FAM83B对肝癌细胞的作用及机制研究

目的探讨具有序列相似性的家族83成员B(FAM83B)对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响及其机制。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)、Western blotting、免疫组织化学法检测肝癌组织、癌旁正常组织、人类肝癌细胞系(HepG2、Hep3B)、正常人类肝细胞系(LO2)中FAM83B mRNA和蛋白的表达。采用靶向siRNA敲低HepG2细胞系中FAM83B作为si-FAM83B组,HepG2细胞转染si-NC慢病毒载体作为siNC组。分别用PBS、40 ng/mL胰岛素样生长因子1(IGF-1)处理si-FAM83B组细胞48 h,并将细胞分为siFAM83B+PBS组和si-FAM83B+IGF-1组,分析敲低FAM83B对肝癌细胞增殖、侵袭、细胞周期和凋亡的影响,并研究敲低FAM83B对磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素哺乳动物靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)信号通路的影响。结果肝癌组织FAM83B m RNA和蛋白相对表达量高于癌旁正常组织(P<0.05)。HepG2、Hep3B细胞FAM83B mRNA和蛋白相对表达量高于LO2细胞(P<0.05)。si-FAM83B组FAM83B mRNA和蛋白相对表达量低于si-NC组(P<0.05)。si-NC组与si-FAM83B组24 h、48 h、72 h、96 h的OD值比较,采用重复测量设计的方差分析,结果:(1)不同时间点OD值有差异(F=773.510,P=0.001);(2)si-NC组与si-FAM83B组的OD值有差异(F=516.980,P=0.000),si-FAM83B组OD值较低;(3)两组OD值变化趋势有差异(F=820.782,P=0.000)。si-FAM83B组细胞凋亡率高于si-NC组,侵袭细胞数低于si-NC组(P<0.05)。si-FAM83B组PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白相对表达量低于si-NC组(P<0.05),LC3-Ⅱ高于si-NC组(P<0.05)。si-NC组与siFAM83B组Akt、mTOR蛋白相对表达量比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。si-FAM83B+IGF-1组PI3K、p-Akt和p-mTOR蛋白相对表达量高于si-FAM83B+PBS组(P<0.05),LC3-Ⅱ低于si-FAM83B+PBS组(P<0.05)。si-FAM83B+PBS组与si-FAM83B+IGF-1组Akt、mTOR蛋白相对表达量比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。si-FAM83B+PBS组与si-FAM83B+IGF-1组24 h、48 h、72 h、96 h的OD值比较,采用重复测量设计的方差分析,结果:(1)不同时间点OD值有差异(F=5211.626,P=0.000);(2)si-FAM83B+PBS组与siFAM83B+IGF-1组OD值有差异(F=453.499,P=0.000),si-FAM83B+IGF-1组OD值较高;(3)两组OD值变化趋势有差异(F=384.347,P=0.000)。si-FAM83B+IGF-1组细胞凋亡率低于si-FAM83B+PBS组(P<0.05),侵袭细胞数高于si-FAM83B+PBS组(P<0.05)。结论敲低FAM83B可通过沉默PI3K/Akt/mTOR通路抑制肝癌细胞生长,并促进肿瘤细胞自噬。

巴西苏木素对肝癌细胞增殖能力的影响

目的探索巴西苏木素对人肝癌细胞MHCC97H增殖能力的影响。方法把人肝癌细胞MHCC97H分为对照组和实验组。对照组在DMEM培养基中加入与巴西苏木素等体积的无水乙醇进行培养;实验组给予含60μg·mL^(-1)巴西苏木素的DMEM培养基进行培养。用CCK8检测细胞的增殖能力,用蛋白质印迹法检测多肿瘤抑制基因1(P16)和周期蛋白依赖性激酶4/6(CDK4/6)的表达水平。结果实验组和对照组的第5天细胞活力(光密度)分别为1.39±0.08和2.21±0.11,P16蛋白相对表达量分别为1.18±0.21和0.43±0.05,CDK4蛋白相对表达量分别为0.87±0.12和1.46±0.17,CDK6蛋白相对表达量分别为0.90±0.11和1.53±0.21,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论巴西苏木素能通过上调肝癌细胞MHCC97H中P16的表达,降低CDK4/6的表达,从而抑制其增殖能力。