二糖对绵羊精液冷冻保护效果研究

实验检验了主要二糖(海藻糖和蔗糖)对绵羊精液的冷冻保护效果。将电刺激采集的云南半细毛羊精液与冷冻稀释液混合、5℃平衡、液氮气相预冻后直接投入液氮冷冻保存。解冻后,检测了了精子活率、活力、顶体状态、质膜完整性和磷脂酰丝氨酸(PS)分布等指标。结果表明:二糖可以提高云南半细毛羊冷冻精子的质量。和蔗糖相比,海藻糖可以显著提高冷冻精子的活力(P<0.05)。另外,二糖可以有效保护冷冻精子顶体的完整性,其对绵羊冷冻精子的质膜和PS分布的保护作用明显优于无二糖冷冻组(P<0.05)。此外,海藻糖对冷冻精子活率、运动速度、顶体、质膜完整性和PS分布的保护效果与蔗糖类似(P>0.05)。综上所述,二糖可以降低绵羊的冷冻损伤,而且海藻糖对精子的冷冻保护效果要优于蔗糖。

不同家庭牧场肉羊养殖生产及效益分析

本研究采用不同的饲养方式及不同蛋白日粮对山羊进行分组育肥试验,比较不同饲养条件对山羊增重的影响,探索适合云南家庭牧场肉用山羊的育肥模式。选取3~4月龄云上黑山羊和本地黑山羊杂交后代公羊100只,分5个组进行为期60~61 d的育肥试验。结果显示:相同饲养条件下舍饲组较半舍饲组平均增重提高14.63%,日增重提高95.01%,利润提高140.03%;2号蛋白质浓缩料组获得了更好的育肥效果,而1号蛋白质浓缩料组养殖效益较好。

白藜芦醇对绵羊冷冻精液质量的影响

试验旨在研究白藜芦醇对绵羊冷冻精液质量的改善效果。采用假阴道法采集6只云南半细毛羊精液,用含不同浓度(0、0.1、1、10、20μmol/L)白藜芦醇的Optidyl稀释液稀释后进行细管分装,低温平衡和液氮气相预冻后,在液氮中保存30 d。解冻后测定精子活力、质膜完整性、磷脂酰丝氨酸(PS)分布、顶体完整性和活性氧等指标。结果表明,解冻后10μmol/L白藜芦醇组精子总活力、直线运动百分率、精子弯尾率分别为76.14%±0.97%、43.56%±0.91%、43.24%±1.68%,均显著高于其他各组(P<0.05);而20μmol/L白藜芦醇组精子总活力、直线运动百分率、精子弯尾率分别为21.78%±0.79%、25.23%±1.34%、4.84%±0.68%,均显著低于其他各组(P<0.05)。10μmol/L白藜芦醇组精子顶体完整性最高,为50.47%±0.91%,显著高于其他各处理组(P<0.05)。PS分布结果表明,10μmol/L白藜芦醇组正常精子百分率为46.43%±2.95%,显著高于20μmol/L组(31.14%±3.56%,P<0.05),与其他各组无显著性差异(P>0.05)。20μmol/L白藜芦醇组PS标记率(39.82%±3.38%)显著高于其他处理组(P<0.05)。活性氧试验结果表明,10μmol/L白藜芦醇组正常精子(63.57%±0.71%)显著高于其他各组(P<0.05);而20μmol/L白藜芦醇组正常精子(32.45%±1.42%)显著低于其他各组(P<0.05)。综上,在冷冻稀释液中添加白藜芦醇可以改善绵羊冷冻精液品质,这与白藜芦醇的抗氧化特性有关。但是,白藜芦醇的冷冻保护效果具有明显的浓度依赖性,其最佳作用浓度为10μmol/L,过高浓度的白藜芦醇反而加重精子的冷冻损伤。此外,对于白藜芦醇对绵羊精子的抗冻保护效果仍然需要体外受精或人工授精验证。

抗冻蛋白对山羊精子冷冻保护效果的分析

本实验系统评价了抗冻蛋白Ⅲ(AFPⅢ)对山羊精子的冷冻保护效果。采用假阴道法采集6只云南黑山羊精液,离心洗涤去除精浆后和冷冻稀释液(0、0.1、1、10、100μg/m L AFPⅢ)混合,经4℃平衡、液氮气相预冻后直接投入液氮保存。解冻后检测精子活力、顶体、质膜以及早期凋亡等指标。同时采用透射电镜(TEM)观察冷冻对精子超微结构的影响。结果表明:与对照组相比,AFPⅢ并不能显著改善山羊解冻后精子活力、顶体完整性、质膜完整性和低渗耐受性(P>0.05)。此外,AFPⅢ并不能抑制解冻后精子的磷脂酰丝氨酸(PS)外翻。电镜实验结果进一步证实,AFPⅢ并不能有效保护冷冻精子质膜。总之,本实验证实,AFPⅢ并不能降低山羊精子的冷冻损伤,相反其可能加重冷冻对精子质膜的损伤,其损伤机制尚需要进一步研究。

