树鼩在眼科学的基础研究进展

树鼩具有发达的视觉系统,视锥细胞数量占感光细胞的96%,具有较好的色觉及立体视觉。我国的树鼩资源丰富,成本较低,比较医学和基因组学研究证实树鼩是理想的眼科实验动物模型。利用树鼩开展眼科研究主要集中在近视模型的建立、近视对巩膜和脉络膜造成的变化,以及树鼩视网膜、视神经、角膜及视皮质的基础研究。本文对树鼩在眼科学方面的基础研究结果进行综述。

羊膜在眼科领域应用的研究进展

羊膜因其独特的组织结构及免疫特点,在眼科领域中发挥了重要作用,是治疗眼科疾病较为常用的材料。随着羊膜在细胞培养及组织工程中应用的进一步研究及对羊膜各种活性成分发挥生物学效应和调控途径的研究,羊膜手术在眼科的临床使用、技术方法等方面得到了极大的丰富和拓展,羊膜的生物学改良技术也逐渐得到进一步的完善。该文就羊膜在眼科领域的研究进展进行综述。

超声乳化术对高度近视合并年龄相关性白内障患者泪膜稳定性及泪液蛋白的影响

目的探讨超声乳化术对高度近视合并年龄相关性白内障患者泪膜稳定性及泪液蛋白的影响。方法回顾性分析我院2009年1月至2010年12月行超声乳化术的高度近视合并年龄相关性白内障患者48例(48眼),设为A组;另选择同期单纯年龄相关性白内障患者45例(52眼),设为B组,2组患者均行超声乳化术,分别于术前及术后7d、14d、30d、90d行泪膜破裂时间、基础泪液分泌试验、角膜荧光素染色检查和干眼症状评分,并对结果进行比较分析。结果与术前相比,术后7d、14d,2组泪膜破裂时间均显著下降,基础泪液分泌试验值和荧光素染色评分均显著增加,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01);术后30d,A组泪膜破裂时间仍显著下降,差异有显著统计学意义(P<0.01),2组其他指标均逐渐接近术前水平,差异均无统计学意义(均为P>0.05);术后90d,2组泪膜指标接近术前,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。与术前干眼症状评分相比,A组术后7d、14d、30d差异均有显著统计学意义(均为P<0.01),术后90d差异无统计学意义(P>0.05);B组术后7d差异有显著统计学意义(P<0.01),术后14d差异有统计学意义(P<0.05),术后30d、90d差异均无统计学意义(均为P>0.05)。A组和B组泪液总蛋白含量分别为(12.26±3.82)g·L(-1)、(13.54±2.51)g·L(-1),溶菌酶含量分别为(1.28±1.12)g·L(-1)、(1.35±2.23)g·L(-1),乳铁蛋白含量分别为(1.86±0.52)g·L(-1)、(1.74±0.23)g·L(-1),2组间差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论高度近视合并年龄相关性白内障患者泪膜稳定性较差,超声乳化术对其有明显影响。

超声乳化致恒河猴角膜内皮损伤动物模型的建立

目的建立超声乳化致恒河猴角膜内皮损伤的动物模型。方法健康成年恒河猴4只,右眼用于实验。术中超声头斜面向角膜内表面,负压150mmHg(1kPa=7.5mm-Hg)、流量25mL·min-1、能量80%、距离角膜内表面0.1～0.2mm的条件下持续5min,并不断摆动超声头破坏角膜内表面,位置为角膜中央直径7～9mm处。用I/A吸出透明晶状体皮质。术后当时、1周、2周、3周、4周行术眼前段照相后分别摘除术眼角膜,行扫描电镜观察角膜内皮细胞形态。结果超声乳化损伤角膜内皮细胞后,角膜透明度随时间延长逐渐下降,术后4周时出现明显角膜混浊水肿。扫描电镜下可见随着时间推移,受损角膜内皮细胞逐渐水肿,并从后弹力层脱落,术后4周时角膜内皮细胞已基本脱落,见裸露的后弹力层。结论本实验通过超声乳化仪建立了恒河猴角膜内皮损伤的动物模型,并且本模型具有可重复性、对内皮以外组织损伤小及简单易行的特点。

