经阴道超声评估子宫内膜容受性和预测妊娠结局的研究进展

妊娠成功的关键取决于胚胎质量、子宫内膜容受性(ER)和胚胎与子宫内膜相互作用的协调性。经阴道超声检查以无创性、可重复性、安全性、实时性而成为评估ER的首选方法。目前,二维经阴道超声(2D-TVS)检查监测子宫内膜厚度、内膜形态、内膜蠕动波、血流参数等指标用于评估ER。三维经阴道超声(3D-TVS)检查可通过立体成像功能,在彩色多普勒血管成像模式下,可将更微小的血流灌注情况反映出来,对ER的评估达到了一个新的高度。子宫内膜厚度是评价ER最经典、最广泛应用的指标。子宫内膜容积的检测也逐年增多,其阴性预测价值较大。近期研究认为评估子宫内膜血流灌注情况是真正有价值的预测指标,但超声血流参数指标预测妊娠结局的研究众多,尚未观察到较一致的预测价值最好的指标。目前尚未发现任何一个超声指标可以独立评估ER,每个指标分别反映子宫内膜的不同特征,建议同时用多个超声指标从多个角度综合评估,用超声多模态评估指标能获取更全面的ER信息,探讨评估各项指标权重并赋予分值,构建兼具可操作性和诊断价值的超声评估模型,尽早、准确地评估不孕女性的ER并实施合理干预,对提高妊娠成功率具有重要意义。

时差成像技术和人工智能在ART治疗中的应用

准确评估胚胎发育对于辅助生殖技术(ART)成功至关重要。传统方法多基于主观的胚胎形态学评估,缺乏客观性和实时性。时差成像技术(TLT)提供更稳定的培养环境,实现胚胎发育的动态监测,分析和建模不同发育时期的动态学参数,用于预测胚胎的植入潜力。然而,动态学参数通常需要人工标注,引入主观干扰,数据模型分析能力差异较大,与实际情况相差甚远,尤其在染色体整倍性分析方面表现较弱。随着人工智能(AI)的不断发展,TLT与AI的结合提供了减少TLT人工标注时间、提高胚胎植入率和染色体整倍性预测等方面的可能性。旨在探讨TLT结合AI在形态学和动态学参数方面对胚胎植入潜力和染色体整倍性的应用。

EOR在预测辅助生殖结局中的作用

目的在辅助生殖中评估hCG日雌二醇与获卵数的比值(estradiol oocyte ratio,EOR)在预测治疗结局中的可靠性。方法收集2010年1月至2014年12月在云南省第一人民医院生殖中心就诊的不孕症患者12564例,根据年龄分为3组:<35, 35~39,和≥40岁。在hCG日测量血清中雌二醇浓度,并在取卵日行超声引导取卵术,计算EOR,将样本分为12组。分析获卵数、卵母细胞MⅡ率、正常受精率、卵裂率、持续发育率、优胚率以及最终妊娠结局。统计EOR和其中各项参数之间的关系。结果 (1) hCG日E2水平随着年龄的增加呈下降趋势,而EOR呈上升趋势,随着EOR的上升妊娠率显著下降,差异有统计学意义(P <0.05);<35, 35~39,和≥40岁3组之间临床妊娠率(clinical pregnancy rate, CPR)差异无统计学意义(P>0.05),但年龄较大者,其妊娠率更低;(2)生化妊娠率与临床妊娠率最高的分组为500~550(pg/mL),分别为72.25%,64.32%;(3)获卵数、获卵率随着EOR的增加显著降低,P <0.05,而MⅡ卵母细胞率最大的分组为≥650(pg/mL);(4)常规IVF与ICSI在正常受精率、卵裂率、持续发育率以及优质胚胎率并差异无统计学意义(P>0.05);(5)各组在囊胚形成数、囊胚形成率、优质囊胚数、优质囊胚率等方面均差异无统计学意义。结论 EOR在预测ART结局中有着重要的作用,而且在未来的临床应用中也会有更好的前景。

