胰岛素增强子结合蛋白-1(ISL1)与肿瘤的发生与发展

在人类发育过程中,胰岛素增强子结合蛋白-1(ISL1)被认为是一个胚胎性基因。成年后,ISL1只在特定的组织或器官中表达,例如胰腺和大脑。近年来,在多种肿瘤中检测到ISL1的异常表达,不仅在胰腺内分泌肿瘤、神经肿瘤中高表达(与之相应的正常组织也表达ISL1),而且在淋巴瘤、胃癌和膀胱癌等肿瘤组织中呈现表达(其正常组织不表达ISL1)。ISL1的异常表达可能与肿瘤的发生发展及预后相关。本文针对ISL1与肿瘤的相关性以及在肿瘤发生发展中的功能进行综述,为进一步的分子机制研究提供理论依据。

直肠腔内三维超声和MRI对中下段直肠癌壁外血管侵犯程度的评估效果

目的:比较直肠腔内三维超声(3D-ERUS)和核磁共振成像(MRI)对中下段直肠癌术前壁外血管侵犯(EMVI)的诊断结果,探讨3D-ERUS在评估中下段直肠癌术前EMVI中的临床价值。方法:选取94例术后病理均诊断为直肠癌患者,术前均行3D-ERUS和MRI检查,均采用EMVI 5级评分(0~4分)进行评估。采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)评价3D-ERUS和MRI的诊断结果,计算3D-ERUS和MRI诊断中下段直肠癌患者术前EMVI的准确率,并计算ROC曲线下面积(AUC)及特异度(Sp)、灵敏度(Se)、阳性预测值(PPV)和阴性预测值(NPV),3D-ERUS和MRI诊断结果与病理结果之间的一致性采用Kappa检验。结果:3D-ERUS诊断中下段直肠癌患者术前EMVI的准确率为90.43%(Kappa=0.685,P<0.01),AUC为0.868,Se为81.25%,Sp为92.31%,PPV为68.42%,NPV为96.00%;MRI诊断中下段直肠癌患者术前EMVI的准确率为87.23%(Kappa=0.589,P<0.01),AUC为0.824,Se为75.00%,Sp为89.74%,PPV为60.00%,NPV为94.59%。3D-ERUS和MRI诊断中下段直肠癌患者术前EMVI的准确率比较差异无统计学意义(χ^2=0.214,P=0.643),AUC比较差异也无统计学意义(Z=1.355,P=0.175)。结论:3D-ERUS和MRI在评估中下段直肠癌患者术前EMVI中具有较高的临床应用价值,3D-ERUS可作为MRI的补充用于评估术前中下段直肠癌患者的EMVI。

高迁移率族蛋白B1在肿瘤中的作用

高迁移率族蛋白B1(high-mobility group box 1,HMGB1)是一种普遍存在于真核细胞中的非组核蛋白。在细胞核内的HMGB1主要参与DNA修复、转录、维持端粒酶的活性以及染色体稳定。释放至细胞核外的HMGB1在细胞的增殖、炎症、血管生成、免疫耐受、免疫逃逸中发挥促肿瘤作用;但又能活化和募集免疫细胞至肿瘤微环境中,诱导肿瘤细胞发生免疫原性细胞死亡,从而发挥抗肿瘤作用。HMGB1在多种肿瘤中异常表达,参与了肿瘤的发生、发展和转移,故推测它可能同时发挥促肿瘤和抗肿瘤的双重作用。

基于高通量芯片对急性髓系白血病竞争内源性RNA网络的构建和分析

目的:构建急性髓系白血病(AML)相关的竞争内源性RNA(ceRNA)网络,探讨AML发生发展的分子机制。方法:采用NCBI的基因表达数据库(GEO)下载AML的表达矩阵(GSE96535),通过R语言的edgeR函数对差异表达的mRNA和长链非编码RNA(lncRNA)进行筛选。采用miRcode、miRDB、miRTarBase和TargetScan数据库预测差异表达的lncRNA与miRNA以及差异表达的mRNA与miRNA之间的调控关系。采用Cytoscape软件构建lncRNA-miRNA-mRNA的ceRNA调控网络,采用基因本体论(GO)、京都基因和基因组百科全书(KEGG)对差异基因进行富集分析,采用CytoHubba插件筛选核心基因,即Hub基因。采用GEPIA数据库比较AML患者和正常对照者中前10个Hub基因的表达,绘制Hub基因的生存曲线。结果:与正常对照者比较,AML患者中有1105个mRNA和387个lncRNA存在差异表达。构建的lncRNA-miRNA-mRNA ceRNA调控网络由45个lncRNAs、31个miRNA和89个mRNA组成。GO分析,差异基因所调节的功能主要有膜微结构域调节、谷氨酸受体结合和上皮细胞增殖调节等。KEGG分析,19条通路被富集,其中包括转录调控、蛋白聚糖调控和Ras信号通路等。通过CytoHubba共筛选出GATA结合蛋白3(GATA3)、WT1转录因子(WT1)和过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARG)等前10个连接度最高的Hub基因。采用GEPIA数据库验证GATA3、WT1、PPARG、MYB原癌基因(MYB)、性别决定相关的高迁移率基因群4(SOX4)和E2F7存在差异表达。E2F7低表达组患者生存率高于E2F7高表达组(P=0.028)。结论:筛选出的lncRNA、miRNA和mRNA所构成的ceRNA网络可能促进了AML的发生发展。

