特异性阻断剂Nec-1对视网膜缺血再灌注损伤模型小鼠坏死性凋亡的影响及作用

目的探讨特异性阻断剂Nec-1对视网膜缺血再灌注损伤(retinal ischemia reperfusion injury,RIRI)模型中坏死性凋亡的影响及作用。方法取60只野生型C57小鼠随机分为实验组、对照组及空白组。每组20只。在进行Nec-1对坏死性凋亡影响研究中,空白组15只小鼠不做任何处理,实验组15只小鼠给予玻璃体内注射2μL Nec-1(2mol·L^(-1))预处理,对照组15只小鼠无预处理;预处理4 h后实验组及对照组通过前房灌注法建立RIRI模型;再灌注损伤后3 d,每种检测方法各取5只小鼠分别于取材后行Western blot、免疫荧光定量PCR、免疫荧光染色,检测以下基因mRNA和蛋白的表达变化:IL-1β、IL-6、TNF-α、RIP3、RIP1及Caspase-8。在进行Nec-1对视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)的影响研究中,实验组、对照组及空白组各5只小鼠纳入荧光金标记。空白组小鼠荧光金标记后不做任何处理。荧光金标记7 d后,实验组小鼠给予玻璃体内注射2μL Nec-1(2 mol·L^(-1))预处理,对照组无预处理。预处理4h后实验组及对照组通过前房灌注法建立RIRI模型。再灌注损伤后3 d,收集视网膜组织行铺片RGC计数研究。结果与对照组相比,实验组RIP3、RIP1的mRNA表达明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.001);IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达亦均明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.001);Caspase-8的表达变化不明显,与对照组相比差异无统计学意义(P=0.654 8)。通过Western blot检测发现,实验组RIP3蛋白表达较对照组明显降低,其变化趋势与RIP3 mRNA水平的变化基本一致。通过视网膜切片免疫荧光染色检测亦发现,实验组RIP3蛋白表达较对照组明显降低。实验组全视网膜铺片中每个视野下荧光金逆行标记RGC数(197.3±3.6)较对照组(107.5±6.1)明显增多,差异有统计学意义(P<0.001)。结论实验性RIRI模型中,Nec-1能阻断坏死性凋亡,并显著增加RGC数。

新生儿眼底病变筛查及视网膜出血的影响因素分析

目的对新生儿眼底病变进行筛查统计,并分析视网膜出血的影响因素。方法回顾性分析2013年1月至2016年12月在我院新生儿病房行眼底筛查的1558例新生儿资料。统计新生儿眼底病变发病率以及视网膜出血发病情况,对影响视网膜出血的相关因素进行分析。结果本组1558例新生儿中筛查出眼底病变患儿196例,占12.6%;类型包括视网膜出血(8.9%)、早产儿视网膜病变(1.3%)、眼底渗出(1.2%)、视网膜有髓神经纤维(0.5%)、视网膜色素沉着(0.4%)、先天性结晶样变性(0.3%)、视网膜母细胞瘤(0.1%)。单因素分析结果显示,分娩方式、多胎、宫内窘迫、机械通气是影响视网膜出血的相关因素(均为P<0.05);而性别、是否足月、出生体质量、是否子痫、是否胎膜早破、是否窒息、是否输血、是否吸氧等因素与视网膜出血的发生并无明显相关性(均为P>0.05)。多因素Logistic回归分析结果显示,阴道分娩、机械通气是视网膜出血的独立危险因素。结论新生儿眼底病变的发生率较高,其中绝大多数为视网膜出血,阴道分娩和机械通气是导致新生儿视网膜出血的独立危险因素,应针对此类新生儿群体加强观察和干预。

视网膜神经节细胞无血清上清培养液诱导大鼠视网膜干细胞的分化

目的探讨视网膜神经节细胞无血清上清培养液对视网膜干细胞分化的影响。方法分离大鼠视网膜干细胞和视网膜神经节细胞;采用免疫荧光法鉴定体外培养的大鼠视网膜干细胞与视网膜神经节细胞,视网膜干细胞以Nestin抗体进行鉴定,视网膜神经节细胞以Thy-1抗体进行鉴定;以视网膜神经节细胞无血清上清培养液培养视网膜干细胞,以不加入条件培养液培养的视网膜干细胞为对照组,收集分化细胞,采用q PCR法检测Nestin、Pax6、Thy-1及Brn-3的基因表达。结果培养的视网膜干细胞Nestin抗体染色阳性,视网膜神经节细胞Thy-1抗体染色阳性。培养视网膜干细胞72 h后,与对照组相比,无血清上清培养液组细胞Nestin和PAX6基因相对表达量降低,差异均有统计学意义(均为P<0.000 1);Thy-1和Brn-3基因相对表达量升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论视网膜神经节细胞无血清上清培养液能够诱导视网膜干细胞分化为视网膜神经节样细胞。

干眼病的病因、发病机制及治疗进展

由于内在因素(泪膜破坏、性激素失调等)和外在因素(环境、手术和药物等)多重因素影响,干眼病患者急剧增多且呈年轻化发展趋势,干眼病目前已成为最常见的眼部疾病之一。回顾近几年的国内外相关文献,就干眼病的主要病因、发病机制及未来治疗突破的方向进行综述。

miRNA在老年性黄斑变性中的调控作用

miRNA是一种性质稳定的小分子RNA,在动物、植物内大量表达,可通过与目的mRNA的3’非翻译区碱基互补配对结合,在转录后水平调控靶基因的表达。某些miRNA的表达失调及其后续的异常生物学调控,与老年性黄斑变性(AMD)发生发展中的炎症反应、氧化应激损伤、吞噬功能障碍以及异常血管生成方面有着密切联系。鉴于miR-155、miR-125b及miR-34a的失调似乎对AMD的发生起到了更加重要的作用,这些miRNA或有望成为AMD的诊断标记物及治疗新靶点。