云南省非O1/O139群霍乱弧菌分子特征分析

目的非O1/O139群霍乱弧菌能够引起人类急性腹泻性疾病,但与O1群和O139群相比,人们往往容易忽视其危害性。因此,我们对分离于云南省的31株非O1/O139群霍乱弧菌开展了分子特征分析。方法采用纸片法(K-B)开展抗生素敏感试验;多聚酶链反应(PCR)扩增检测毒力基因;同时,我们对菌株进行了脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分析(MLST)分子分型研究。结果药敏实验结果显示,67.74%的菌株对利福平耐药,对萘啶酸和复方新诺明的耐药率为29.03%,所有的菌株对庆大霉素和环丙沙星敏感;PCR结果显示,所有菌株的ompW基因为阳性,87.10%的菌株hly基因为阳性,25.81%的菌株rstREl tor为阳性,16.13%的菌株rstRClassical和tcpAEl tor为阳性,而CT、rfbO1和rfbO139基因全为阴性;PFGE结果显示,31株非O1/O139群霍乱弧菌呈现出高度的离散趋势,几乎没有相同带型的菌株出现;在MLST结果分析中,发现了1个gyrB新的等位基因,mdh基因发现了4个新的等位基因,metE基因发现了6个新的等位基因,pntA中发现了2个新的等位基因,purM中发现了3个新等位基因,pyrC中发现了4个新等位基因。经过排列组合后,共发现了17个新的霍乱弧菌ST型别(ST273-ST289)。结论非O1/O139群霍乱弧菌呈现出高度的多样性特征,同时,云南省的非O1/O139群霍乱弧菌具有一定的地域特点,丰富了现有的霍乱弧菌分子分型数据库。

云南宣威肺腺癌原代细胞和肺腺癌细胞株XWLC-05体外形态学比较

目的比较宣威肺腺癌原代细胞和已建立的宣威肺腺癌细胞株XWLC-05的形态学变化.方法用含10%胎牛血清的RPMI Medium1640培养基培养宣威肺腺癌细胞和XWLC-05,观察两者的形态学变化,比较不同时间点肺癌细胞数量变化,探讨其生长特性.结果培养的肺癌原代细胞为贴壁成团片状生长,为多边形或类圆形,异型性明显;而XWLC-05细胞成翼状,多边形,增殖速度比本实验室培养肺癌原代细胞快.结论肺癌原代细胞形态学上不同于XWLC-05,有其自身生长特性.

PI3K／AKT／p-AKT在宫颈癌组织中的表达及其与Ki67关系的研究

目的:通过检测PI3K、AKT、P-AKT和Ki67在宫颈癌中的表达,探讨其与宫颈病变发生发展的关系及相关的临床意义。方法:应用免疫组织化学SP法检测宫颈癌组织及其正常组织中PI3K、AKT、p-AKT和Ki67的表达。结果:(1)宫颈癌中PI3K、AKT、p-AKT和Ki67蛋白的阳性表达率较宫颈上皮内瘤样病变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)各级的高,差异有统计学意义(P<0.05),鳞癌与腺癌无差别;CIN各级中PI3K、AKT和p-AKT的阳性表达率较正常宫颈组织高,差异有统计学意义(P<0.05),且这种差异随着CIN级别的递增而增大。(2)CIN各级宫颈组织中PI3K、AKT、p-AKT表达与Ki67表达有关。(3)PI3K和p-AKT表达与宫颈癌分化程度及临床分期明显相关,但与年龄、组织学类型和淋巴结转移无关。Ki67表达与各临床病理指标无明显相关性。结论:PI3K、AKT、P-AKT和Ki67的异常表达参与了宫颈癌的发生发展,与细胞增殖能力加强有关。