5种癌症患者癌性贫血分析

目的：探讨5种恶性肿瘤患者治疗前后贫血变化及不同肿瘤的贫血发生率、贫血程度及贫血类型特点。方法：选取2012年1月至12月病理确诊的肺癌、胃癌、大肠癌、乳腺癌、宫颈癌患者，查阅其病历获取相关资料，分析治疗前后不同肿瘤的贫血发生率、血红蛋白变化及各病种贫血程度和贫血形态学特点。结果：450例恶性肿瘤患者治疗前121例发生贫血，贫血发生率26．8％，5种肿瘤贫血发生率为：肺癌36．3％，胃癌31．0％，犬肠癌29．3％，乳腺癌13．3％，宫颈癌21．7％；轻度贫血83．5％，中度贫血15．7％，重度贫血0．8％。治疗后306例发生贫血，贫血总发生率68．0％，其中肺癌82．9％，胃癌77．6％，大肠癌80％，乳腺癌47．8％，宫颈癌50％；轻度贫血50．7％，中度贫血39．5％，重度贫血7．5％，危重度贫血2．3％。治疗前后血红蛋白的自身对照有统计学意义（P=0．000）。治疗前后贫血形态学分类均以正细胞性贫血为主，肺癌患者治疗后红细胞大小不均的比例显著增加。结论：抗肿瘤治疗会进一步加重贫血的发生率和严重程度。

人早幼粒细胞cDNA文库的构建及其鉴定

目的:构建人早幼粒细胞HL60的cDNA文库,阐明文库内相关基因在急性早幼粒细胞白血病(APL)发生发展中的相关机制。方法:采用Trizol法提取HL60细胞总RNA,离心柱法分离纯化样本中的mRNA,逆转录PCR法合成cDNA第一链,酶促法直接合成cDNA第二链,胶回收目的长度的cDNA片段后将其与pPR3-N载体连接,通过同源重组方法在酵母Y187菌株中构建人早幼粒细胞cDNA文库。将培养的菌液涂布于LB平板进行库容量鉴定,PCR法鉴定插入片段大小及分布。结果:提取到的HL60细胞RNA条带清晰无降解且弥散度低,以纯化后的细胞mRNA为模板成功合成cDNA,经胶回收cDNA片段后顺利将其与pPR3-N载体连接。将重组载体转化至酵母菌株Y187,通过同源重组方法在菌株中成功构建人早幼粒细胞cDNA文库。在原始电转化菌稀释100倍后取10μL涂板,共长约250个克隆子,库容量为2.5×10^6CFU·mL^-1,转化后原始菌液共计5mL,总库容量为1.25×10^7CFU。文库的插入片段电泳检测,平均插入片段大于1200bp,阳性率为100%。结论:成功构建人早幼粒细胞的cDNA文库,为白血病的发病机制及治疗机制的研究奠定了基础。

