铁皮石斛多糖分离纯化及其药理活性研究进展

铁皮石斛是我国名贵的药食同源资源,具有较高的保健价值。铁皮石斛多糖是铁皮石斛中重要的活性成分之一。本文对铁皮石斛多糖的提取、分离纯化、分子量、单糖组成进行总结归纳,并对铁皮石斛多糖的降血糖及改善糖尿病并发症、保护胃黏膜损伤、抗肿瘤、调节微生态的最新研究进展进行综述。针对目前铁皮石斛多糖含量影响因素较多、分离纯化重复性差、结构分析不够清晰、构效关系的研究不够深入等现状,提出未来研究的展望,以期为铁皮石斛的开发利用提供有益参考。

两种克班宁长循环纳米粒的急性毒性与抗心律失常作用研究

目的对两种经PEG修饰载体材料(PELGE、PLGA)制备的克班宁(Crebanine,Cre)长循环纳米粒(PELGE-Cre-NPs、PLGA-Cre-NPs)进行急性毒性试验与抗心律失常作用研究,探讨其增效减毒的效果。方法采用Bliss法对PELGE-Cre-NPs与PLGA-Cre-NPs进行小鼠急性毒性试验,求半数致死量(LD_(50));采用氯仿诱发小鼠心室纤颤模型、氯化钡(BaCl_(2))及乌头碱致心律失常大鼠模型对两种纳米粒进行药效作用考察。结果PLGA-Cre-NPs与PELGE-Cre-NPs静脉注射的LD_(50)分别为13.619 mg·kg^(-1)与14.839 mg·kg^(-1),均比克班宁静脉注射的LD_(50)(9.382 mg·kg^(-1))明显增加。与模型对照组比较,两种纳米粒均能明显对抗氯仿诱发的小鼠心室纤颤、对抗氯化钡诱导的大鼠心律失常,明显提高乌头碱诱发大鼠室性早搏(VPB)、室性心动过速(VT)、心室纤颤(VF)及心脏停搏(CA)的阈剂量(P<0.05,P<0.01,P<0.001)。与克班宁(5 mg·kg^(-1))实验组比较,PELGE-Cre-NPs高剂量(5 mg·kg^(-1))组恢复窦性心律维持时间≥5 min的鼠数量明显增多(P<0.05),心脏停搏乌头碱阈剂量明显提高(P<0.05)。结论两种材料纳米粒PLGA-Cre-NPs与PELGE-Cre-NPs的毒性较克班宁小,并具有较明显的抗心律失常活性,且作用效果强于游离克班宁,达到增效减毒作用。

柯里拉京调节自噬影响巨噬细胞源性泡沫细胞形成的研究

目的:探讨柯里拉京(Cor)通过自噬抑制巨噬细胞源性泡沫细胞的形成及其机制。方法:以THP-1和J774A.1巨噬细胞为研究对象,分别设正常组、泡沫细胞模型组(ox-LDL+LPS组/ox-LDL组)和不同浓度Cor处理组(Cor组)。油红O染色观察各组细胞内脂滴沉积情况,ELISA法检测各组细胞内总胆固醇(TC)和游离胆固醇(FC)含量及细胞上清液白细胞介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、IL-1β、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达;分子对接建模预测Cor与自噬和炎症相关靶点的作用;Western blot检测各组细胞中自噬和炎症相关蛋白的表达水平,试剂盒检测caspase-1活性。结果:与模型组比较,Cor中、高剂量组可显著减少THP-1和J774A.1两种巨噬细胞内的红色脂滴;Cor可减少细胞脂滴沉积,呈浓度依赖性降低胆固醇酯(CE)/TC(P<0.05或P<0.01),显著降低IL-6、MCP-1、IL-1β和TNF-α的含量(P<0.01);Cor与受体哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的结合亲和力最好,最佳结合亲和力是−9.8 kcal/mol;同时Cor高剂量组可显著上调磷酸化AMP活化蛋白激酶(p-AMPK)/AMPK的蛋白表达水平(P<0.01),显著下调磷酸化mTOR(p-mTOR)/mTOR、P62、核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)、含caspase募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和caspase-1的蛋白表达水平(P<0.05或P<0.01),beclin-1和LC3的蛋白表达无显著性差异(P>0.05);此外,Cor也显著抑制了caspase-1的活性(P<0.05)。结论:Cor可以抑制THP-1巨噬源性泡沫细胞的炎症反应,其机制可能与抑制mTOR,激活自噬有关。