不同时期NICS检测在平衡易位患者PGT治疗中的临床应用

目的评估不同时期NICS检测在平衡易位患者PGT治疗中应用的可行性。方法分析检测结果(包括检测成功和检测失败)和CNVs结果(包括正常和和异常)2个变量;根据样本类别,分成D3培养液(D3NICS)、D5培养液(D5 NICS)和整胚及活检细胞(胚胎/TE)组,对各组之间的检测失败率和CNVs结果分布进行比较。结果D3 NICS检测失败率和CNVs结果分布同胚胎/TE组相比,差异有统计学意义(P<0.001/P<0.01);D5 NICS组的检测失败率结果和CNVs结果分布同胚胎/TE组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论相对于D3 NICS,D5 NICS在平衡易位患者胚胎的诊断应用上更有优势。作为一种无损检测手段,随着操作方法和测序技术的进步,有望替代传统活检技术用于平衡易位患者胚胎的临床诊断。

肠道菌群在非酒精性脂肪性肝病治疗中的应用进展

肠道菌群紊乱可促进非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的发生发展,调节肠道菌群可有效治疗NAFLD。肠道菌群在NAFLD的治疗中具有重要意义,目前的研究主要集中于肠道菌群在NAFLD中的作用机制。补充益生菌、益生元、合生元以及抗生素、粪菌移植、奥贝胆酸等综合治疗均可通过调节肠道菌群治疗NAFLD。肠道菌群失衡与NAFLD的发生密切相关,针对肠道菌群进行干预或可成为治疗NAFLD的重要手段之一。未来深入研究肠道菌群在NAFLD中的作用机制,可以为疾病的治疗提供新思路。

BMSCs-Exos对环磷酰胺诱导的大鼠精原细胞损伤的修复作用

目的:非阻塞性无精子症(NOA)是男性不孕症的严重问题,目前医学上缺乏有效的治疗方法。骨髓来源的间充质干细胞(BMSCs)具有多能分化能力和旁分泌效应,并参与组织修复和再生。本研究旨在探讨BMSCs外泌体(BMSCs-exos)对环磷酰胺诱导的精原细胞凋亡的抑制和改善细胞增殖的作用,为临床上应用间充质干细胞外泌体治疗细胞化疗损伤提供前期实验基础,并为后续进一步研究其机制奠定前期基础。方法:取大鼠股骨骨髓,使用流式细胞术培养,并使用成骨及成脂诱导培养鉴定BMSCs。然后使用超速离心法获取并收集BMSC细胞外泌体。通过透射电子显微镜、Western blotting和纳米流式检测蛋白标记分析鉴定BMSCs-exos。将大鼠处死后收集培养生精细胞,然后进行瑞氏–姬姆萨染色证实培养的细胞确为精原细胞,将精原细胞经过不同浓度的环磷酰胺(CTX)的处理,CCK8筛选出最佳CTX处理浓度12 uM,然后再将精原细胞进行分组处理:精原细胞组正常培养(Control对照组)、化疗损伤组(CTX组)和化疗损伤 + 外泌体干预组(CTX + BMSCs-exosomes组),之后对3组细胞进行增殖和凋亡检测。结果:对3组细胞进行的细胞凋亡率检测结果显示,细胞凋亡率:CTX组 > CTX + BMSCs-exosomes组 > Control对照组;细胞增殖能力:Control对照组 > CTX + BMSCs-exosomes组 > CTX组。结论:CTX化疗药物可以增加大鼠生精细胞的凋亡,BMSCs-exos可以抑制大鼠生精细胞的凋亡,增强细胞的增殖。该研究为临床上无精症的治疗提供一定的参考,也为临床上应用间充质干细胞外泌体治疗细胞化疗损伤提供前期实验基础,并为后续进一步研究其机制奠定前期基础。

