2012年云南省德钦县鼠疫疫源地调查实验室检测结果与分析

目的调查了解云南省德钦县是否存在鼠疫自然疫源地,为做好鼠疫预防控制工作提供依据。方法 2012年6—7月,应用现场调查和实验室检测结合的方法在德钦县开展鼠疫调查研究工作。对采集的样本采用间接血凝试验(IHA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)、胶体金免疫层析(GICA)3种方法进行鼠疫F1抗原和F1抗体的实验室检测,对旱獭脏器进行鼠疫菌分离培养。结果捕获的9只旱獭脏器未分离到鼠疫菌,F1抗原检测均阴性;174份犬血清、9份旱獭血清、23份鼠血清、853份鼠心脏浸液进行F1抗体检测,犬血清IHA阳性2份、ELISA阳性16份、GICA阳性3份,其中2份犬血清3种方法检测均阳性,免疫印迹实验证实,能与F1抗原发生特异性显色反应。结论德钦县检出鼠疫F1抗体阳性犬血清,需进一步调查证实德钦县是否存在鼠疫自然疫源地。

云南省家鼠鼠疫监测技术方案评估与研究

目的现场评估云南省家鼠鼠疫监测技术和方案,科学调整该省家鼠鼠疫监测方法和模式,提高监测质量和应急处置能力。方法随机抽取6个监测县(区),对48个固定点和流动点开展鼠密度调查;统一制定鼠疫监测调查表,对监测执行单位和个人进行现场评估。结果现场监测6县(区)固定点平均鼠密度为2.32%,流动点(菜园地和农耕地)和林地平均鼠密度分别为7.35%和5.01%;监测实际支出平均为29 089元/年;部分县级鼠疫实验室尚未达到生物安全二级实验室要求,应急装备基本配置参差不齐。结论云南省的鼠疫监测方案应根据家鼠鼠疫监测工作需要,进行合理调整,增加监测经费投入,提高监测效率,为全省分析疫情和科学防治鼠疫提供可靠依据。

云南省鼠疫耶尔森菌多位点可变数目串联重复序列分析

目的通过多位点可变数目串联重复序列分析(multiple-locus variable-number tandem-repeat analysis,MLVA)方法,对云南省鼠疫菌株进行基因分型。方法采用聚合酶链反应(PCR)和毛细管电泳,通过BioNumerics软件进行处理,分析云南省158株鼠疫耶尔森菌基因型。结果选取鼠疫菌的14个VNTR位点,5个VNTR位点对云南省鼠疫菌具有多态性分析意义,利用这5个位点对云南菌株进行分析,云南158株鼠疫菌可分为2个群,3个簇,5个基因型,野鼠鼠疫菌属于A簇,丽江玉龙鼠疫菌属于B簇,家鼠鼠疫菌属于C簇,与传统的生态分型结果吻合。结论本次试验筛选的5个位点可以用于云南省鼠疫菌的分型,云南家鼠鼠疫菌、野鼠鼠疫菌及玉龙鼠疫菌分属不同的基因簇,玉龙鼠疫菌与野鼠鼠疫菌同属一个群,聚类结果与实际的地理相关性很好。

云南省鼠疫耶尔森菌规律成簇间隔短回文重复序列分型

鼠疫耶尔森菌（鼠疫菌）基因组中包含3个规律成簇的间隔短回文重复序列（CRISPR）位点（YPa,YPb和YPc）.本研究对云南省不同生态型鼠疫菌株的CRISPR序列进行分析,了解不同鼠疫疫源地及鼠疫菌株间的相互联系.