恒河猴血管内皮细胞移植替代角膜内皮细胞后房水血管内皮生长因子水平的变化

目的探索恒河猴血管内皮细胞移植替代角膜内皮细胞后房水血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)浓度的变化。方法实验组将体外培养增殖的恒河猴视网膜-脉络膜血管内皮细胞通过离心沉淀法移植到撕除后弹力层的恒河猴角膜内表面;对照组撕除角膜内皮层后,不做任何处理,直接原位缝合角膜植片。分别于术前及术后1周、2周、3周、4周、6周、8周、12周抽取房水,通过ELISA方法检测其中VEGF浓度,并进行统计分析。结果实验组和对照组术后1周时VEGF浓度差异无统计学意义(P>0.05),术后2周、3周、4周时实验组VEGF浓度分别为(374.74±3.30)ng·L-1、(419.06±1.39)ng·L-1、(481.83±3.36)ng·L-1,同时间点对照组分别为(271.11±1.12)ng·L-1、(345.18±3.27)ng·L-1、(380.33±5.03)ng·L-1,差异均具有统计学意义(均为P<0.05),相应时间点实验组显著高于对照组。实验组术后1周、2周、3周、4周VEGF浓度的差异均有统计学意义(均为P<0.05),各时间点与术前(128.75±3.83)ng·L-1差异均有统计学意义(均为P<0.05)。对照组术后各时间点VEGF浓度与术前差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论血管内皮细胞移植到角膜内表面后,房水VEGF浓度在术后4周内持续升高,之后稳定在一较高水平。

改良三壁眶减压术治疗重症甲状腺相关性眼病的疗效观察

目的观察改良三壁眶减压术治疗重症甲状腺相关性眼病的效果。方法对我院收治的3例(6眼)经内科治疗无效的重症甲状腺相关性眼病患者实施改良三壁眶减压术,观察患者术后视力、眼球突出度及外观情况。结果术后4眼视力轻度提高,2眼保持不变;眼球后退5.3～12.6mm,平均9.5mm;睑裂闭合不全者术后均闭合良好,外观满意;1眼出现少量眶内血肿,治疗后吸收;4眼出现双眼复视,均于1个月内消失;术后CT显示眼眶减压良好。结论改良三壁眶减压术可有效扩大眼眶容积,降低眶内压,还纳眼球,减少眼球突出,改善外观,对内科保守治疗、常规眶减压术无效的重症甲状腺相关性眼病患者安全有效。

显微镜下瘤体切除联合新鲜羊膜覆盖治疗幼儿角膜皮样瘤

目的观察显微镜下瘤体切除联合新鲜羊膜覆盖术治疗幼儿角膜皮样瘤的手术疗效,探索角膜皮样瘤的临床治疗方法。方法对16例(16只眼)角膜皮样瘤患儿行显微镜下病灶切除联合新鲜羊膜覆盖术,术后随访6～12个月,观察角膜病灶愈合情况。结果随访期内全部患者未见皮样瘤复发,病灶处残留轻度角膜云翳,部分患儿术后视力不同程度提高。结论显微镜下瘤体切除联合新鲜羊膜覆盖术治疗儿童角膜皮样瘤,手术操作简单,不依赖于供体角膜组织,术后疗效较好,适用于儿童角膜皮样瘤的及早治疗。

兔颈静脉血管内皮细胞的培养

目的建立稳定的兔颈静脉血管内皮细胞的体外培养方法,为自体的细胞移植提供种子细胞.方法取单侧兔颈静脉,保留对侧;用0.25%胰蛋白酶液进行灌注消化;M199培养基进行培养;Ⅷ因子相关抗原免疫组化进行血管内皮细胞鉴定.结果培养后1-3 d可见细胞贴壁,3 d后细胞变形,7-10 d细胞融合成片,14 d后可进行传代培养;Ⅷ因子相关抗原免疫组化阳性,证实所培养的细胞为血管内皮细胞;取材后实验兔一直存活,未出现死亡.结论本实验方法可以稳定地获取体外培养的兔颈静脉血管内皮细胞,并保证了实验兔的存活,为后续自体细胞移植的开展创造了条件.

