脂肪间充质干细胞外泌体对体外培养压力损伤的大鼠RGCs的保护作用

目的:通过体外建立大鼠视网膜神经节细胞(RGCs)压力损伤模型,研究脂肪间充质干细胞(ADSCs)外泌体对损伤的RGCs的保护作用。方法:培养ADSCs收集上清提取并鉴定外泌体,将体外培养大鼠RGCs分为正常培养的RGCs对照组、不同压力(40、80、120 mmHg)培养的RGCs模型组、不同压力培养的RGCs加入外泌体治疗组,通过CCK-8法检测各组RGCs细胞增殖活力,qPCR法检测各组RGCs中BDNF、Caspase-3的mRNA表达水平,Western Blot检测各组RGCs中BDNF、Caspase-3的蛋白表达水平。结果:CCK-8法检测发现,在对照组中,与24 h的细胞增殖活力相比,48 h时细胞增殖活力上升(P<0.05)。在48 h时,与加压40、80、120 mmHg模型组相比,加入外泌体后细胞活力均上升(均P<0.05)。qPCR法检测发现,与对照组比较,40 mmHg组中BDNF mRNA表达下降,但无差异(P>0.05),80、120 mmHg组中BDNF mRNA表达下降(均P<0.05)。加压40、80 mmHg组加入外泌体后RGCs的BDNF mRNA表达均上升(均P<0.05),加压120 mmHg组加入外泌体后RGCs的BDNF mRNA表达上升,但无差异(P>0.05)。与对照组比较,加压40 mmHg组中Caspase-3的mRNA表达上升,但无差异(P>0.05),加压80、120 mmHg组中Caspase-3 mRNA表达均上升(均P<0.05)。加压40、80 mmHg组加入外泌体治疗后RGCs的Caspase-3 mRNA表达下降(P<0.05),加压120 mmHg组加入外泌体治疗后RGCs Caspase-3的mRNA表达下降,但无差异(P>0.05)。Western Blot检测发现,与对照组比较,加压40 mmHg组中BDNF蛋白表达下降,但无差异(P>0.05),加压80、120 mmHg组中BDNF蛋白表达下降(均P<0.001)。与模型组相比,加入外泌体治疗后BDNF蛋白表达均上升(均P<0.05)。与对照组比,加压后各模型组中Caspase-3蛋白表达均上升(均P<0.05);与模型组相比,加入外泌体治疗后各组Caspase-3蛋白表达均下降(均P<0.05)。结论:ADSCs来源的外泌体能够增加体外培养不同压力损伤的大鼠RGCs的细胞增殖活力,提高BDNF的mRNA及蛋白表达水平,降低Caspase-3的mRNA及蛋白表达水平,说明ADSCs来源的外泌体对体外培养压力损伤的大鼠RGCs具有保护作用。

特发性黄斑裂孔的发病机制及治疗进展

特发性黄斑裂孔(IMH)是指无明显病因发生于黄斑区视网膜神经上皮层的全层组织缺损。目前,随着对IMH认识的逐渐深入及其治疗方式的不断创新和改进,其治疗技术也呈现成熟化及多样化。研究表明,早期直径较小的IMH可以进行观察随访;奥克纤溶酶(Ocriplasmin)已被批准用于中小型黄斑裂孔和黄斑粘连(VMA)的患者;内界膜(ILM)剥除可提高解剖闭合率。然而,对于直径<250μm的IMH,尚不确定是否总是需要剥除ILM。本文讨论了IMH的发病机制、分期、分类及当前的治疗方案。基于IMH的特点和患者的差异性,拟提出一种基于循证医学的方法来为个体患者选择最佳和最实际的治疗方案。

多模式影像技术诊断中心性浆液性脉络膜视网膜病变并发脉络膜新生血管1例

中心性浆液性脉络膜视网膜病变(central serous chorioretinopathy,CSC)是临床常见疾病,近年来CSC合并(choroidal neovascularization,CNV)的病例时有报道,我们应用多模式影像技术诊断和随访CSC合并CNV病例1例,讨论多模式影像技术在该病中的应用价值。

