主动脉内球囊反搏在心源性休克中的应用进展

心源性休克仍是现代医学中最具挑战性的临床疾病之一。机械支持正被越来越多地应用于心源性休克的管理。主动脉内球囊反搏(IABP)是最早和最广泛使用的机械循环支持类型之一。尽管IABP提供的血流动力学支持较新的机械循环支持设备少,但由于其置入和去除相对简单,且需要的血管通路尺寸小、安全性高,在适当的情况下仍可作为机械支持设备。目前的随机试验数据和荟萃分析支持IABP的安全性,但其治疗高危心肌梗死、心肌梗死合并心源性休克或高危经皮冠状动脉介入治疗和冠状动脉旁路移植术预防性使用IABP的数据有限,需要进一步对安放IABP的患者进行筛选、确定IABP安放时机,明确IABP的作用。

过表达NKx2.5基因间充质干细胞增强SDF-1/CXCR4轴促归巢改善心梗心功能

目的探讨过表达NKx2.5基因骨髓间充质干细胞(BMSC)通过增强SDF-1/CXCR4轴促BMSC归巢改善心梗后心功能。方法采用慢病毒使骨髓间充质干细胞内过表达NKx2.5(BMSC^(NKx2.5)),将空载体组及BMSC组作为对照组。采用RT-PCR检测各组细胞SDF-1、CXCR4及NKx2.5的表达及同时采用western-blot检测NKx2.5及SDF-1、CXCR4蛋白的表达。将BMSC^(NKx2.5)、BMSC、及BMSC空载体经尾静脉注射入小鼠心梗模型,同时设立BMSC^(NKx2.5)+AMD3100组,将心梗未处理组、假手术组、正常小鼠组作为对照组。采用心脏彩超检测心梗小鼠心功能的变化及采用western blot检测NKx2.5及SDF-1、CXCR4蛋白的表达。结果体外BMSC^(NKx2.5)组SDF-1及CXCR4及转录因子NKx2.5的表达最高(P<0.05)。体内实验证实BMSC^(NKx2.5)组心梗心功能改善最为明显(P<0.05),但当加入SDF-1-CXCR4轴抑制剂AMD3100后,心功能改善不明显。BMSC^(NKx2.5)组转录因子NKx2.5及SDF-1及CXCR4因子的表达最高(P<0.05),但加入AMD3100组后SDF-1及CXCR4的表达明显下降。结论BMSC^(NKx2.5)可以通过增强SDF-1/CXCR4轴促BMSC归巢改善心梗心功能。