温度对人类MⅡ期卵细胞组蛋白H3K9和H4K12乙酰化状态的影响

目的探讨温度对人类MⅡ期卵细胞组蛋白H3K9和H4K12乙酰化状态的影响。方法收集接受卵胞浆内单精子显微注射治疗后患者废弃的第一次减数分裂中期(MⅠ期)卵细胞体外成熟培养成的第二次减数分裂中期(MⅡ期)卵细胞,在室温下(25℃)孵育0 min、3 min、5 min和15 min后,转移至37℃复温1 h。采用间接免疫荧光染色法对MⅡ期卵细胞组蛋白H3K9和H4K12的乙酰化状态进行检测。结果与室温孵育0 min相比,孵育3 min、5 min和15 min后,检测到组蛋白H4K12的乙酰化信号的MⅡ期卵细胞比率显著增加(P<0.05)。MⅡ期卵细胞组蛋白H3K9的乙酰化信号,在室温孵育0 min,3 min、5 min和15 min后,均检测不到(P>0.05)。结论温度对MⅡ期卵细胞组蛋白H3K9的乙酰化状态无显著影响,但与组蛋白H4K12乙酰化状态密切相关。

囊胚质量对冻融胚胎移植临床结局的影响及囊胚移植选择策略

目的探讨冻融囊胚移植中囊胚质量对临床结局的影响,以及最优的囊胚移植选择策略。方法本研究共包括2 054个囊胚冻融移植周期,将行囊胚冻融移植的患者根据移植囊胚的数量和质量进行分组,不同组之间年龄差异使用独立样本t检验分析;其余临床指标(不孕原因、促排方案、授精方案、临床妊娠率、种植率、活产率、多胎率)使用Χ~2检验分析。结果相对于卵裂期胚胎移植,移植单个优质囊胚可以显著提高临床妊娠率(42.31%/28.89%)、种植率(42.31%/17.93%)和活产率(29.96%/21.17%),同时显著降低多胎率(1.85%/24.68%)。相对于不分质量的双囊胚移植,移植单个优质囊胚移植可以显著改善种植率(42.31%/37.95%),并极大地降低多胎率(1.85%/39.79%)。随着移植胚胎中低质量囊胚数目的增加,其妊娠率(60.63%～35.79%)、种植率(44.01%～22.37%)、活产率(44.01%～26.84%)逐渐下降。结论低质量囊胚对冻融胚胎移植的临床结局有负面影响,移植单个优质囊胚可以获得较理想的临床结局。

宫腔灌注粒细胞集落刺激因子在薄型子宫内膜患者中的应用研究

目的分析宫腔灌注粒细胞集落刺激因子治疗薄型子宫内膜的临床疗效。方法本次所选观察对象为2016年5月～2017年10月间本院治疗的薄型子宫内膜患者,随机择取45例常规自然周期监测的对照组和45例宫腔灌注粒细胞集落刺激因子治疗的观察组两组作为本次临床研究的观察对象,对比两组患者治疗前后的子宫内膜厚度,分析观察组患者的临床总有效率。结果治疗前,观察组和对照组两组患者在子宫内膜厚度方面不存在明显的区别,P>0.05,组间经治疗后对比可见观察组子宫内膜厚度情况要显著优于对照组,P<0.05,;经过宫腔灌注粒细胞击落刺激因子治疗后,取得了68.8%的临床治疗总有效率。结论采用宫腔灌注粒细胞集落刺激因子进行薄型子宫内膜的治疗,能够显著增厚患者的子宫内膜厚度,有效改善和提高患者的临床治疗总有效率,值得在临床当中进行推广使用。