内质网应激在年龄相关性黄斑变性中的研究进展

年龄相关性黄斑变性(ARMD)是老年人不可逆视力损害的主要原因,以黄斑区玻璃膜疣的形成、色素紊乱、地图样萎缩、脉络膜新生血管形成为主要病理特征,视网膜色素上皮(RPE)细胞功能失调与ARMD关系密切。内质网是真核生物一个特殊的细胞器,主要负责蛋白的合成、修饰、整合和质量控制,并参与Ca^(2+)稳态维持和脂质的生物合成。细胞内外环境的变化,导致内质网应激,激活细胞内的信号转导通路——未折叠蛋白反应,以恢复细胞功能和维持细胞内环境稳态。但长期强烈的内质网应激可能导致内质网动态平衡难以恢复,而触发细胞凋亡。ARMD的发病机制尚未完全阐明,但大量研究证明内质网应激与其相关。本文就内质网应激的信号转导通路、内质网应激在RPE中的生理作用及内质网应激可能介导ARMD的机制作一综述。

IOL睫状沟植入联合IOL光学部周边后囊孔嵌顿术对儿童外伤性白内障的疗效观察

目的 比较外伤性白内障摘出术后不同人工晶状体（IOL）植入的临床疗效,寻找更优的儿童外伤性白内障的手术方式.方法 采用回顾性病例对照研究方法.收集2012年6月至2015年6月收治的60例60眼儿童外伤性白内障患者的病历资料,其中男44例,女16例;年龄1～14岁,平均（5.99±2.80）岁.60例患儿均在全身麻痹下行手术治疗,均由同一术者完成手术,均行外伤性白内障摘出＋IOL植入＋前段玻璃体切割术,根据后囊膜损伤情况将患者分为2个组,联合手术组患者30例30眼行IOL睫状沟植入联合IOL光学部周边后囊孔嵌顿手术,单纯手术组患者30例30眼行单纯IOL睫状沟植入手术,术后随访1～6个月,平均（4.3±1.2）个月.对比分析2个组手术前后最佳矫正视力BCVA、中央视轴区混浊程度、IOL偏斜度、术后并发症及手术操作时间.结果 联合手术组和单纯手术组术后不同BCVA患眼比例与术前比较,差异均有统计学意义（联合手术组：x2=7.548,P＜0.05;单纯手术组：x2=5.579,P＜0.05）.2个组患儿中央视轴区不同分级混浊患眼数量及不同BCVA患眼数量比较差异无统计学意义（x2=0.362,P＞0.05）.联合手术组中IOL偏斜度较大患眼数量少于单纯手术组,术后不同IOL偏斜度患眼数量比较差异有统计学意义（x2=9.858,P＜0.05）.联合手术组中并发症患眼数量少于单纯手术组,2个组不同并发症患眼数量比较,差异有统计学意义（x2=7.200,P＜0.05）.2个组不同手术操作时间患眼数量比较,差异无统计学意义（x2=0.658,P＞0.05）.结论 IOL睫状沟植入联合IOL光学部周边后囊孔嵌顿术对于治疗儿童外伤性白内障更为有效,并发症少,IOL偏斜度低.