2007-2012年云南省居民区鼠疫宿主动物调查及其地理分布

目的 探讨云南省居民区鼠疫宿主动物地理分布格局及其与鼠疫的关系.方法 根据云南省不同经纬度、海拔等自然环境条件,在2007年4月至2012年11月,选取云南省17个县（市）的自然村作为调查点,开展室内鼠和蚤的种类、数量和生物量的调查,运用群落结构指标对居民区鼠类的群落特征和沿环境梯度的空间分布进行研究.结果 在调查的17个县（市）室内共捕获小兽390只,经分类鉴定隶属于3目4科7属11种.其中,黄胸鼠、大足鼠、褐家鼠为居民区优势种,分别占33.85％（132/390）、20.77％（81/390）和16.92％（66/390）.居民区鼠类的经度分布,以黄胸鼠最广,东经98°～105°均有分布,其次为褐家鼠、斑胸鼠和小家鼠;室内鼠类纬度分布和垂直分布相似,均以黄胸鼠分布最广,北纬21°～＜28°和海拔500～＜3 500 m均有分布,其构成比随着纬度和海拔的增加呈现先升高后降低的趋势,逐渐更替为大足鼠、齐氏姬鼠等鼠种.室内鼠疫宿主动物的物种丰富度随经纬度增加呈现先增高后降低的分布格局,分别在东经98°～＜101°和北纬23°～＜28°形成高峰,而垂直分布显示出低海拔和高海拔地带物种丰富度相对较低的特征,高峰为1 000～＜1 500 m和2 000～＜2 500 m垂直带.结论 云南居民区鼠疫宿主动物的地理空间分布均表现为聚集型分布,经纬度和海拔等重要环境因素不仅决定着不同疫源地室内鼠疫宿主动物的地理分布格局,也直接影响鼠疫流行和传播的模式.

云南省鼠疫菌FseI酶切分型及其流行病学意义

目的构建云南省鼠疫菌FseI酶切的脉冲场凝胶电泳（PFGE）图谱库并探讨其流行病学意义。方法采用限制性内切酶FseI对云南家、野鼠型及丽江玉龙鼠疫菌株进行酶切分析，并聚类分析电泳图谱。结果30株被试菌株分为16种PFGE型别，其相似性系数为79．8％～100．O％；16种PFGE基因型可以分为4个簇，除EV76自成一簇，其余3个簇分别为家鼠型基因簇、野鼠型基因簇及玉龙基因簇。结论云南省鼠疫菌PFGE基因型与生态型、生物型相吻合，具有一定的区域聚集性，而丽江玉龙鼠疫菌为一个独立基因簇。

云南省鼠疫耶尔森菌脉冲场凝胶电泳分析

目的构建云南省鼠疫菌株脉冲场凝胶电泳（PFGE）图谱库，为云南鼠疫的溯源及分型防控提供依据。方法选取云南省家、野鼠型以及玉龙鼠疫菌株共29株，分别采用AscI和FseI两种内切酶对菌株进行酶切分析，并使用BioNumerics6．6软件对图谱聚类。结果PFGE分析可以将29株鼠疫菌分为20个基因型，这些基因型又归为3大簇，即家鼠基因簇、野鼠基因簇以及玉龙基因簇，家鼠基因簇又可分为德宏亚簇、文山亚簇及临沧亚簇。结论云南鼠疫菌PFGE分子分型具有区域聚集性；PFGE基因型与菌株生态型能够很好地对应；玉龙鼠疫菌是云南一个独立的PFGE基因型。

云南省家、野鼠两型鼠疫菌比较蛋白质组的初步研究

云南省存在家、野鼠两型鼠疫疫源地。已有研究证实，两型鼠疫菌具有不同的生物学特性[1]，对人群的危险度也不尽相同。进一步探究二者间的差异，为制定合理的防治策略提供更多依据。蛋白质组分析是一种以双向电泳和飞行质谱鉴定为核心技术的方法，具有高通量、重复性好以及较敏感等优点。在鼠疫菌的蛋白质组分析中，

