动蚊虫群落的优势种为三带喙库蚊、中华按蚊、棕头库蚊、霜背库蚊、伪杂鳞库蚊和迷走按蚊;野外白天活动蚊虫群落的优势种为白纹伊蚊、伪白纹伊蚊、圆斑伊蚊、骚扰阿蚊和刺扰伊蚊。三带喙库蚊和白纹伊蚊分别是云南省乙脑和登革热的主要传播媒介。

云南省保山市人间狂犬病调查及病毒分子生物学特征分析

目的了解云南省保山市发生2例狂犬病患者的流行病学特点，根据病原分子生物学特征分析可能的传染来源。方法采用狂犬病个案调查表进行流行病学调查，采集狂犬病死者脑组织标本，用直接免疫荧光试验（DFA）检测狂犬病病毒抗原，用RT—PCR法检测狂犬病病毒核酸，测定狂犬病病毒P、M和N基因全序列并根据其同源性比较及系统进化树进行分子流行病学分析。结果2006年7月保山市隆阳区发生1例人间狂犬病，2007年4月腾冲县发生1例狂犬病。2例患者犬伤暴露程度均为Ⅲ度。2例死亡病例均采集到脑组织（编号为CYN0601H和CYN0701H），经DFA和RT—PCR两种实验室方法检测确诊为狂犬病病毒阳性。CYN0601H和CYN0701H与国内外狂犬病病毒的P、M和N基因核苷酸和推导氨基酸序列同源性分析显示，CYN0601H和CYN0701H与泰国分离株的同源性最高。系统进化分析显示，2株病毒标本亲缘关系很近，同属于狂犬病病毒基因1型，且与泰国病毒株有较近的亲缘关系。结论从病原学和病毒分子水平证实云南省保山市2例患者均为狂犬病，保山市狂犬病病毒流行株可能为境外传人，应加强云南省边境地区狂犬病防制工作。

云南省弥勒县2009年蚊媒病毒分离和鉴定

目的了解云南省红河州弥勒县蚊虫中虫媒病毒的分布特点,为虫媒病毒病防治提供科学依据。方法 2009年7月在弥勒县采集蚊虫标本,用细胞培养法分离病毒,对病毒分离物进行分子生物学鉴定。结果从采集到的三带喙库蚊4400只和中华按蚊2200只中分离到9株阳性分离物,经分子生物学鉴定,7株分离物为流行性乙型脑炎(乙脑)病毒(JEV),均分离自三带喙库蚊;2株分离物为淡色库蚊浓核病毒(CppDNV),分离自三带喙库蚊和中华按蚊。结论首次在红河州弥勒县分离到乙脑病毒,从病原学证实弥勒县是乙脑流行区。流行株同源性和分子遗传进化分析证实为基因Ⅰ型乙脑病毒,为滇东南地区首次分离。

云南省蚊虫媒介与蚊传虫媒病毒研究现状

虫媒病毒是指通过吸血昆虫叮咬敏感的脊椎动物而传播疾病的一类病毒，目前全世界已发现537种，其中蚊虫传播虫媒病毒有300余种，占总数的50％以上。蚊传虫媒病毒可以引起人、畜共患病，

云南省脑炎患者脑脊液中检测到基因Ⅰ和Ⅲ型流行性乙型脑炎病毒

目的调查云南省流行性乙型脑炎（乙脑）患者感染乙脑病毒（JEV）基因型状况。方法在云南省西双版纳州医院和大理州医院采集脑炎患者急性期血清标本20份和脑脊液标本11份,用RT-PCR法检测JEV核酸,阳性者进行JEV-PreM/C区基因序列测定,用核苷酸同源性和系统进化分析进行基因型鉴定。结果用RT-PCR法从11例脑炎患者脑脊液标本中检测到JEV核酸阳性3份（JB114、JB135和DLN24）,而20例脑炎患者血清标本均为阴性。3株病毒的PreM/C区核苷酸序列同源性分析显示,JB114、JB135与JEV基因Ⅰ型代表株同源性高达98.3%和99.2%,而与Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型仅为82.5%~84.6%;DLN24与基因Ⅲ型代表株同源性为94.6%,而与基因Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ型分别为85.0%、82.5%和80.4%。进化树分析显示,JB114和JB135位于基因Ⅰ型分支中,DLN24位于基因Ⅲ型分支上。结果表明,来自西双版纳的JB114和JB135病毒株属于基因Ⅰ型,来自大理的DLN24病毒株为基因Ⅲ型。结论云南省乙脑患者中分别存在基因Ⅰ型和Ⅲ型JEV感染的病例,表明云南省存在这两个基因型病毒的共同流行。