树鼩形觉剥夺性近视模型的建立及观察

目的建立树鼩性成熟期及成年早期形觉剥夺性近视(FDM)模型,探讨年龄在近视发生发展中的作用及以视网膜形态变化为主的局部视网膜机制与近视的关系。方法 4月龄和5月龄树鼩各30只,随机分为空白对照组、遮盖组。遮盖组右眼遮盖作为实验眼,左眼开放作为自身对照眼。用自制半透明眼罩建立形觉剥夺近视模型,然后撤出干预因素,分别于遮盖3周、6周测量各组屈光度及眼轴长度;于遮盖6周观察视网膜厚度及视网膜各层细胞数目变化情况。结果 4月龄和5月龄树鼩遮盖右眼3周后,遮盖眼远视度数均有所降低,但与自身对照眼相比差异无统计学意义(P>0.05);而遮盖6周后:两组的屈光度和眼轴与对照眼比较均有明显差异(P<0.05);在遮盖期间,形觉剥夺眼眼轴不断增长,近视度数也逐渐增加,二者有很好的直线负相关关系;并且4月龄组所诱导出的近视程度高于5月龄组(P<0.05)。形觉剥夺可引起各层视网膜普遍变薄,有核细胞层、感光细胞层、内核层、神经节细胞层中胞核数减少,排列稀疏紊乱。结论形觉剥夺可以诱导性成熟期及成年早期树鼩的近视形成及视网膜形态发生变化。

结膜淀粉样变性的手术治疗

目的回顾12例(12眼)结膜淀粉样变性术后的愈合状况,以便制定更有效的治疗方案。方法病灶切除加局部注射皮质类固醇(地塞米松或曲安奈德)庆大霉素混合液。随后,在不同时间段通过门诊或邮件的方式分别随访(包括2例复发后就诊的患者)12例结膜淀粉样变性的术后情况。结果9例一次性治愈,2例手术后5年复发;1例手术部位的淀粉样变性病灶治愈,但3年后邻近部位又出现新的病灶。结论结膜淀粉样变性术后具有一定的复发率,应该根据病灶的特点采用合适的治疗方法。

BrdU示踪的恒河猴血管内皮细胞移植替代角膜内皮细胞的免疫组化染色观察

目的观察BrdU示踪标记的恒河猴血管内皮细胞移植替代同种异体角膜内皮细胞后角膜内表面免疫组化染色,探索血管内皮细胞移植替代角膜内皮细胞的可行性。方法体外培养恒河猴视网膜脉络膜血管内皮细胞,培养增生至第2代后置于含BrdU(10μg·mL-1)的1640培养液中传代72h,通过离心沉淀法移植到撕除后弹力层的恒河猴角膜内表面,术后取角膜行HE染色及抗BrdU免疫组化染色,观察角膜后表面的细胞分布及有无后弹力膜样组织,并观察角膜后表面细胞能否被抗BrdU染色着染。结果 HE染色显示,实验组角膜内表面可见细胞层生长,细胞后方未见后弹力膜样物质,抗BrdU免疫组化染色阳性,示该细胞为培养的BrdU示踪的血管内皮细胞;对照组角膜组织HE染色显示,角膜内表面光滑,未见细胞样结构,BrdU染色呈阴性,未见棕黄色着色的细胞样组织。结论 BrdU可成功示踪标记体外培养的血管内皮细胞,恒河猴血管内皮细胞能够在撕除后弹力层的角膜内表面生长。