云南省鼠疫菌株差异片段基因分型及其流行病学特征

目的对云南省鼠疫菌株进行基因分型，探究云南各型菌株之间的内在联系。方法选取云南家鼠、野鼠及玉龙鼠疫菌共171株进行试验，采用鼠疫菌基因组23个差异片段（DFR）进行分型，并运用BioNumerics5．0进行聚类分析。结果23个差异片段将171株鼠疫菌分为7个基因组型：Genomovar5、Genomovar7、Genomovar9型及4个新发现的基因型。7株玉龙型菌株都为Genomovar5基因型；16株野鼠型（滇西纵谷型）鼠疫菌株被分为3个基因型，其中13株为Genomovar7基因型，2株为Genomovar9基因型，1株为新发现的Genomovar—ynl基因型；148株云南家鼠型（滇闽居民型）鼠疫菌株被分为4个基因型，其中145株为Genomovar9基因型．3株为3个新发现的基因型，分别为Genomovar-yn2、一yn3、一yn4基因型。生态型聚类分析显示，玉龙型鼠疫菌株与滇西纵古型（野鼠型）菌株的基因型较为相似（87．20％），与滇闽居民型（家鼠型）相似度较小（73．75％）。2株滇西纵谷型菌株与滇闽居民型的主基因型同为Genomovar9基因型。滇西纵谷型Genomovar-ynl基因型与Genomovar7基因型相似，但缺失DFR11。滇闽居民型Genomovar-yn2、-yn3、-yn4基因型与Genomovar9基因型相似，但分别缺失了DFRIO、DFR9、DFR11。结论在野鼠型鼠疫菌株中新发现了1种基因型，在家鼠型鼠疫菌株中新发现了3种基因型，在野鼠型鼠疫菌株中发现了家鼠型鼠疫菌株。玉龙鼠疫菌株的基因型与滇西纵谷型（野鼠型）菌株的基因型相似较高，与滇闽居民型（家鼠型）菌株的基因型相似度较小。

鼠疫菌F1抗体/抗原酶联免疫诊断试剂盒的应用评价

目的对兰州生物制品研究所有限责任公司研制的鼠疫菌F1抗体酶联免疫诊断试剂盒和鼠疫菌F1抗原酶联免疫诊断试剂盒进行临床应用评价。方法采用双抗原/抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)、间接血球凝集试验(IHA)、胶体金免疫层析试验(GICA)3种方法的诊断试剂对比检测云南省地方病防治所中心实验室保藏的和现场采集的血清样品和脏器样品,对血清样品做鼠疫菌F1抗体检测,对脏器样品做鼠疫菌F1抗原检测。结果在358份血清样品中,ELISA试剂检出F1抗体阳性52份(14.52%),IHA试剂检出阳性37份(10.34%),GICA试剂检出阳性45份(12.57%)。ELISA与IHA试剂的符合率为95.23%,与GICA试剂的符合率为96.92%。经统计学χ2检验,ELISA试剂检出F1抗体阳性率高于IHA试剂(χ2=11.53,P=0.000 7),与GICA试剂检出的差异无统计学意义(χ2=3.27,P=0.070 4)。进一步分析滴度差值频数,ELISA试剂检测人血清的敏感性高于IHA试剂的样品占87.5%。在117份脏器样品中,3种试剂均检出F1抗原阳性15份(12.82%),符合率100%。滴度差值频数比较,ELISA试剂检测敏感性高于反向间接血球凝集试验(RIHA)试剂的样品为78.57%。结论兰州生物制品研究所有限责任公司研制的鼠疫菌F1抗体酶联免疫诊断试剂盒和鼠疫菌F1抗原酶联免疫诊断试剂盒性质特异,其敏感性优于IHA试剂盒和GICA试剂条,值得在鼠疫的监测和快速诊断中推广应用。

云南省德钦县犬感染嗜吞噬细胞无形体的调查

目的了解云南省德钦县犬感染嗜吞噬细胞无形体的状况。方法对2013—2014年期间在德钦县采集的315份犬血标本，应用巢式聚合酶链反应进行嗜吞噬细胞无形体16SrRNA基因扩增和测序分析，并将所测序列与GenBank中注册的基因序列进行同源性和进化树分析。结果315份犬血样本中共有18份扩增到目的片段，总阳性率为5．71％（18／315），其中中华田园犬的阳性率为7．14％（12／168），藏犬的阳性率为5．13％（4／78），哈巴犬的阳性率为2．99％（2／67），狼犬中未检出HGA。所检出的嗜吞噬细胞无形体16SrRNA基因与GenBank中收录的部分嗜吞噬细胞无形体16SrRNA基因序列的同源性高达99％～100％。进化树分析结果显示，当地无形体分为2类流行株，将其命名为YunnanHGA1和YunnanHGA2，分别占检出菌株的16．67％和83．33％。YunnanHGA1与在乌拉圭、西伯利亚和远东地区发现的全沟硬蜱中检测到的无形体片段（HM366583）同源性为100％，YunnanHGA2与加拿大发现的肩突硬蜱中检测到的无形体片段（HG916766）同源性为99％。结论云南省德钦地区犬存在嗜吞噬细胞无形体的感染，进一步开展相应媒介、宿主及人群感染调查十分必要。