天然纯鲜粉葛饮料通过TLR4/MyD88/NF-κB通路抑制小鼠酒精性肝损伤研究

目的:探讨超高温瞬时灭菌全新工艺制备的无化学添加剂的天然纯鲜粉葛饮料对酒精性肝损伤小鼠的保护作用以及对TLR4/MyD88/NF-κB通路的影响。方法:采用高效液相色谱法对鲜粉葛饮料中异黄酮成分进行含量测定。采取43%酒精灌胃的方法建立小鼠酒精性肝损伤模型。检测血清中谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)及炎症因子水平;苏木素-伊红(HE)染色分析各组肝脏病理形态变化;免疫组化检测肝组织Toll样受体4(TLR4)、髓样分化分子88(MyD88)、核转录因子(NF-κB p65)的表达。结果:天然纯鲜粉葛饮料中检测到6种异黄酮成分,其中葛根素含量最高,达到622.6μg/mL。天然纯鲜粉葛饮料预处理能降低小鼠体内两种血清转氨酶含量水平(P<0.01);饮料高剂量组能降低血清中TG、TC、LDL、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量水平(P<0.001),提高HDL含量水平(P<0.05)。病理切片结果显示天然纯鲜粉葛饮料能有效改善小鼠肝组织出现的脂肪空泡,胞质疏松,细胞核排列不规则等情况,并抑制小鼠肝组织中TLR4、MyD88、NF-κB p65蛋白的表达(P<0.01,P<0.001)。结论:无化学添加剂的天然纯鲜粉葛饮料可减少小鼠肝脏内脂质沉积和降低炎症因子水平,对酒精性肝病具有一定的预防保护作用,其机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路的激活有关。

青刺果油纳米乳的制备及其表征

通过水相滴定法及伪三元相图法初步筛选青刺果油纳米乳配方,确定以PEG-20氢化蓖麻油(CO-20)为乳化剂,聚乙二醇-200(PEG-200)为助乳化剂,再以平均粒径为评价指标,采用Box-Behnken设计-响应面法优化配方。结果表明,最佳配方下所得青刺果油纳米乳的平均粒径为31.58 nm、多分散系数(polydispersity,PDI)为0.18、Zeta电位为-6.38 mV,在透射电子显微镜下其形态呈均一球型,具有离心稳定性、稀释稳定性及温度稳定性,为青刺果油纳米乳的制备提供了参考。

不同产地干、鲜粉葛HPLC指纹图谱及6种成分含量测定

目的:比较不同产地干、鲜粉葛中化学成分及对其中葛根素、3′-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、大豆苷、染料木苷和大豆苷元6种异黄酮类成分的含量进行测定。方法:选用Symmetry C 18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),甲醇-0.2%冰乙酸水溶液为流动相进行梯度洗脱,紫外检测波长为250 nm。利用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2.0版)”软件处理色谱数据,建立了粉葛指纹图谱,同时进行相似度评价。另外,采用HPLC对6种成分进行了含量测定。结果:建立了粉葛的指纹图谱,共标定了26个共有峰,指认了9种成分,分别是3′-羟基葛根素、葛根素、3′-甲氧基葛根素、葛根素芹菜糖苷、大豆苷、染料木苷、大豆苷元、染料木素及芒柄花素。对其中6种指认的成分进行含量测定,发现各地葛根素含量最多。各地鲜品葛根素平均含量为4.48 mg/g,各产地含量排名前三依次是:文山>丽江>红河,各产地6种异黄酮总含量排名前三依次是:红河>文山>丽江;不同产地6种异黄酮总含量均是鲜品大于烘干粉葛。结论:不同产地粉葛干、鲜的化学成分较相似,但含量存在明显差异,且鲜品粉葛中6种异黄酮总含量高于干品,可为粉葛资源的相关开发利用提供有效的科学依据。