半导体激光治疗糖尿病视网膜病变的疗效观察

糖尿病视网膜病变（diabetic retinopathy，DR）是以微血管受损为主要特征的视网膜血管性疾病，为糖尿病的主要并发症之一，也是致盲的主要原因之一。如果不能及时有效治疗，许多病例最终因牵引性视网膜脱离或新生血管性青光眼而失明。激光光凝治疗糖尿病视网膜病变可以改善或稳定病情。现对76例（135眼）DR患者行半导体激光全视网膜光凝治疗的疗效分析报告如下。

自体双层大网膜移植重建结膜囊

目的:研究自体双层大网膜重建结膜囊恢复正常眼表解剖结构和生理功能的可行性。方法:用电凝器热烧伤的方法损伤实验家兔约1/2范围的球结膜、穹窿结膜和睑结膜。第2天,于腹上中线偏左剪开约3cm长的切口,暴露胃小弯部,剪取少许大网膜放入含生理盐水的培养皿中待用。将电凝损伤坏死区的结膜分离去除,大网膜呈双层折叠式覆盖于损伤区,10-0尼龙线褥式缝合大网膜和结膜的交接部分。结果:术后12d,全部大网膜与结膜缘融合生长,眼表的解剖结构和生理功能得以逐渐恢复,角膜无明显的新生血管形成。结论:自体双层大网膜重建结膜囊是治疗睑球黏连性疾病的理想方法。

恒河猴血管内皮细胞移植替代角膜内皮细胞后房水中离子浓度的变化

目的探索恒河猴血管内皮细胞移植替代角膜内皮细胞后房水中Na+、K+、Ca2+、Mg2+、P3+、Cl-6种离子浓度的变化。方法将体外培养增殖的恒河猴视网膜脉络血管内皮细胞通过前房注射法移植到超声乳化破坏角膜内皮细胞的恒河猴角膜内表,术前及术后定期抽取房水,通过全自动生化分析仪检测房水中Na+、K+、Ca2+、Mg2+、P3+、Cl-的浓度,并与移植前进行对比分析。结果 Na+:术后3个月时,实验组Na+浓度(164.15±0.49)mmol.L-1略低于空白对照组(167.05±0.49)mmol.L-1,差异有统计学义(P<0.05)。其余组间及组内检验浓度差异均无统计学意义(均为P>0.05)。K+、Ca2+、Cl-:组间及组内检验后K+、Ca2+、Cl-浓度差异均无统计学意义(均为P>0.05)。g2+和P3+:实验组中各观察时间点Mg2+、P3+浓度差异有统计学意义(P<0.05),实验组、实验对照组、空白对照组两两相比不同组别、不同时间差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论恒河猴视网膜脉络膜血管内皮细胞移植到角膜内表面后,对房水中Na+、K+、Ca2+和Cl-离子含量无明显影响,细胞内环境基本稳定;对Mg2+浓度的影响较明显,提示着细胞生理状态的改变过程;对P3+离子浓度有一定影响,尚需进一步的研究和证实。