乙型肝炎病毒在人类早期胚胎中的垂直传播

目的检测合并乙型肝炎病毒(HBV)感染的不孕不育症患者行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)及衍生技术助孕后子代早期胚胎中HBV表达情况,为HBV经人类生殖细胞垂直传播子代提供可靠证据.方法收集在云南省第一人民医院生殖医学科行IVF-ET助孕的61对HBV感染不孕症夫妇患者废弃的早期胚胎,通过单细胞扩增技术获得全基因组DNA,采用聚合酶链式反应(PCR)技术检测HBV-DNA及HBV共价闭合环状DNA(HBV-ccc DNA)在早期胚胎中的表达情况.结果无论母方或父方或夫妻双方HBV感染患者的子代早期胚胎中均可检测到HBV-DNA和HBV-ccc DNA表达阳性,且HBV-DNA在母方、父方和夫妻双方HBV感染患者的子代早期胚胎中的阳性检出率分别为78.9%、76.3%和100%,而HBV-ccc DNA阳性检出率分别为63.2%、78.9%和100%,其中HBV-DNA和HBV-ccc DNA阳性检出率在母方和父方合并HBV感染2组间均差异无统计学意义(P>0.05),但夫妻双方均合并HBV感染则阳性检出率显著增高(P<0.05).结论对于行IVF-ET助孕的HBV感染患者,HBV可通过母源性和父源性垂直传播至子代早期胚胎,且夫妻双方同时合并HBV感染的垂直传播风险显著增加,为HBV经人类生殖细胞垂直传播子代提供了可靠证据.

印记基因H19在不同质量精子和胚胎中的甲基化状态

目的对印记基因H19在三种不同质量的精子中的甲基化状态以及精卵结合后形成胚胎的甲基化状态进行比较,初步探索精子甲基化状态与受精后胚胎甲基化状态的关系.方法收集在云南省第一人民医院生殖医学科行IVF-ET治疗中废弃的精子91份和D3期低质量胚胎171份,依据WHO第5版根据精子参数将精子样本分为3组,分别分析3组的精子及受精后胚胎H19的甲基化状态.结果 B组在精子中和胚胎中H19甲基化状态异常比例显著高于另外2组(P<0.05).结论印记基因H19甲基化状态异常主要集中在异常参数精子组中,提示其异常状态与精子质量降低有关;通过IVF、ICSI受精后的胚胎都出现同等比例的异常状态,没有显著差异;异常精子的胚胎未出现异常,这可能与胚胎自身的自我修复功能有关;而个别正常精子受精后的胚胎出现甲基化印记异常的原因可能与体外培养条件有关,也有可能与卵子质量本身有关.

GW7647对大鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的治疗作用

目的通过建立大鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型,研究过氧化物酶体激活剂受体(PPARα)激动剂GW7647对大鼠NAFLD的治疗作用。方法采用灌胃给药的方式,给予大鼠GW7647药物干预,每日1次,连续6周。灌胃结束后,采集大鼠血样进行胰岛素抵抗、血脂水平及肝损伤相关生化指标检测,并对大鼠肝组织进行相关的病理学检测(HE和油红O染色)。结果6周的药物治疗后发现,GW7647治疗能显著减轻NAFLD大鼠体重,使糖耐受得到改善、恢复对胰岛素敏感;肝脏染色显示肝病理改善和脂滴积累减少;血清胆固醇、甘油三酯含量降低;血清AST和ALT结果显示改善了肝损伤。结论PPARα激动剂GW7647通过减轻体重、减少肝脏脂肪积累、恢复大鼠胰岛素敏感性以及改善大鼠肝损伤和降低血脂水平等指标起到对NAFLD大鼠的治疗作用。

Kallistatin基因在大鼠阴茎海绵体中的表达研究

目的:探讨人组织激肽释放酶结合蛋白(kallistatin)在阴茎海绵体中的表达情况,为勃起功能调控和ED治疗寻找新的分子靶点。方法:采用qRT-PCR、Western印迹和免疫荧光技术检测kallistatin在大鼠阴茎海绵体组织的表达情况,同时检测主动脉中的表达水平进行对照。结果:qRT-PCR和Western印迹检测结果显示,Kallistatin mRNA和蛋白在大鼠阴茎海绵体组织中均有表达,且其表达水平与主动脉相比均无统计学差异(P>0.05);免疫荧光检测显示,Kallistatin表达于阴茎海绵体内皮细胞和平滑肌细胞,且定位于细胞胞质,与主动脉相比,两者间表达亦无明显差异(P>0.05)。结论:Kallistatin基因高表达于阴茎海绵体且定位于海绵体内皮细胞和平滑肌细胞内,提示kallistatin可能在海绵体内皮细胞和平滑肌细胞的细胞功能中发挥作用,从而参与阴茎勃起功能调控。