云南省香格里拉县小型兽类的组成与分布

目的调查了解香格里拉县小型兽类的构成与分布。方法 2011年6-7月,以香格里拉县6个乡镇,海拔2500～4900 m区间4种生态环境为调查的空间范围。分别采用笼夹法、圈套、吊杆扣、挖洞等方法捕获小型兽类,并分类计数。结果共捕获小型兽类及其他中型动物4目7科(亚科)14属21种共425只。其中,啮齿目种类最多,有4科11属15种,占总种数的71.43%,总捕获数的95.76%,齐氏姬鼠捕获数最多,占捕获总数的36.47%;食虫目1科1属4种,兔形目1科1属1种,食肉目1科1属1种。结论香格里拉县境内,不同生态环境和垂直梯度带中小型兽类的种类和构成不同:高山灌丛草甸以喜马拉雅旱獭和藏鼠兔为主;林区以姬鼠属鼠类占优势;农耕地齐氏姬鼠为优势种,居民区以大足鼠和社鼠为主。

云南鼠疫疫源地分布与演变

鼠疫是一种发病急、传播快、病死率高、传染性强的自然疫源性人兽共患病。鼠疫自然疫源地是在具备适宜的地理景观条件下，由宿主动物、传播媒介、鼠疫菌在长期的共同进化中相互适应而形成的特殊生态系统。

云南鼠疫菌Asc I酶切分型及其流行病学意义

目的构建以AscI酶切的云南省鼠疫菌PFGE图谱库并探究其流行病学意义。方法采用限制性内切酶AscI对云南家、野鼠型及玉龙鼠疫菌进行酶切分析，并对电泳图谱进行聚类分析。结果30株被试菌株分为15种PFGE型别（相似性系数为88．9％～100．0％）、5个簇、4个群，除404号菌与EV76归为一群，其余3个群分别为家鼠型基因群、野鼠型基因群及玉龙基因群。结论云南鼠疫菌PFGE基因型与生态型相吻合，具有一定的区域聚集性；玉龙鼠疫菌是云南独立的一个基因群。

布鲁氏菌病血清学诊断靶点的研究进展

布鲁氏菌病是由布鲁氏菌属细菌性引起的一种全世界广泛分布的人兽共患慢性细菌性传染病。人患病后,病程长,反复发作,长期不愈;且很难通过流行病学和临床症状进行确诊。目前对于布病的诊断方法多采用血清学实验诊断,诊断方法的核心则是诊断靶点,其决定了诊断的特异性及敏感性。本文就各诊断靶点的研究进展进行综述。

杂交瘤细胞(10株)染色体形态、数目与抗体分泌的关系

目的:探讨杂交瘤细胞染色体形态、数目与抗体分泌能力及稳定性的关系。方法:对我室融合成功的10株杂交瘤细胞,采用秋水仙素法制备染色体,分别计数100个完整的中期分裂相细胞,并观察其形态。制备腹水和收集细胞培养上清液,间接ELISA法检测抗体效价。结果:经染色体计数与分析,10株杂交瘤细胞中,7株瘤株细胞间染色体形态一致,分散好,既有端着丝点染色体,也见中间着丝点染色体,染色体数目的标准差小于5.0,腹水和细胞培养上清抗体效价高,分泌稳定性好;3株染色体数差异大、标准差大的瘤株中,2株抗体效价低,分泌不稳定。结论:杂交瘤细胞染色体形态、数目与其分泌单克隆抗体的能力和稳定性有关,进行染色体分析有利于了解瘤株特性,可作为筛选高效、稳定瘤株的参考依据。