吸入沙美特罗与氟替卡松复合制剂治疗慢性阻塞性肺疾病疗效观察

目的探讨联合吸入沙美特罗与氟替卡松治疗慢性阻塞性肺疾病（COPD）在控制症状、改善肺功能、改善健康状况等方面的作用及安全性。方法450例COPD患者采用完全随机设计方法分为3组：沙美特罗与氟替卡松组150例，在常规治疗基础上给予沙美特罗与氟替卡松复合制剂，50μg／250ixg，2次／d；氟替卡松组150例，在常规治疗基础上给予氟替卡松，250μg／次，2次／d；对照组150例，只给予常规治疗。测量用力肺活量、第一秒用力呼气容积（FEV1）等肺功能参数，观察症状控制情况、急性发作次数以及患者健康状况的改变情况。结果试验周期为12个月，沙美特罗与氟替卡松组和氟替卡松组FEV1均显著高于对照组[（1173±10）ml和（1110±11）m1对比（1084±10）ml，P〈0．05]；沙美特罗与氟替卡松组在症状的控制、健康状况的改善方面亦明显好于对照组。各组发生药物不良反应情况无统计学意义。结论吸入沙美特罗与氟替卡松复合制剂治疗COPD可以良好控制临床症状、改善肺功能状况，药物不良反应发生率低。

孟鲁司特联合氟替卡松治疗支气管哮喘临床研究

目的观察口服孟鲁司特联合吸入氟替卡松治疗支气管哮喘的疗效及安全性。方法156例支气管哮喘患者完全随机分为试验组79例和对照组77例。试验组口服孟鲁司特10mg，1次／d，吸入氟替卡松250μg，2次／d；对照组吸入沙美特罗／氟替卡松50μg／250μg，2次／d。观察患者哮喘急性发作频率、每周夜间憋醒次数、用力肺活量（FVC）、第一秒用力呼气容积（FEV1）、自测呼气峰值流速（PEF）以及药物不良反应。结果试验期间试验组16例（20．3％）至少出现一次急性发作，与对照组15例（19．5％）相比，差异无统计学意义（P〉0．05）；对夜间症状的控制方面及肺功能的改善上，2组均取得良好效果（P〈0．05），而2组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论口服孟鲁司特联合吸入氟替卡松治疗支气管哮喘的效果接近联合吸入沙美特罗／氟替卡松的经典方案，且安全性好，为支气管哮喘患者提供了更多的治疗选择。

丙烯醛吸入致大鼠肺损伤后的蛋白组表达变化

目的用蛋白组学方法探讨丙烯醛吸入致大鼠肺损伤后的蛋白组表达变化。方法运用质谱分析技术比较差异蛋白的肽指纹图和氨基酸序列并确定差异蛋白名称,为今后研究与肺损伤有关的功能蛋白提供实验依据。结果在丙烯醛吸入组与生理盐水对照组凝胶图谱中平均检测到545个蛋白点。丙烯醛吸入组与生理盐水对照组比较,检测到7个差异蛋白。其中3个上调蛋白为:酪氨酸3和色氨酸5单加氧酶激活蛋白、磷脂酰肌醇转移蛋白和多聚腺苷结合蛋白。4个明显下调蛋白为:2601和2603波形蛋白、S100钙结合蛋白和细胞内钠通道-3。结论本实验鉴定了丙烯醛吸入所致的大鼠肺损伤后与肺组织变化相关的7个蛋白分子,这些分子可能是与肺损伤有关的重要功能蛋白。

吸入噻托溴铵及福莫特罗治疗COPD自身交叉对照研究

目的观察吸入噻托溴铵、福莫特罗以及两者联合吸入治疗慢性阻塞性肺疾病的效果及安全性。方法采用交叉设计、自身对照,76例COPD患者按顺序进入三个分别为期6周的试验期,一期:每日9am吸入噻托溴铵18μg;二期:每日9am、9pm各吸入一次福莫特罗9μg;三期:每日9am吸入噻托溴铵18μg,并且吸入福莫特罗9μg。观察治疗前后的肺功能变化,急性缓解药的使用情况、急性发作次数以及健康状况的改变情况。结果使用噻托溴铵对日间FEV1的改善明显好于福莫特罗(P<0.01),而夜间两者近似。而联合用药治疗后FEV1提高在日间和夜间均显著高于单药治疗组(P<0.001),FVC的变化与FEV1近似。联合组治疗减轻日常症状效果好于单药组。各组副作用发生情况近似。结论吸入噻托溴铵控制日间症状明显强于福莫特罗,夜间控制能力与福莫特罗相当。而两者联合使用,疗效好于单药治疗。