云南省西部边境新分离蚊媒病毒分子生物学特征分析

目的分析云南中缅边境地区新分离蚊媒病毒的分子生物学特征，以分析其遗传进化特征。方法2010年1—12月在云南省德宏州芒市和瑞丽市监测点每月一次用诱蚊器采集蚊虫，用BHK-21和C6／36细胞分离病毒，阳性分离物用RT—PCR法进行鉴定及序列测定和分析。结果从采获的7属42种69209只蚊虫中分离到13株流行性乙型脑炎病毒（Japaneseencephalitisvirus，JEV），4株盖塔病毒（Getahvirus，GETV），1株西藏环状病毒（Tibetorbivims，TIBOV），7株淡色库蚊浓核病毒（Culexpipienspallensdensovirus，CppDNV）。JEVE基因进化分析证实，新分离的13株JEV均属基因I型，与云南其它地区和邻近省份流行株亲缘关系较近，且抗原和毒力位点未发生明显改变。4株GETVE2基因与云南其它地区分离株同源性高，亲缘关系近。新分离环状病毒的VPl基因与TIBOV亲缘关系最近，而与云南环状病毒（Yunnanorbivirus）存在明显差异。7株CppDNV的NSl基因与以往云南及其他省区流行株具有较高的同源性和亲缘关系。结论首次证实该地区存在基因I型JEV、GETV、TIBOV和CppDNV流行，这些流行株均具有较为稳定的遗传特征和地域特征。

云南省四县啮齿动物自然感染汉坦病毒及基因分型研究

目的掌握汉坦病毒(HV)宿主动物及基因型,为肾综合征出血热(HFRS)防制提供科学依据。方法居民区采用笼夜法捕鼠,野外采用夹夜法捕鼠,鼠肺组织样品用直接免疫荧光法检测HV抗原,用RT-PCR法检测HV核酸及分型。结果2006年在云南省泸西、寻甸、永胜和玉龙县共捕到鼠类7属12种690只,其中居民区捕到5属6种304只,以黄胸鼠和褐家鼠为优势鼠种;野外捕到7属12种386只,以高山姬鼠为优势鼠种。检测鼠肺624份,HV抗原阳性31份,带毒率4.97%(31/624),其中居民区鼠带毒率为2.17%(6/277),带毒鼠种为褐家鼠和黄胸鼠;野外鼠带毒率为7.20%(25/347),带毒鼠种为高山姬鼠、大绒鼠、中华姬鼠和黑腹绒鼠。HV核酸阳性21份,其中汉城型阳性3份(褐家鼠1份,大耳姬鼠1份,巢鼠1份),汉滩型阳性18份,(黄胸鼠2份,高山姬鼠7份,大绒鼠7份,黑腹绒鼠1份,巢鼠1份)。结论调查地区存在以褐家鼠为主要传染源的家鼠型HFRS疫源地,也存在以高山姬鼠和大绒鼠为主要传染源的野鼠型HFRS疫源地。HTN型病毒疫源地具有多种宿主动物的分布特点。

云南省狂犬病疫情实验室检测及病毒分子流行病学分析

目的对云南地区狂犬病疫情开展分子流行病学调查与分析。方法应用直接免疫荧光试验(DFA)检测动物和患者中的狂犬病毒抗原,阳性样本用反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)扩增狂犬病毒N基因片段,并进行序列测定及分析。结果对60份患病动物样本进行DFA检测,结果抗原检测阳性26份(阳性率43.33%)。对182份健康犬脑进行DFA检测,结果抗原检测阳性2份(阳性率1.10%)。对4份患者唾液和73份鼠脑进行DFA检测,抗原检测均为阴性。对28份抗原检测阳性样本进行RT-PCR检测,25份核酸检测阳性(阳性率89.29%)。基因进化树分析显示本次检测到的DX01和DZ01病毒与国内狂犬病毒株在同一分支之内,DN01与东南亚毒株在同一分支之内。结论引发云南省狂犬病流行的狂犬病毒较复杂,其来源可能与东南亚和省外毒株的输入有关。

云南省瑞丽市2013年登革热暴发的分子流行病学研究

目的调查云南省德宏州瑞丽市2013年登革热（denguefever,DF）暴发疫情的情况,掌握其分子流行病学特点。方法收集登革热病例资料,采集急性期患者血清标本,用RT-PCR法检测登革病毒（dengue virus,DENV）核酸,并进行登革病毒C/PreM区核苷酸序列测定和分析。结果 2013年8~11月,瑞丽市共确诊登革热232例,其中本地感染病例145例（62.50%）,缅甸输入性病例87例（37.50%）。2013年瑞丽市登革热本地感染病例发病率为77.69/10万。主要流行地区为瑞丽市城区（53.45%,124/232）、姐告镇（16.81%,39/232）和勐卯镇（8.19%,19/232）。经序列测定,获得17株病毒的C/PreM区基因核苷酸序列,系统进化分析表明,5株为登革Ⅰ型病毒,12株为登革Ⅱ型病毒,均与东南亚登革病毒流行株具有较近的亲缘关系。结论瑞丽市在2013年发生了输入性和本地感染并存的登革热流行,并存在登革Ⅰ型和Ⅱ型病毒共同流行,来自缅甸的登革热输入性病例是引起本次登革热本地流行的主要原因。加强输入性病例的监测和管理是防止该病再次流行的关键措施。