轮状病毒在大理地区腹泻儿童中的感染率及流行情况

目的了解轮状病毒(rotavirus, RV)在大理地区腹泻儿童中的感染率及流行情况,为流行病学研究提供基础数据支持。方法收集2013年5月至2016年5月大理大学第一附属医院门诊和住院的腹泻患儿粪便样本,采用免疫层析双抗体夹心法检测粪便中的RV抗原。对不同性别,不同年龄的患儿RV感染率进行比较,同时对不同时期,不同季节的RV流行情况进行分析。结果 1 898例腹泻患儿粪便标本中,RV阳性数为480例,阳性率为25.29%,其中男性阳性率为24.83%,女性阳性率为25.69%,男女性别差异无统计学意义(P>0.05)。RV整年均可检测到,以季节来看,夏秋季维持较低水平为10.87%。秋末后RV感染率开始增加,初冬时开始急剧增多至较高水平并持续到次年春季,随后开始缓慢下降,冬春季感染率为33.53%。以月份来看,12月感染率最高为50.93%,8月感染率最低为9.78%。12月、1月及2月3个月平均阳性率为45.72%。明显高于其它月份组平均阳性率12.00%(P <0.01)。易感年龄为1～2岁组,阳性率为31.73%,占64.79%,明显高于0～6月组(P <0.05),6月～1岁组(P <0.01)和3～4岁组(P <0.01)。结论大理地区RV感染整年均可检测到,发病率无性别差异,1～2岁是高发年龄,季节以冬末初春为流行高峰,流行月份为12月、1月、2月。

盐酸贝那普利对TGF-β1诱导的子宫内膜上皮及间质细胞纤维化的保护作用研究

目的探索盐酸贝那普利对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人子宫内膜上皮及间质细胞纤维化的保护作用及其可能机制。方法将人子宫内膜上皮细胞(AN3CA)及人子宫内膜间质细胞(hESC)用TGF-β1诱导纤维化。分为对照组、实验组(TGF-β15 ng/ml处理)、BNPL5组(TGF-β15 ng/ml+盐酸贝那普利5μmol/L处理)和BNPL8组(TGF-β15 ng/ml+盐酸贝那普利8μmol/L处理),AN3CA细胞共培养48 h,hESC细胞共培养72 h,镜下观察细胞形态,CellTiter-Glo检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测相应纤维化蛋白。结果盐酸贝那普利可部分逆转TGF-β1对AN3CA细胞的形态学改变,hESC细胞经过TGF-β1处理后形态无明显变化;促进TGF-β1诱导后的AN3CA细胞的增殖活力,降低AN3CA细胞凋亡水平(实验组:12.11±0.465,BNPL8组:7.68±0.818,P<0.001);抑制TGF-β1诱导后的hESC细胞的增殖活力,促进其细胞凋亡(实验组:7.553±0.688,BNPL8组:11.047±0.118,P=0.016);盐酸贝那普利诱导后AN3CA及hESC细胞相关纤维化因子Fibronectin、TGF-β1、smad3的表达均有下降。结论盐酸贝那普利可以改善TGF-β1诱导的子宫内膜上皮及间质细胞的纤维化改变。