过表达NKx2.5基因对间充质干细胞抗凋亡能力及对心肌梗死后心功能的影响

目的探讨过表达Nkx2.5基因对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSC)抗细胞凋亡能力及对心肌梗死后心功能的影响。方法采用糖氧剥夺[低氧无血清(oxygen glucose deprivation/reoxygenat,OGD/R)]条件下培养,建立细胞缺血模型,实验分为4组:正常条件培养下的骨髓间充质干细胞组(以下简写为BMSC组)、糖氧剥夺条件下培养的BMSC组(以下简写为BMSC+OGD/R组)、糖氧剥夺条件下培养的过表达空载体BMSC组(以下简写为BMSC空载体+OGD/R组)、糖氧剥夺条件下培养的过表达Nkx2.5 BMSC组(以下简写为BMSC^(Nkx2.5)+OGD/R组)。采用流式细胞技术检测各组BMSC的凋亡率,并提取BMSC蛋白,采用Western Blot法检测各组BMSC中的Caspase-3及前体、Caspase-8及前体、Caspase-9及细胞色素C蛋白量及Nkx2.5的表达,明确体外抗凋亡的途径。采用结扎冠状动脉左前降支建立小鼠心肌梗死模型,实验分为五组:假手术组、心肌梗死未处理组、心肌梗死后BMSC组、心肌梗死后BMSC^(空载体)组、心肌梗死后BMSC^(NKx2.5)组。通过心脏彩超评估小鼠心功能变化。正态分布的计量资料组间比较采用方差分析,两两比较采用LSD-t检验。结果BMSC+OGD/R组细胞凋亡率(12.98±1.24)%高于BMSC组(7.82±0.42)%,差异有统计学意义(P<0.001);BMSC^(NKx2.5)+OGD/R组细胞凋亡率(11.26±0.22)%低于BMSC+OGD/R组(12.98±1.24)%、BMSC^(空载体)+OGD/R组(13.14±0.70)%,差异有统计学意义(P<0.05)。BMSC^(Nkx2.5)+OGD/R组Caspase-3(0.72±0.08)及前体(0.89±0.09)、Caspase-8(0.63±0.08)及前体(0.85±0.12)、Caspase-9(0.87±0.09)、细胞色素C(0.91±0.10)、Nkx2.5(1.54±0.16)的表达与BMSC组[(0.36±0.08)、(1.13±0.04)、(0.36±0.06)、(1.12±0.13)、(1.23±0.08)、(0.60±0.05)、(0.67±0.14)]、BMSC+OGD/R组[(1.05±0.10)、(0.62±0.04)、(1.07±0.09)、(0.57±0.07)、(0.55±0.08)、(1.25±0.09)、(0.71±0.04)]、BMSC^(空载体)+OGD/R组[(1.16±0.16)、(0.64±0.06)、(1.19±0.16)、(0.56±0.06)、(0.50±0.06)、(1.28±0.06)、(0.73±0.04)]表达比较,差异有统计学意义(均P<0.05)。体内实验发现经BMSC^(Nkx2.5)组处理的小鼠心肌梗死后心脏射血分数(29.05±7.07)%较心肌梗死后BMSC组(16.57±2.09)%、心肌梗死后BMSC^(空载体)组(18.08±3.27)%改善明显(均P<0.05)。结论BMSC^(Nkx2.5)可能通过抑制死亡受体通路及线粒体信号通路增强BMSC抗凋亡能力,改善心肌梗死后心功能。

过表达Nkx2.5对骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化的影响

目的探讨过表达心脏特异性同源盒转录因子(Nkx2.5)对骨髓间充质干细胞(BMSC)向心肌细胞分化的影响。方法将慢病毒过表达Nkx2.5基因质粒和空载体转染到BMSC后,过表达Nkx2.5的BMSC 1×10^(7)个(过表达组)、空载体BMSC 2×10^(7)个(空载体组)、BMSC 1×10^(7)个(BMSC组)分别与小鼠心肌细胞1×10^(7)个共培养24h;BMSC 2×10^(7)个作为对照组。45只小鼠随机均分为五组:假手术组仅做心脏暴露,不做其他处理;其他小鼠建立小鼠心肌梗死(心梗)模型,在模型缝合完毕24h后经尾静脉移植不含细胞的PBS(心梗模型未处理组)、BMSC(心梗模型BMSC组)、空载体BMSC(心梗模型空载体组)和过表达Nkx2.5的BMSC(心梗模型过表达组)各200μL。采用Western blot法检测肌间线蛋白(desmin)、α肌动蛋白(α-actin)、肌钙蛋白T(cTnT)和缝隙连接蛋白43(Cx43)蛋白表达,2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色观察小鼠梗死面积变化,免疫组织化学染色检测梗死组织desmin、α-actin、cTnT和Cx43表达。结果与对照组比较,BMSC组、空载体组、过表达组desmin、α-actin、cTnT、Cx43蛋白表达增加(P<0.05);与BMSC组和空载体组比较,过表达组desmin、α-actin、Cx43蛋白表达增加(P<0.05)。心梗模型过表达组梗死面积小于心梗模型未处理组、心梗模型BMSC组和心梗模型空载体组(P<0.05)。心梗模型过表达组desmin、α-actin、cTnT和Cx43表达高于心梗模型未处理组、心梗模型BMSC组和心梗模型空载体组。结论过表达Nkx2.5可以促进BMSC向心肌细胞分化。