云南香格里拉县不同生境小型兽类群落多样性特征

目的研究香格里拉县小型兽类动物群落结构及多样性特征。方法用群落生态学方法计算群落结构、多样性和相似性指数。结果2011年6～7月，在该地区4类不同生态环境中，捕获小型兽类425只，包括4目7科14属21种；多样性分析结果表明，4种不同生境的Shannon．Winner多样性指数0．3857～1．9537，Pielou均匀度指数0．5564～0．7862，Simpson优势度指数O．1809—0．7743，Margalef丰富度指数0．0501。2．3938；Whittaker群落相似性指数显示，林区与农耕地生境小兽群落相似性相对较高，居民区和高山灌丛草甸小兽群落完全不同。结论香格里拉县小型兽类群落物种组成和多样性因生境条件的差异而不同，多样性以林区生境最高，高山灌丛草甸次之，农耕地及居民区较低。

脉冲场凝胶电泳技术简介及其在细菌分子分型中的应用

目前可用于细菌分子分型的方法较多,脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术以其重复性好、分辨力强的优势被作为细菌分子分型的"金标准"广泛应用;利用PFGE技术对细菌进行分型并分析细菌间分型结果的差异,可以有效地对疾病进行监测,追溯疾病的感染来源,明确感染途径,追溯其遗传特征,为细菌性疾病的预防与控制提供分子生物学证据。

重组鼠疫菌F1抗原制备胶体金免疫层析试纸条的研制与现场应用评价

目的 表达和纯化重组鼠疫菌F1抗原（rF1）,构建胶体金免疫层析试纸条（GICA）,检测和评价该试纸条的现场应用效果.方法 以镍离子金属螯合（Ni-NTA）亲和层析柱和脱盐柱对rF1进行纯化并构建GICA,应用GICA、双抗原夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）和间接血球凝集试验（IHA）3种方法对1份鼠疫菌免疫兔血清和1 685份现场血清样本（包括94份人、939份犬、34份猫、609份鼠和9份旱獭）进行F1抗体检测.结果 rF1得到高效表达并实现较好纯化.GICA、ELISA、IHA 3种方法检测1份鼠疫菌免疫兔血清,结果均为阳性,最低检测滴度ELISA法高于GICA法（1∶10×2^11比1∶10×2^9）,GICA法高于IHA法（1∶10×29比1∶10×28）.对1 685份现场血清样本进行检测,GICA法阳性89份（5.28％）,IHA法阳性53份（3.15％）,ELISA法阳性101份（5.99％）;GICA法与IHA法的总符合率为97.3％,与ELISA法的总符合率为97.9％.配对资料x2检验结果显示,GICA法阳性检出率高于IHA法（x2=26.63,P＜0.05）,但与ELISA法比较,差异无统计学意义（x2=3.36,P＞0.05）.结论 rF1表达和纯化成功,用其构建的GICA特异性强,敏感性高,与IHA、ELISA法结合应用,能有效提高鼠疫检测的速度和质量.

应用3种方法检测鼠疫恢复期患者血清中F1抗体水平

目的了解鼠疫恢复期患者血清F1抗体水平的维持情况及间接血凝、酶联免疫、胶体金免疫层析技术在鼠疫F1抗体检测中的应用。方法应用间接血凝试验(IHA)、双抗原夹心酶联免疫吸附试验(DAgs-ELISA)和胶体金免疫层析试验(GⅠCA)3种方法,对比检测25例鼠疫恢复期患者血清中F1抗体。结果 25份血清样品F1抗体IHA阳性19份,DAgs-ELISA阳性21份,GⅠCA阳性18份。F1抗体滴度:IHA 15例为1∶80～1∶320;ELISA 10例为1∶640～1∶1280。结论大部分鼠疫恢复期患者血清能检出F1抗体,3种F1抗体检测方法均为敏感、特异的检测技术。