FOXP1在卵巢癌中的作用及其机制

卵巢癌缺少早期诊断方法,而晚期患者通过肿瘤细胞减灭术和基础化疗等传统治疗方案后易复发,因此从卵巢癌发生发展的分子机制探索新的分子标志物和治疗靶点意义重大。Forkhead Box P1 (FOXP1)作为转录因子密切参与卵巢癌的发生发展进程,近些年的研究表明,高表达的FOXP1通过促进上皮–间充质转化、调节肿瘤干细胞特性、调控多种分子信号转导通路等机制影响卵巢癌细胞增殖、转移、侵袭和化疗抗性。本文通过简要论述转录因子FOXP1在卵巢癌中的作用及其机制研究的最新进展,旨在为卵巢癌早期诊断和临床治疗寻找新的分子靶标。

卵胞浆内单精子显微注射技术对子代表观遗传学的影响

目前,辅助生殖技术(ART)是能够使不育不孕患者可以生育的唯一方法。其中,卵胞浆内单精子显微注射技术(ICSI)已成为ART中治疗男性不育的理想方法之一。虽然ICSI在临床上成功率较高,但ICSI子代的出生缺陷风险明显增加。ICSI出生子代表观遗传学异常,其中子代印迹基因GTL2、h19、胰岛素样生长因子Ⅱ、印迹控制区1甲基化异常、出现低体重及部分出现先天畸形都可能与ICSI有关,导致ICSI的出生子代携带缺陷基因或者患有疾病。另外,有表观遗传缺陷的父母进行ICSI也会导致子代表观遗传学发生改变。

Klinefelter综合征研究进展

Klinefelter综合征是最常见的染色体异常疾病,常导致男性不育。近年随着研究的深入,对Klinefelter综合征患儿的治疗,对Klinefelter综合征患者的临床表现,以及对生育问题和产前产后筛查等都有了更多的认识。本文将从Klinefelter综合征的流行病学、临床表现、病理生理机制、实验室检查、药物治疗及辅助生殖的应用、筛查等方面进行综述,以期为临床提供一定的参考。

孕激素抵抗在不孕症发生发展中作用的研究进展

子宫内膜容受性对成功受孕至关重要,而孕激素抵抗可降低子宫内膜容受性,影响胚胎种植,引起不孕、胚胎反复种植失败、自然流产等不良生殖结局,其已成为部分育龄期女性孕激素治疗失败导致不孕的主要原因之一。孕激素抵抗常与子宫内膜异位症(EMT)、多囊卵巢综合征(PCOS)、子宫内膜异常增生共存。在EMT中孕激素抵抗可能与炎症因子过度表达、微小RNA的差异性表达及DNA甲基化有关;在PCOS中孕激素抵抗可能与白血病抑制因子、同源盒基因-A10及叉头框转录因子O1表达降低有关;在子宫内膜异常增生中孕激素抵抗可能与有丝分裂诱导基因6表达降低、TGF-β/Smad2/Smad3信号通路异常有关。

多级梯度离心后X/Y精子浓度分析

目的在辅助生殖中,利用多层密度梯度离心的方法来分选X/Y精子,以检验常规IVF-ET中,X/Y精子比例是否失衡.方法使用Sperm Grad TM(Vitrolife,Sweden)与Sperm Rinse TM(Vitrolife,Sweden)配制10层梯度液,分别为100%、95%、90%、85%、80%、75%、70%、65%、60%、55%.在离心管中制成多层梯度后,每层梯度间分界明显.选择液化正常、浓度约50×106/mL、活动率约50%,畸形率正常的5人精液混合后,去除个体差异取3 mL进行梯度离心.分别收集每层梯度底部精子,利用双色X/Y FISH探针(Vysis)进行FISH检测,统计X/Y精子比例.结果 100%、95%、90%、85%、80%五层梯度中X精子含量比例分别为:51.41%、51.41%、52.19%、50.99%、54.10%.结论每层梯度液中X/Y精子含量比例虽有不同,但差异并不明显.现在辅助生殖技术中,利用商品化精子梯度分离液,即使使用多层梯度进行离心分离,也不会造成性别比例失衡.