利用离心沉淀法移植恒河猴血管内皮细胞替代角膜内皮的可行性分析

目的分析利用离心沉淀法移植体外培养的恒河猴血管内皮细胞(vascular endothelial cells,VEC)替代角膜内皮细胞(corneal endothelial cells,CEC)的可行性。方法将恒河猴9只随机分为2组:实验组(6只)、对照组(3只)。实验组:角膜环钻取下中央角膜组织,显微镜下撕除后弹力层,将角膜植片形成约45°倾斜、内表面向上方置于0.6mLEP管中,再向管中加入配置好的密度为40×106L-1的恒河猴VEC悬液0.5mL,管中形成棉球在下、角膜植片在中间、细胞悬液在上面的三明治结构,盖紧EP管,放置于离心机中,以400r·min-1、800r·min-1、1200r·min-1的转速各离心4min后将植片原位缝回植床;对照组:将撕除后弹力层的术眼角膜植片原位缝回植床。术后1个月、2个月、3个月分别摘取术眼,行扫描电镜观察移植的VEC在角膜植片内表面的分布情况。结果离心沉淀后倒置显微镜观察,可见移植的类圆形细胞均匀贴附于角膜植片内表面;术后1个月扫描电镜显示种植的VEC贴附于角膜内表面,细胞表面积较大,呈长梭形,细胞间连接不紧密,可见细胞间隙及少量裸露的胶原纤维区;随着时间推移,术后2个月时,可见植片内表面的VEC密度逐渐增大,细胞间出现紧密连接;术后3个月时,可见细胞密度进一步增大,大片状均匀贴附于角膜植片内表面,细胞呈不规则多边形,高倍镜下,细胞表面可见典型的长短不一微绒毛。对照组未见纤维裸露区,胶原前表面偶见白细胞及变形红细胞。结论离心沉淀法可以将VEC成功移植于角膜内表面并均匀分布,移植后的VEC可异位生长并大量分裂增殖。

形觉剥夺树鼩视皮质17区的可塑性

目的初步探索树鼩作为一种新的弱视模型的可行性分析研究;探讨形觉剥夺树鼩初级视皮质的可塑性机制,为进一步认识弱视形成及恢复机制提供理论依据。方法 60只出生30 d左右树鼩随机分为5组(每组12只):右眼缝合1月组;右眼缝合2月组;右眼缝合1月打开换缝合左眼1月,即换缝合组;对照组1,为A组同龄大小树鼩正常环境饲养;对照组2,为B、C组同龄大小树鼩正常环境饲养。造模完成后进行视皮质定位取材,观察不同条件下树鼩视皮质组织学、超微结构、神经元细胞凋亡情况以及c-fos的表达变化情况。结果与对照组相比各实验组视皮质组织学及电镜均出现了不同程度的损害,且缝合2月组损伤更为明显;凋亡染色显示实验组跟对照组无差异性;c-fos蛋白及mRNA表达量在各实验组均出现了降低,且缝合右眼两月组表达量最低,换缝合以后表达量有一个小幅度的升高,对照组间c-fos表达无差异性。结论不同程度的形觉剥夺性弱视引起了不同的组织病理学变化;弱视引起的神经元损伤具有可塑性;树鼩可作为形觉剥夺性弱视的理想动物模型。

改良揭膜消化法分离培养恒河猴角膜内皮细胞

目的分析改良揭膜消化法分离培养恒河猴角膜内皮细胞的可行性。方法揭取恒河猴角膜后弹力层和内皮层,反复剪碎,用1 mg·m L^(-1)胶原酶A消化15 min,离心后重悬接种。待原代细胞长满80%~90%时,以40×106个·L^(-1)的密度传代。观察记录原代及传代细胞生长情况、传代时间,进行细胞鉴定,并与组织贴壁法相比较。结果改良揭膜消化法获取的原代细胞生长较慢,21 d融合成单层铺路石样结构,无基质细胞污染;传代细胞生长较快,5~6 d可传一代;神经元特异烯醇化酶表达阳性。组织贴壁法分离组织24h后组织片体积变小,透亮度明显下降,疑似溶解,高倍镜下观察显示,后弹力层纤维排列紊乱,细胞观察不清;继续培养至第5天,细胞完全溶解,组织片碎裂,轮廓不清,未见角膜内皮细胞爬出。结论改良揭膜消化法能简易高效地获得大量恒河猴角膜内皮细胞。