COPD急性加重期的炎性指标临床研究

目的研究慢性阻塞性肺疾病急性发作期患者血清C反应蛋白(CRP)、趋化因子配体18(CCL18)含量变化及临床意义。方法检测30例COPD急性加重期、第7天和缓解期及30例体检者血清CRP、CCL18浓度,同时测定1 s用力呼气容积占预计值百分数(FEV1%pred)和动脉血氧分压(PaO2)。结果COPD急性加重期患者及缓解期血清CRP和CCL18水平较对照组均明显升高,有显著差异性(P<0.05);而治疗组缓解期血清CRP和CCL18水平均较急性发作期明显降低,具有统计学意义(P<0.01)。COPD患者CRP和CCL18水平与FEV1%pred、PaO2均呈直线负相关关系(P<0.05)。结论检测血清CRP和CCL18对COPD发生发展及疾病严重程度的判断,指导抗生素的使用有一定意义。

红嘴鸥中分离的非伤寒沙门菌分子特征分析

目的非伤寒沙门菌是一类肠道病原体,能引起人的腹泻性疾病。特从每年飞抵云南省昆明市的红嘴鸥中分离的非伤寒沙门菌,作分子分型研究,以反映红嘴鸥对于人群健康的潜在影响。方法从2013年11月-2014年1月间,分3次分别采集500份红嘴鸥粪便样本,进行沙门菌的分离培养。得到菌株之后开展药敏试验和脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析。结果500份粪便样品分离到78株非伤寒沙门菌,其中鼠伤寒沙门菌75株(96.15%),韦尔克斯沙门菌1株,印第安纳沙门菌2株。药敏试验显示,所有非伤寒沙门菌对于利福平的耐药率高达97.44%,其次为萘啶酸(28.21%)和复方新诺明(25.64%);而对庆大霉素和环丙沙星则完全敏感。PFGE结果显示,75株鼠伤寒沙门菌形成了3个带型,并且带型之间的同源性关系均大于95%,66株表现为完全一致的带型特征。与分离自病人的鼠伤寒沙门菌比较后发现,红嘴鸥中分离的鼠伤寒沙门菌与病人分离的菌株的PFGE带型被区分成了两个聚类群。结论红嘴鸥有很高的非伤寒沙门菌携带率,以鼠伤寒沙门菌为主;PFGE结果表明,红嘴鸥携带的非伤寒沙门菌可能与其生活环境和食物构成等因素密切相关,但尚未发现这些菌株与人群患病的相关性。

吸入布地奈德/福莫特罗治疗COPD疗效及安全性评价

目的探讨吸入布地奈德/福莫特罗治疗COPD在控制症状、改善肺功能、减少急性发作方面的作用及安全性。方法144例COPD患者被随机分配到对照组和试验组。其中:布地奈德/福莫特罗组(n=36),160μg/45μg,2次/d;布地奈德对照组(n=33),200μg,2次/d;福莫特罗组(n=35),4.5μg,2次/d;以及空白对照组(n=40),不使用上述药物。测量FEV1等肺功能参数,观察急性发作次数以及病人健康状况的改变情况。结果试验周期为12个月,布地奈德/福莫特罗组的人均年急性发作率较空白组及福莫特罗组明显降低(P<0.05),试验后,三个治疗组的FEV1均较空白对照组明显提高,而布地奈德/福莫特罗组FEV1较布地奈德组亦有明显提高(P<0.01)。各组发生不良反应情况相似。结论吸入布地奈德/福莫特罗治疗COPD可以良好控制临床症状、改善肺功能及健康状况,并且其发生不良反应的危险性小。

ω-3鱼油脂肪乳对严重脓毒症的抑制作用观察

目的观察ω-3鱼油脂肪乳在严重脓毒症的治疗中,促进器官功能改善、辅助控制炎症、以及对严重脓毒症平均住院日及总体预后的影响。方法148例严重脓毒症的患者,分为试验组和对照组,对照组给予常规治疗,试验组则给予ω-3鱼油脂肪乳治疗,其他治疗措施相同。观察指标为:临床症状、APACHEⅡ评分、血浆CRP水平、血清白蛋白、血清甘油三脂、平均住院日、死亡率。结果ω-3鱼油脂肪乳治疗组在72h后APACHEⅡ评分明显低于对照组,CRP测定在第4天后明显低于对照组,而血清白蛋白在第7天测定明显高于对照组,平均住院日在试验组明显短于对照组;试验组死亡率低于对照组。结论ω-3鱼油脂肪乳应用于严重脓毒症可以促进机体功能的恢复,缩短平均住院日,降低死亡率;而未见明显副反应。