不同治疗方法对改善甲状腺相关眼病症状的效果评价

目的评价手术加全身激素治疗、球旁局部激素注射、全身激素治疗用于不同病情甲状腺相关眼病(thyroid-associated ophthalmopathy,TAO)的疗效。方法入组36例(72眼)TAO患者,根据病情分为三组并给予相应治疗,手术+全身激素组(手术组)、球旁局部注射激素治疗组(球旁组)和全身激素组(激素组)。比较治疗前及治疗后视力、眼球突出度和临床活动性评分(clinical activity score,CAS)改善情况。结果手术组、激素组患者治疗前、治疗后视力比较,差异无统计学意义(P>0.05),治疗后眼球突出度降低、CAS减少,与治疗前比较,差异均有统计学意义(P<0.05),且眼球突出度降低幅度最大。球旁组治疗后与治疗前比较,视力提高、眼球突出度降低、CAS评分减少,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。眼球突出度降低的有效率分别为手术组100.0%、球旁组65.3%、激素组3.2%,手术组、球旁组有效率均优于激素组(均为P<0.05)。对改善视力、降低CAS评分的有效率三组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论对严重的TAO患者施行眶减压手术是降低眼球突出度首选治疗方式。球旁局部激素注射总体效果优于全身激素治疗,但是还需要更多的临床研究来比较球旁局部激素注射治疗、长期激素治疗、短期激素冲击治疗三者间的优劣。

虹膜周边前后节沟通术在恶性青光眼患者治疗中的应用

目的评价虹膜周边前后节沟通术治疗恶性青光眼及具有恶性青光眼倾向的原发性闭角型青光眼患者的临床效果。方法收集我院2013年5月至2018年4月行虹膜周边前后节沟通术的88例(92眼)恶性青光眼及具有恶性青光眼倾向的原发性闭角型青光眼患者资料。观察手术前后眼压、最佳矫正视力、中央及周边前房深度及房角的变化情况,术后随访(25.7±13.5)个月。结果恶性青光眼患者术前药物控制下眼压(34.27±12.95)mmHg(1 kPa=7.5 mmHg),术后第7天及末次随访眼压分别为(12.94±3.12)mmHg、(13.17±4.54)mmHg,与术前相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。末次随访最佳矫正视力较术前明显提高(P<0.05)。有恶性青光眼倾向的原发性闭角型青光眼患者术前患眼药物控制下眼压(20.50±7.41)mmHg,术后第7天及末次随访眼压分别为(13.92±4.39)mmHg、(15.25±4.54)mmHg,与术前相比,差异均有统计学意义(均为P<0.01)。术后最佳矫正视力与术前相比差异无统计学意义(P>0.05)。所有患者中央前房深度术前为(1.67±0.33)mm,术后1个月为(3.35±0.35)mm,差异有统计学意义(P<0.01)。患者术前周边前房深度均<1/2 CT,术后89眼周边前房深度≥1 CT。术前72眼房角关闭范围>180°,术后房角完全开放38眼。结论虹膜周边前后节沟通术可有效治疗恶性青光眼及具有恶性青光眼倾向的原发性闭角型青光眼患者。

房水流出通路结构及功能显像的研究进展

房水作为重要眼内容物之一,一直处于动态循环中,若房水流出通路(AHO)中的任一部位受阻,都将导致眼压升高,并伴随青光眼的发生,进而出现视神经损伤,严重影响视功能。而开角型青光眼患者的房角呈开放状态,其眼压升高是房水流出阻力增加所致,因此,直观地观察AHO的结构,评价其功能变化,有助于我们更清晰地了解AHO的阻力所在,进一步阐明开角型青光眼的发病机制。目前对于AHO的显像技术包括光学相干断层扫描(OCT)以及AHO造影术等。本文将就AHO结构及功能显像的研究进展做一综述。