术前PLR、NLR与喉鳞状细胞癌预后的相关性分析

目的观察喉鳞状细胞癌患者术前中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、血小板与淋巴细胞比值(PLR)对其预后的影响及相关性分析。方法回顾性分析2008年12月至2015年10月云南省肿瘤医院头颈外科收治的经手术治疗的151例喉鳞状细胞癌患者的临床资料。收集患者术前最近一次全血细胞计数的参数并计算NLR、PLR值及其最佳临界值。将上述相关参数引入Cox比例回归模型,分析影响喉鳞状细胞癌预后的危险因素及与总生存时间的关系,并分析喉鳞状细胞癌患者中NLR、PLR与白细胞介素6(IL-6)的相关性。结果对于喉鳞状细胞癌患者术后生存,单因素及多因素的Cox回归分析显示,白细胞计数、血小板计数、中性粒细胞计数可作为其危险因素(HR=1.13,95%CI:1.04~1.24;HR=1.003,95%CI:1.000~1.007;HR=1.24,95%CI:1.14~1.35;均P<0.05),淋巴细胞可作为其保护性因素(HR=0.51,95%CI:0.36~0.73,P<0.001)。NLR及PLR高低是喉鳞状细胞癌预后的独立影响因子[HR=3.01,95%CI:1.69~5.36;HR=1.98,95%CI:1.07~3.65;均P<0.05]。IL-6水平与高NLR、PLR的相关系数分别为0.67、0.34。结论术前NLR、PLR可作为影响喉鳞状细胞癌患者术后生存的独立因素,对喉鳞状细胞癌的预后评估具有重要意义。

基于高通量芯片对小儿急性髓系白血病的生物信息学分析

目的:通过生物信息学工具筛选小儿急性髓系白血病(AML)相关的差异表达基因(DEGs),探讨小儿AML的核心基因并阐明其发病机制。方法:从基因表达数据库(GEO)下载符合本研究要求的小儿AML的转录组数据,采用基因表达分析工具(GEO2R)进行DEGs的筛选。利用基因本体功能注释(GO)及京都基因与基因组百科全书(KEGG)分析DEGs功能及通路富集情况;利用STRING数据库构建蛋白质互作网络(PPI)并利用Cytoscape软件及插件iRegulon筛选相关的核心基因(Hub genes)及转录因子,通过生物技术信息基因云(GCBI)在线数据库分析前5位的核心基因。结果:本研究共筛选出600个DEGs,其中407个基因上调,193个基因下调。GO分析,相关的DEGs主要参与细胞成分的组成,包括核浆、细胞质、核膜和核斑点。KEGG分析,DEGs主要在肿瘤坏死因子(TNF)、细胞因子受体相互作用及Jak激酶/信号转导与转录激活子(Jak-STAT)信号通路中富集。通过STRING数据库及Cytoscape软件共筛选出甲酰肽受体2(FPR2)、磷酸肌醇3激酶调节亚单位1(PIK3R1)、E1A结合蛋白p300(EP300)、热休克蛋白90α家族(HSP90AA1)和NRAS原癌基因(NRAS)等前20个连接度最高的核心基因,其中EP300、HSP90AA1和NRAS参与了白血病的发生发展。iRegulon共筛选出TP63、NFE2L1和TBX等55个作用于Hub基因的转录因子。结论:筛选出的核心基因和转录因子可能参与小儿AML的发生发展,并可能成为小儿AML的治疗新靶点。

术前NLR、PLR、RDW与喉癌患者临床特征的关系

目的分析中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、血小板计数(PLT)与淋巴细胞比值(PLR)、红细胞分布宽度(RDW)与喉鳞状细胞癌间的关系。方法回顾性分析2012年12月至2017年12月该院头颈外科收治的经手术治疗的患者60例,临床病理被确诊为喉鳞状细胞癌。分别检测患者术前最近一次全血细胞分析的参数,包括血红蛋白(Hb)、白细胞计数(WBC)、中性粒细胞绝对值(NEU)、淋巴细胞绝对值(LYMPH)、PLT、平均血小板体积(MPV)、红细胞平均体积(MCV)、血小板分布宽度(PDW)和RDW,计算NLR和PLR值。根据ROC曲线,同时兼顾敏感性和特异性,分为低NLR组(NLR<2.04)和高NLR组(NLR≥2.04);高PLR组(PLR≥120.32)和低PLR组(PLR<120.32);高RDW组(RDW≥14.05fL)和低RDW组(RDW<14.05fL)。比较各组术前比值在喉鳞状细胞癌中的变化及意义。结果各组患者年龄、性别、淋巴结转移方面比较,差异无统计学意义(P>0.05),而在肿瘤分期方面比较,高NLR组T3和T4期比率高于低NLR组T3和T4期比率(74.3% vs.44.0%),差异有统计学意义(P=0.017)。结论术前NLR>2.04提示喉癌患者分期较晚,预后不良。喉鳞状细胞癌的分期越高,PLR值越大。