NSCLC中低氧诱导因子-1α对血管生成素-2表达的影响

目的探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible fac-tor-1α,HIF-1α)对血管生成素-2(angiopoietin-2)表达的影响及意义。方法免疫组化SP法检测46例NSCLC组织HIF-1α、血管生成素-2蛋白的表达;培养人肺腺癌细胞株A549细胞,CoCl2模拟缺氧处理6h、12h、24h,以及缺氧条件下不同浓度genistein处理细胞12h后,采用Western Blot和RT-PCR方法分别检测A549细胞HIF-1α蛋白和血管生成素-2 mRNA的表达情况。结果46例NSCLC中HIF-1α、血管生成素-2的阳性表达率分别为73.9%(34/46)、63.0%(29/46),明显高于癌旁肺组织(P<0.05);HIF-1α的表达与血管生成素-2的表达呈正相关。急性缺氧可以诱导A549细胞HIF-1α蛋白和血管生成素-2 mRNA表达增加,分别在6h,12h达到高峰,随着缺氧时间延长,HIF-1α蛋白和血管生成素-2 mRNA表达相对减少;genistein抑制HIF-1α蛋白后,血管生成素-2 mRNA的表达也相应减少,呈浓度依赖。结论缺氧时NSCLC中HIF-1α可参与血管生成素-2的调控,HIF-1α、血管生成素-2表达增加与肿瘤新生血管形成有关,二者共同促进NSCLC的发生发展过程。

乌司他丁在重症肺炎治疗中的应用

目的观察乌司他丁注射液在重症肺炎的治疗中,协同常规治疗,对疾病进程的影响。方法79例重症肺炎的患者,分为治疗组和对照组,对照组给予常规治疗,治疗组则在对照组基础上加用乌司他丁注射液,20万IU静脉推注,2次/d,疗程5d,观察死亡率、平均住院日、体温、动脉血气分析、白细胞计数的变化等。结果乌司他丁治疗组体温恢复正常的时间、白细胞计数恢复正常时间明显短于对照组(P<0.05),而X线胸片病灶吸收情况,死亡率、平均住院日在两组无差别。结论乌司他丁具有良好的协同抗感染、抗炎性反应作用,较少的不良反应发生率,其在重症肺炎的治疗中有良好的安全性。

OSAHS患者气道内正压通气治疗后血管内皮功能的变化

目的:探讨阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSAHS)患者气道内正压通气治疗后血管内皮功能的变化。方法:根据多导睡眠呼吸监测仪监测结果。选择年龄、性别、体重指数(BMI)无明显差异的OSAHS患者45例和健康者40例,采用超声检测血管内皮功能进行比较,给予OSAHS组气道内正压通气(CPAP)治疗三个月后再次复查血管内皮功能,并与治疗前进行比较,以观察血管内皮功能的变化。结果:OSAHS组患者血流介导的血管舒张(FMV)较健康对照组明显降低(P<0.05),给予CPAP治疗三个月后,OSAHS组FMV较治疗前明显升高(P<0.05)。结论:OSAHS组患者存在血管内皮功能障碍(ECD),CPAP治疗可改善OSAHS患者的血管内皮功能。

孟鲁斯特对哮喘患者诱导痰中炎症细胞及细胞因子的影响

目的观察孟鲁斯特对哮喘患者诱导痰中炎症细胞及细胞因子的影响。方法73例哮喘患者被随机分配到对照组和试验组,其中:对照组(n=37),使用吸入糖皮质激素、长效β2受体激动剂等常规治疗。试验组(n=36),常规治疗加每日口服孟鲁斯特10mg;观察治疗前后,患者诱导痰中的细胞分类情况,以及IL-2,TNF-α的变化情况。结果治疗后试验组和对照组诱导痰中的细胞总数及中性、嗜酸性粒细胞分类比例、IL-2及TNF-α浓度均较治疗前明显降低(P<0.05),其中试验组嗜酸性粒细胞分类比例、IL-2、TNF-α浓度的降低较对照组更加显著(P<0.05)。结论口服孟鲁斯特可降低哮喘患者诱导痰中的嗜酸性粒细胞分类比例、IL-2、TNF-α浓度。

