自噬调控在大鼠缺血性脑卒中亚急性期神经修复中的机制研究

目的探究自噬调控在大鼠缺血性脑卒中亚急性期神经修复中的机制。方法选取8周龄250~280 g的SPF级雄性SD大鼠96只,根据随机数字表法将其分为假手术组、模型组、雷帕霉素组、3-甲基腺嘌呤组,每组24只。模型组、雷帕霉素组、3-甲基腺嘌呤组均建立大鼠左侧大脑中动脉闭塞再灌注模型,以Zea-longa评分1~3分为造模成功;假手术组除不插入线栓外,其余各步骤均相同。雷帕霉素组给予雷帕霉素(8 ng溶解于5μl 0.1%DMAO中),3-甲基腺嘌呤组给予3-甲基腺嘌呤(100μg溶解于5μl 0.1%DMAO中),假手术组、模型组给予5μl 0.1%DMAO溶液,均经侧脑室泵入。四组注射后留针5 min,1次/d,连续7 d。实验结束后,采用改良大鼠神经功能缺损评分(mNSS)、TTC染色、荧光染色、Western blot、免疫荧光检测探究缺血性脑卒中亚急性期大鼠神经功能及脑缺血半影区自噬相关指标的变化。结果模型组mNSS、脑梗死体积占比、微管相关蛋白轻链3(LC3)阳性细胞占比、Beclin-1及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白水平均高于假手术组,神经元核心抗原(NeuN)阳性细胞占比低于假手术组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。雷帕霉素组mNSS、脑梗死体积占比低于模型组,LC3阳性细胞占比、Beclin-1及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白水平、NeuN阳性细胞占比均高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。3-甲基腺嘌呤组mNSS、脑梗死体积占比高于模型组,LC3阳性细胞占比、Beclin-1及LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白水平、NeuN阳性细胞占比均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论大鼠缺血性脑卒中亚急性期自噬激活具有神经保护作用,自噬抑制反而使神经功能损伤增加,适度自噬可能是缺血性脑卒中研究的关键。