超声乳化联合房角分离术治疗急性闭角型青光眼合并白内障

目的评价白内障超声乳化吸除、人工晶状体植入联合房角分离术治疗急性闭角型青光眼合并白内障的临床疗效。方法收集昆明医科大学第四附属医院2018年1月至2018年6月住院行白内障超声乳化吸除、人工晶状体植入联合房角分离手术的38例(38眼)急性闭角型青光眼合并白内障患者。观察手术前、后眼压,视力,中央及周边前房深度及房角的变化情况,随访12~24个月。结果患眼术前药物控制下眼压范围8.3~32mmHg,平均(17.67±4.76)mm Hg,术后第1天及末次随访平均眼压分别为(13.63±5.82)mm Hg及(12.25±4.54)mm Hg,与手术前相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。患者手术后最佳矫正视力较术前明显提高。术前患者中央前房深度(1.42±0.34)mm,术后中央前房深度(3.41±0.13)mm,与术前比较,差异有统计学意义(P<0.05)。患者术前周边前房深度均<1/2CT,术后所有患者周边前房深度不同程度加深,其中29眼周边前房深度≥l CT。术前22眼房角关闭范围>180°,术后房角关闭所在象限可见不同程度的开放,周边虹膜粘连范围缩小,术后房角完全开放25眼。4眼术中植入张力环,术后5眼发生轻度角膜水肿,3例患者出现前房渗出,经对症处理后吸收。结论采用白内障超声乳化吸除、人工晶状体植入联合房角分离术治疗急性闭角型青光眼合并向内障安全有效,但临床上手术方式的选择应充分考虑适应证。

改良结膜入路眼眶内下壁减压术治疗轻中度甲状腺相关眼病的临床效果

目的评价改良结膜入路眼眶内下壁减压术治疗轻中度甲状腺相关眼病的疗效。方法回顾性分析2017年1月至2018年8月在云南省第二人民医院行改良结膜入路眼眶内下壁减压术治疗的10例(11眼)轻中度甲状腺相关眼病患者。所有患者在术前均给予眼眶水平位、冠状位和矢状位CT检查,测量视力、眼球突出度、复视情况,检查眼外观进行眼前段照相等。将手术前、后眼球突出度,视力以及复视的改善情况作为效果评价指标,对相关数据进行统计和分析。结果本组11眼术前眼球突出度为(18.94±1.40)mm,术后(15.22±1.46)mm;术后与术前比较,眼球突出度降低(3.72±0.64)mm,差异有统计学意义(t=18.379,P<0.001)。术前视力为0.53±0.29,术后为0.62±0.32;术后与术前比较,视力提高0.08±0.10,差异有统计学意义(t=-2.733,P=0.021)。术前复视2例;术后新发生复视2例,均为轻度复视。术前已存在复视的患者,术后复视程度无加重。结论改良结膜入路眼眶内下壁减压术能有效改善甲状腺相关眼病患者的眼球突出度与视力,术后复视发生概率低,手术切口隐蔽美观,是一种可靠且有效的眶减压术式。

年龄相关性黄斑变性的发病机制与抗氧化治疗

年龄相关性黄斑变性(ARMD)好发于50岁及以上中老年人,呈进行性发展,可导致单眼或双眼部分甚至完全性视力丧失。虽然目前其发病机制尚不明确,但已有数据表明氧化应激在ARMD的发病过程中起到了重要作用。近年来对ARMD抗氧化机制方面的研究逐渐成为研究热点,本文就氧化应激介导ARMD的发生机制以及ARMD抗氧化剂的应用作一简要综述。