髓鞘碱性蛋白在肺腺癌A549细胞表达及其功能意义

目的研究髓鞘碱性蛋白(MBP)在肺腺癌A549细胞中的表达及意义.方法用含10%胎牛血清的RPMI Medium1640培养基培养肺腺癌A549细胞,免疫组化SP法检测MBP在肺腺癌A549细胞的表达情况,探讨其功能意义.结果 MBP在A549细胞中的表达,以新生细胞为主,胞浆染色,阳性率约为21.1%.结论 MBP部分在肺腺癌A549细胞表达,这些新生细胞表达MBP形态可能与肺癌细胞的增殖能力或肺癌的嗜神经特性有关.

依那普利对慢性阻塞性肺疾病患者缓解期Ang-Ⅱ表达水平和粘液高分泌的影响

目的研究依那普利对COPD患者血清中血管紧张素Ⅱ(Angiotensin-ⅡAng-Ⅱ)表达水平及黏液高分泌的影响,初步探讨依那普利在COPD黏液高分泌中的治疗作用及机制.方法以合并原发性高血压(2级及2级以下)的COPD缓解期住院患者为研究对象,入选病例单盲随机分为常规治疗组(常规使用舒利迭、异丙托溴胺、氨茶碱、氨氯地平);依那普利治疗组(常规治疗的基础上加用依那普利10 mgqd).分别于患者出院前1 d,出院后第3周、第6周分别采取每名患者的静脉血,采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定Ang-Ⅱ蛋白含量,同时计量患者痰量.结果依那普利治疗组与常规治疗组相比第3、6周血液中的Ang-Ⅱ明显降低(P<0.05),且依那普利治疗组痰量较常规治疗组减少(P<0.05).结论依那普利治疗能有效减少患者气道粘液高分泌,其作用机制可能与Ang-Ⅱ的下调有关.

脱氧核苷酸钠辅助治疗老年重度慢性阻塞性肺疾病急性发作临床观察

目的:评价脱氧核苷酸钠辅助治疗老年重度慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性发作,改善患者的肺功能的作用,并探讨其可能机制。方法:采用多中心、随机对照试验方法,86例COPD患者随机分为2组各43例,两组患者稳定期均给予相应的吸氧、营养支持,急性期则给予相应的支气管舒张刑、镇咳、祛痰、抗感染治疗。试验组患者在此基础上给予脱氧核苷酸注射液,急性期200 mg·d^(-1),qd,连续应用7~14 d,稳定期给予300 mg/月。随访1年后,比较两组患者的发作次数、抗菌药应用时间,以及免疫相关指标,评价远期肺功能获益情况。结果:试验组患者年平均急性发作次数、抗菌药应用时间、住院时间等均少于对照组(P<0.05或0.01);试验组FEV_1/FVC、FEV1%、6 min步行距离、圣乔治呼吸问卷评分等指标均优于对照组,体质量明显高于对照组(P<0.05或0.01);试验组CD4^+、IgA抗体、α1-抗胰蛋白酶等均明显高于对照组(P<0.05或0.01)。结论:脱氧核苷酸能提高患者免疫功能,减少重度COPD感染次数;增加α1-抗胰蛋白酶的合成,促进损伤肺脏的修复。

哮喘与年龄

哮喘是一种异质性疾病,通常以慢性气道炎症为特征。起病时间不同的哮喘以及不同年龄阶段的哮喘,并无本质的区别,但其病因、发病机制、流行病学、临床表现、治疗、预后等方面存在不同之处。有学者认为,较之过敏因素,哮喘发病年龄是一个更好的哮喘表型分类标准。哮喘与年龄关系密切,值得深究,本文就此作一综述。