自制简易羊膜固定器治疗兔眼化学性烧伤的实验观察

目的探讨应用自制简易环形羊膜固定器固定羊膜行羊膜覆盖术治疗兔眼化学性眼表烧伤的可行性。方法将40只(40眼)新西兰大白兔,随机分为实验组与对照组,每组各20只(20眼),均取左眼为实验眼,制成中度碱烧伤模型。实验组采用自制羊膜固定器将羊膜固定于眼表行羊膜覆盖术,对照组采用常规缝线法固定羊膜行羊膜覆盖术。1周内每天随访1次,之后1周检查1次,连续检查1个月。1个月内根据羊膜破损情况,5~10 d更换新鲜羊膜。记录手术时间并观察两组眼表羊膜下积液、睑球粘连的发生率,并对1个月后角膜新生血管及角膜混浊度进行评分。结果实验组手术时间(16.65±2.64)min,角膜新生血管评分(1.80±0.76)分,角膜混浊度评分(1.85±0.58)分,羊膜下积液率10%,睑球粘连率5%,角膜上皮愈合率80%,角膜上皮愈合时间(23.25±3.08)d。对照组手术时间(39.40±5.87)min,角膜新生血管评分(2.20±0.69)分,角膜混浊度评分(2.00±0.64)分,羊膜下积液率45%,睑球粘连率35%,角膜上皮愈合率65%,角膜上皮愈合时间(26.15±2.85)d。两组手术时间、角膜上皮愈合时间、羊膜下积液率及睑球粘连率相比差异均有统计学意义(均为P【0.05);角膜上皮愈合率术后1个月角膜新生血管及角膜混浊度评分差异均无统计学意义(均为P】0.05)。结论应用自制简易环形羊膜固定器可缩短手术时间及角膜上皮愈合时间,多次重复手术,减少晚期严重并发症的发生。该固定器具有性质稳定、制作材料易获取、价格低廉等特点,适用于偏远基层医院眼科。

改良前房注射法移植血管内皮细胞替代角膜内皮细胞的实验观察

目的 探讨血管内皮细胞（VEC）移植治疗角膜内皮损伤的可行性.方法 实验研究.体外培养增殖VEC.将恒河猴12只,按照随机数字表随机分为两组：实验组（6只）、对照组（6只）.实验组通过超声乳化破坏角膜内皮细胞层之后,将体外培养的VEC利用前房注射法移植到恒河猴角膜内表面;对照组超声乳化破坏角膜内皮细胞层后不注射VEC.术后7、14、30、60、90 d分别行术眼前节照相;术前及术后7、14、30、60、90 d分别用A超测量角膜厚度、Goldman眼压计测量眼压,对数据进行独立样本t检验及方差分析;术后30、60、90 d分别摘取术眼行病理切片HE染色、扫描电镜观察VEC在角膜植片内表面的分布.结果 实验组角膜比对照组有较好的透明度,未出现大泡性角膜病变,术后3个月时实验组角膜缘可见少量新生血管.术眼前房深度均正常;术后3个月时,实验组角膜厚度为（500±14） μm,明显低于对照组角膜厚度[（618±11）μm],同时期实验组和对照之间角膜植片厚度值变化差异有统计学意义（术后1、2、3个月t值分别为-3.256、-4.419、-12.896,均P＜0.05）;同时期实验组和对照之间眼压变化差异无统计学意义（术后1、2、3个月t值分别为-1.179、-2.166、-2.536,均P＞0.05）;实验组角膜内表面可见细胞层;对照组角膜内表面未见细胞样结构.扫描电镜：实验组角膜植片内表面可见VEC分布均匀,生长良好,呈不规则多边形,表面可见微绒毛,VEC间可见少量白细胞,小梁网处部分细胞碎片聚集;对照组角膜内表面呈纤维物质样,未见细胞生长.结论 超声乳化法能很好的建立恒河猴角膜内皮损伤模型;前房注射法能够将VEC移植到角膜内表面,且细胞能在撕出后弹力层的角膜内表面生长,并在一定程度上发挥屏障作用维持角膜的脱水状态和透明性.移植手术对前房角的组织结构形态在短期内不产生病理性影响.