PGⅠ、PGⅡ、CEA和CA199联合检测胃癌诊断中的价值

目的探讨血清Ⅰ型胃蛋白酶原(PGⅠ)、Ⅱ型胃蛋白酶原(PGⅡ)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原199(CA199)联合检测对于胃癌诊断的价值。方法选取该院经病理学检查确诊的胃癌患者80例(病例组)、选取体检健康者80例作为对照组,收集时间2016年1月至2017年1月,检测两组血清中PGⅠ、PGⅡ、CEA和CA199水平,并绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析并比较4种指标单独及联合检测诊断胃癌的效能。结果病例组的血清中PGⅠ和PGⅡ水平较对照组明显降低(P<0.05),CEA和CA199水平则显著地高于对照组(P<0.05);PGⅠ诊断胃癌的灵敏度、特异度和ROC的曲线下面积(AUC)分别为33.96%、32.14%和0.648;PGⅡ为32.14%、87.64%和0.627;CEA分别为36.77%、78.96%和0.657;CA199分别为42.05%、81.55%和0.684;血清中PGⅠ、PGⅡ、CEA、CA199联合检测分别为82.64%%、88.14%和0.869。结论血清中PGⅠ、PGⅡ、CEA和CA199联合检测对于诊断胃癌具有一定的临床价值。

人早幼粒细胞cDNA文库中与GINS2发生相互作用靶蛋白的筛选和鉴定

目的:采用酵母双杂交系统筛选与人GINS2编码蛋白发生相互作用的靶蛋白,阐明其在急性早幼粒细胞白血病(APL)中的致病信号及相关机制。方法:采用热激法将诱饵质粒pGBKT7-GINS2与人早幼粒细胞cDNA文库质粒共同转化至酵母AH109感受态细胞中,筛选与GINS2编码蛋白相互作用的文库蛋白。利用多重报告基因检测和DNA测序对编码互作蛋白的阳性克隆进行生物信息学分析。结果:成功从文库中筛选到15个初始阳性克隆,其中10个能激活腺苷酸琥珀酸合成酶2(ADE2)和组氨醇氨基盐转移酶3(HIS3)报告基因,13个能激活β-半乳糖苷酶(LacZ)报告基因。对10个能在SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade培养基中生长的阳性克隆行DNA测序和基本局部比对搜索工具(BLAST)比对分析后,除8和9号测序失败,其余8个阳性克隆分属8种不同的蛋白编码基因,分别是RNA结合基序蛋白39(RBM39)、泛素样修饰因子激活酶1(UBA1)、金属硫蛋白2(MT2A)、线粒体钙离子摄入蛋白1(MICU1)、N-乙基马来酰亚胺敏感性融合蛋白辅因子(NSFL1C)、脂肪酰基辅酶a还原酶1(FAR1)、双特异性磷酸酶1(DUSP1)和细胞表面抗原14(CD14)。结论:成功筛选到与GINS2发生相互作用的8个功能蛋白,推测目的蛋白可能在细胞损伤、转录调控和增殖代谢等方面发挥重要作用。

32例纵隔畸胎瘤患者临床分析

畸胎瘤起源于潜在多功能的原始胚细胞,发生部位与胚生学体腔的中线前轴或中线旁区有关。畸胎瘤的最常见发生部位在卵巢或睾丸。近年来报道的性腺外畸胎瘤的病例少见,往往是以个案的形式报道,手术前容易被误诊为其他肿瘤。纵隔畸胎瘤患者早期可无症状,亦可表现为胸闷、胸骨后疼痛、咳嗽、咳痰、咯血等不适,这些临床表现缺乏特异性。

人GINS2基因酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活检测

目的构建人GINS2基因酵母双杂交诱饵质粒,并进行自激活检测。方法根据GenBank中登录的GINS2基因编码区序列(NM016095)设计引物,以pCDNA3.1-GINS2质粒为模板进行PCR扩增,将PCR产物克隆至诱饵载体pGBKT7上,构建诱饵质粒pGBKT7-GINS2。将鉴定正确的诱饵质粒及对照质粒共同转化至酵母细胞AH109中培养,Western blot法检测诱饵蛋白GINS2的表达,随机挑取6个菌落,进行His3、Ade2及LacZ报告基因的自激活效应检测。结果经双酶切及测序鉴定证明诱饵质粒pGBKT7-GINS2构建正确。诱饵蛋白GINS2相对分子质量为21000,可在AH109酵母细胞中稳定表达。诱饵质粒转化的酵母细胞在SD/-Trp/-Leu缺陷平板生长,在SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade缺陷平板上不生长,表明报告基因His、Ade2未被激活,报告基因LacZ检测结果与阴性对照相同,表明诱饵蛋白GINS2不存在自激活。结论成功构建了人GINS2基因酵母双杂交诱饵质粒,其表达蛋白对酵母AH109细胞无毒性,也无自激活现象,可用于后续蛋白筛选试验。