压力诱导兔视网膜干细胞向视网膜神经节细胞分化研究

目的探讨压力对与兔视网膜神经节细胞(RGCs)共培养的视网膜干细胞(RSCs)分化的影响。方法选取SPF级新西兰孕22 d兔,取出胚胎,获取视网膜睫状缘色素上皮组织,培养原代RSCs。选取SPF级新生新西兰大白兔6只,分离视网膜神经上皮层组织,培养原代RGCs。采用巢蛋白(Nestin)抗体免疫荧光染色法、溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)流式细胞术分析、RSCs自发分化细胞免疫荧光检测及流式细胞术分析鉴定体外培养的兔RSCs,采用免疫荧光染色法以Brn3b抗体及Thy1.1抗体鉴定RGCs;将RGCs和RSCs分别放在Transwell的上下层培养,构建共培养体系。分别采用实时荧光定量PCR法和Western blot法检测0、20、40、60、80 mmHg(1 mmHg=0.133 kPa)压力条件下室RSCs及分化所得细胞的Nestin和Thy1.1 mRNA和蛋白表达变化。结果体外培养的兔RSCs特异性标志物Nestin抗体染色阳性;BrdU流式细胞术分析结果显示,BrdU阳性细胞占分离RSCs细胞的(92.26±3.28)%;免疫荧光检测结果显示,RSCs分化细胞中,部分细胞Brn3b抗体表达阳性,部分细胞GS抗体表达阳性。流式细胞术双色分析结果显示,Brn3b和GS阳性细胞率分别为(13.00±3.06)%和(31.60±3.67)%。免疫荧光染色结果显示,体外培养的兔RGCs Brn3b抗体及Thy1.1抗体染色阳性。不同压力条件下RSCs及分化所得细胞的Nestin、Thy1.1 mRNA和蛋白相对表达量比较差异均有统计学意义(mRNA:F=127.600、137.400,均P<0.01;蛋白:F=82.480、158.700,均P<0.001),其中与0 mmHg相比,20、40、60、80 mmHg条件下,Nestin mRNA及蛋白相对表达量降低,Thy1.1 mRNA及蛋白相对表达量增加,差异均有统计学意义(均P<0.05)。40 mmHg时,Nestin mRNA和蛋白相对表达量最低,Thy1.1 mRNA和蛋白相对表达量最高。结论在一定范围内,压力能够促进与RGCs共培养的RSCs分化成视网膜神经节样细胞,压力过大会抑制RSCs的分化。

解郁升阳通窍方对慢性高眼压兔视网膜保护作用的研究

目的探讨解郁升阳通窍方(JSTF)对慢性高眼压兔视网膜的保护作用。方法取SPF级新西兰大白兔,随机分为正常组(NG),模型组(MG),高、中、低浓度JSTF治疗组(HCG、MCG、LCG),共5组,每组6只。建立慢性高眼压模型。造模后中药治疗组予不同浓度JSTF灌服,模型组以中浓度JSTF治疗组等体积蒸馏水灌服。正常组不做处理,常规饲养。监测眼压,造模后1个月处死动物。观察视网膜组织形态变化并检测视网膜神经节细胞(RGCs)计数及视网膜组织Caspase-3蛋白的表达。结果(1)眼压:造模后1个月,模型组及不同浓度JSTF治疗组眼压均较正常组升高(P<0.05)。(2)视网膜组织形态变化:与模型组相比,采用不同浓度JSTF治疗后1个月,内层视网膜结构紊乱减轻,RGCs及内核层神经细胞数量增多,视网膜变薄程度减轻。(3)RGCs计数:与正常组相比,模型组及不同浓度JSTF治疗组RGCs数量均减少(t_(MG)=164.800,t_(LCG)=101.400,t_(MCG)=64.190,t_(HCG)=47.100,均P=0.000),与模型组比较,不同浓度治疗组RGCs数量均增多(t_(LCG)=27.950,t_(MCG=)53.790,t_(HCG)=43.320,均P=0.000);与低浓度JSTF治疗组相比,中、高浓度JSTF治疗组RGCs数量均增多(t_(MCG)=24.760,t_(HCG)=22.410,均P=0.000)。(4)视网膜Caspase-3蛋白表达:正常组Caspase-3蛋白仅有少量表达,中浓度JSTF治疗组及模型组Caspase-3蛋白荧光强度均较正常组增高(t_(MCG)=79.470,t_(MG)=19.820,均P=0.000),中浓度JSTF治疗组Caspase-3蛋白荧光强度较模型组降低(t=44.510,P=0.000)。结论JSTF对慢性高眼压兔视网膜具有保护作用,能够减轻内层视网膜结构紊乱及视网膜变薄程度,并减少RGCs丢失。