白藜芦醇对山羊冷冻精液质量的影响

本实验旨在研究白藜芦醇对山羊冻精质量的改善效果。用假阴道法采集8只云上黑山羊精液,用添加不同浓度(0、0.1、1、10、20μmol/L)白藜芦醇的Optidyl稀释液稀释后进行细管分装,其中不添加白藜芦醇组为对照组。在5℃平衡4 h后,将细管于液氮蒸气中预冻,最后在液氮中保存1周。37℃水浴解冻后测定精子活力、顶体完整性、膜完整性和磷脂酰丝氨酸分布等指标。结果表明:与对照组相比,10μmol/L白藜芦醇冷冻组精子直线运动百分率和质膜完整性均提高(P<0.05);10μmol/L白藜芦醇抑制了冷冻解冻后精子ROS的产生(P<0.05);而20μmol/L白藜芦醇冷冻组精子解冻后直线运动百分率低于其他各处理组(P<0.05);白藜芦醇不能缓解冷冻解冻过程对精子总活力、顶体完整性和磷脂酰丝氨酸分布的不利影响。总之,冷冻稀释液中添加10μmol/L白藜芦醇可以改善山羊冻精质量,这可能与白藜芦醇的抗氧化特性有关;但过高浓度的白藜芦醇加重精子的冷冻损伤程度。白藜芦醇是否能提高山羊冻精的人工授精效果还有待进一步研究。

肌醇类冰晶抑制剂和海藻糖对山羊精子冷冻保存效果的影响

为进一步降低冷冻解冻过程对山羊精子的理化损伤,本试验系统检验了肌醇类冰晶抑制剂(SIB)和海藻糖对山羊精子的冷冻保护效果。采用假阴道法采集6只云南黑山羊精液,离心洗涤去除精浆后和冷冻稀释液混合,经4℃平衡、液氮气相预冻后直接投入液氮保存。解冻后检测精子活力、顶体、质膜以及低渗耐受性。同时采用透射电镜(TEM)观察冷冻对精子超微结构的影响。结果表明:1,4-环己二醇(1,4-CHD)和海藻糖处理组精子活力(41.35%±8.14%和43.59%±6.23%)、顶体完整性(62.73%±7.62%和64.29%±7.81%)和低渗耐受性(40.29%±7.41%和39.79%±6.58%)均显著高于对照组(35.97%±6.21%、55.46%±8.91%和34.17%±5.68%,P<0.05),且海藻糖可以有效抑制冷冻解冻过程导致的精子凋亡。流式分析结果表明,1,4-CHD不能降低冷冻对山羊精子质膜完整性和磷脂酰丝氨酸(PS)分布的损伤,但是海藻糖可以显著降低冷冻解冻过程中对山羊精子质膜的损伤。电镜结果表明,冷冻对精子质膜和顶体等结构损伤严重,解冻后部分精子质膜发生肿胀、脱落或断裂等现象。而且,顶体外膜存在脱落现象,顶体内容物发生部分甚至完全泄漏。电镜结果进一步证实海藻糖对冷冻精子质膜的保护效果要优于1,4-环己二醇。总之,肌醇类SIB和海藻糖可以降低山羊精子的冷冻损伤,但相对于海藻糖而言,肌醇类SIB并不能降低冷冻对山羊精子质膜的损伤。

山羊不同成熟阶段卵母细胞玻璃化冷冻敏感性的探讨

试验比较了山羊GV期和MII期卵母细胞对玻璃化冷冻损伤敏感性的差异。卵巢取自昆明当地屠宰场,将采集的GV期卵母细胞分成两组。第Ⅰ组直接用于毒性实验和玻璃化冷冻保存;第Ⅱ组经体外成熟至MII期后用于毒性实验和玻璃化冷冻。冷冻方法采用Cryoloop法。结果表明:毒性实验组和冷冻保存组卵母细胞的形态正常率和发育率均显著低于新鲜对照组(P<0.05)。毒性实验组GV期卵母细胞的形态正常率显著低于MII期(P<0.05),但是二者卵裂率之间差异不显著(P>0.05)。解冻后GV期卵母细胞的形态正常率显著低于MII期卵母细胞((60.37±2.91)%vs(82.91±3.01)%,P<0.05),而且解冻后GV期卵母细胞的卵裂率也显著低于MII期卵母细胞((42.81±2.94)%vs(57.91±1.06)%,P<0.05)。但是解冻后GV期和MII期卵母细胞的囊胚发育率之间差异不显著((8.51±1.46)%vs(12.41±3.74)%,P>0.05)。进一步表明,GV期未成熟卵母细胞对玻璃化冷冻的敏感性要明显高于MII期成熟卵母细胞。