野黄芩苷对苯并芘致人胚肺成纤维细胞DNA损伤的保护作用

目的探讨野黄芩苷对苯并芘（benzo[a]pyrene，B（a）P）诱导的DNA损伤的保护作用。方法①采用稳定转染抑癌基因p53-GFP质粒的p53-/-MEF细胞（p53-GFP细胞）筛选野黄芩苷等小分子化合物对p53启动子的激活情况；②将MRC-5细胞分为DMSO对照组，B（a）P处理组，B（a）P和野黄芩苷共处理组，用Western印迹检测不同处理组MRC-5细胞中p-p53（Ser15）和γH2AX的蛋白表达情况。⑧将MRC-5细胞分为DMSO对照组，B（a）P处理组，B（a）P和野黄芩苷共处理组，Western印迹检测不同处理组MRC-5细胞中凋亡相关蛋白PARP的变化。结果荧光结果显示，10μmol／L的B（a）P能够明显激活p53-GFP荧光，其中野黄芩苷和B（a）P共处理后荧光表达被明显抑制；用Western印迹检测发现，与DMSO对照组相比，B（a）P处理的MRC-5细胞中p-p53（Ser15）和γH2AX的蛋白表达增加，PARP的切割增强，而野黄芩苷和B（a）P共处理的MRC-5细胞中p-p53（Ser15）和γH2AX蛋白表达水平较B（a）P处理组明显降低，同时PARP的切割明显减弱，并且具有浓度依赖性。结论本研究采用稳定转染p53．GFP质粒的p53-/-MEF细胞初步观察到野黄芩苷可能对苯并芘诱导的DNA损伤具有保护作用。在MRC-5细胞中的进一步研究证明，野黄芩苷与B（a）P共处理能降低MRC-5中p-p53（Ser15）和7H2AX的表达水平，同时能降低凋亡相关蛋白的表达，提示野黄芩苷对苯并芘致MRC-5细胞DNA损伤具有保护作用，其机制可能与抑制DNA损伤和凋亡通路有关。