内界膜剥除术治疗特发性黄斑裂孔的临床疗效

目的研究25G玻璃体切除联合内界膜剥除术治疗特发性黄斑裂孔的临床疗效,分析手术前后黄斑区视网膜厚度变化情况,并探究其与黄斑裂孔(macular hole,MH)大小的相关性。方法回顾性分析2017年1月至2019年6月昆明医科大学第四附属医院行25G玻璃体切除联合内界膜剥除术并行白内障超声乳化及人工晶体植入术的30例(30只眼)特发性黄斑裂孔患者的临床资料,采用SD-OCT测量术前MH最小直径、最大底径、术前及术后3月复诊时相同区域中心凹(C区)、黄斑IS、II、IN、IT4个象限视网膜厚度及神经节细胞复合体(ganglion cell complex,GCC)厚度。结果 30例MH患者初次闭合率为93.30%。术后平均BCVA较术前显著提高(P <0.001)。术后C区视网膜厚度较术前明显变薄(P <0.001);C区GCC厚度较术前变薄,但差异无统计学意义(P=0.253);IS、II、IN、IT视网膜及GCC厚度较术前均明显变薄(P <0.05),且IT象限变薄更明显。术后视网膜及GCC厚度与术前MH最小直径及最大底径无明显相关性(P>0.05)。结论内界膜剥除术治疗特发性黄斑裂孔手术效果明显、患者满意度高,是一种安全有效的手术方法。

羊膜在眼表疾病治疗的研究进展

羊膜是眼病治疗中常用的辅助材料.随着组织工程的发展,以羊膜为基础制备的新型羊膜制品(如羊膜滴眼液、交联羊膜、药物羊膜和羊膜细胞培养载体等)不仅保留了羊膜的组织生物学特征(如低免疫原性、促进上皮形成、抗纤维化和抗炎性、抗新生血管形成、抗菌性等),还赋予了羊膜新的优良特性,使羊膜在眼表疾病(如急性或慢性化学性眼烧伤、持续性角膜上皮缺损、大泡性角膜病变、角巩膜溃疡等)治疗上更加方便、有效,展现了广阔的临床应用前景。

甲状腺相关眼病免疫学发病机制研究进展

甲状腺相关眼病(thyroid-associated ophthalmopathy,TAO)通常发生于Graves病,两者有着相似的病理生理学特点。促甲状腺激素受体(thyroid-stimulating hormone receptor,TSHR)在Graves病以及TAO的病程中都扮演了重要的角色。在TAO中,TSHR表达于眼眶成纤维细胞的表面。多种因素,如细胞与体液免疫、促甲状腺免疫球蛋白(thyrotropin stimulating immunoglobulin,TSI)、促甲状腺激素(thyroid-stimulating hormon,TSH)、血小板衍生因子(platelet derived growth factor,PDGF)以及其他甲状腺抗体等,对眼眶成纤维细胞表面的TSHR产生影响从而共同激活疾病进程。激活的辅助性T细胞(helper T cell,Th cell)重新识别TSHR肽并通过促甲状腺激素受体抗体(thyrotrophin receptor antibody,TRAb)结合TSHR,促进眼眶成纤维细胞分泌炎症因子和趋化因子,增加透明质酸(hyaluronic acid,HA)的生成与脂肪形成,最终导致眼眶连接组织的重塑,如眼外肌增粗及眼眶脂肪的增生。此外,TAO患者的眼眶成纤维细胞表达高水平的胰岛素样生长因子-1受体(insulin-like growth factors-1 receptor,IGF-1R),刺激性的自身抗体直接作用于IGF-1R导致了TAO中眼眶成纤维细胞激活,并分泌炎症介质促进眼眶炎症。

羊膜的制备和保存

羊膜是眼科手术中一种常用的生物敷料,保存技术的差异可显著影响羊膜的生化组成和物理性质,还可能影响其临床疗效。冷冻、风干、冻干技术在羊膜制备中的进步以及复合羊膜的制备克服了新鲜羊膜不易保存的缺陷,保留了羊膜作为生物敷料的优良特性,有助于其在眼科及其他相关学科的应用。