目的观察ROCK抑制剂Y-27632对体外缺血清培养的小鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响。方法原代分离培养小鼠骨髓单个核细胞,应用流式细胞术对细胞CD29、CD44、CD90、CD34表面标志进行检测。成骨、成脂肪、成软骨分化后分别进行茜素红、油红...目的观察ROCK抑制剂Y-27632对体外缺血清培养的小鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响。方法原代分离培养小鼠骨髓单个核细胞,应用流式细胞术对细胞CD29、CD44、CD90、CD34表面标志进行检测。成骨、成脂肪、成软骨分化后分别进行茜素红、油红O及甲苯胺蓝染色。将第3代细胞随机分为3组:对照组、模型组(无血清)、Y-27632组(无血清+10μmol/L Y-27632),分别于培养后24、48、72 h收集细胞进行流式细胞仪TUNEL法观察各组细胞凋亡率,培养后24 h Western blot法检测ROCK1及cleaved caspase 3表达。结果分离的骨髓单个核细胞CD29(+)、CD44(+)、CD90(+)、CD34(-),三系分化后茜素红染色(+),油红O染色(+),甲苯胺蓝染色(+)。Y-27632能明显降低由于缺血清培养导致的BMSCs的凋亡率(P<0.01),Y-27632能够明显降低ROCK及cleaved-caspase 3表达(P<0.01)。结论分离的骨髓单个核细胞就是骨髓间充质干细胞。Y-27632能够抑制由于缺血清培养导致的小鼠骨髓间充质干细胞的凋亡。展开更多
文摘目的观察ROCK抑制剂Y-27632对体外缺血清培养的小鼠骨髓间充质干细胞凋亡的影响。方法原代分离培养小鼠骨髓单个核细胞,应用流式细胞术对细胞CD29、CD44、CD90、CD34表面标志进行检测。成骨、成脂肪、成软骨分化后分别进行茜素红、油红O及甲苯胺蓝染色。将第3代细胞随机分为3组:对照组、模型组(无血清)、Y-27632组(无血清+10μmol/L Y-27632),分别于培养后24、48、72 h收集细胞进行流式细胞仪TUNEL法观察各组细胞凋亡率,培养后24 h Western blot法检测ROCK1及cleaved caspase 3表达。结果分离的骨髓单个核细胞CD29(+)、CD44(+)、CD90(+)、CD34(-),三系分化后茜素红染色(+),油红O染色(+),甲苯胺蓝染色(+)。Y-27632能明显降低由于缺血清培养导致的BMSCs的凋亡率(P<0.01),Y-27632能够明显降低ROCK及cleaved-caspase 3表达(P<0.01)。结论分离的骨髓单个核细胞就是骨髓间充质干细胞。Y-27632能够抑制由于缺血清培养导致的小鼠骨髓间充质干细胞的凋亡。
