mTOR抑制剂对博来霉素诱导小鼠肺纤维化的作用研究

目的探讨mTOR抑制剂雷帕霉素在博来霉素(BLM)诱导的小鼠肺纤维化中的治疗效果。方法对60只C57BL/6小鼠行气管内滴注博来霉素诱导的肺纤维化模型。在纤维化模型前5天,每天连续腹腔注射雷帕霉素预处理5天。将小鼠随机分为两组:腹腔注射赋形剂的对照组和腹腔注射雷帕霉素的治疗组。在造模第21天取小鼠肺组织标本用Western blotting方法检测mTOR信号通路的变化;同时用HE和Masson染色分析肺组织形态学变化;运用Ashcroft评分及羧脯氨酸含量评估肺纤维化程度。结果雷帕霉素抑制了纤维化小鼠肺组织内mTOR的活化。赋形剂组与雷帕霉素治疗组的肺损伤程度和纤维化变化无差异。两组的Ashcroft评分和羧脯氨酸含量差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 mTOR抑制剂雷帕霉素预处理未能缓解博来霉素诱导的小鼠肺纤维化病变。

氯喹通过调节自噬在EGFR-TKI耐药肺癌细胞系中的机制研究

目的探讨氯喹干预表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂（EGFR-TKI）肺癌耐药细胞系的作用机制。方法选取EGFR-TKI耐药的3种细胞系A549、H1960、H1975及EGFR—TKI敏感的细胞系PC9，采用CellCounting Kit-8（CCK8）法检测4种细胞系的生长活性，免疫蛋白印迹（Westernblot）检测各细胞自噬蛋白表达量及哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）活性。采用EGFR—TKI特罗凯及自噬溶酶体抑制剂氯喹干预细胞生长，观察细胞活性及自噬表达变化。结果Westernblot检测4种细胞系磷酸化的s6蛋白表达阳性；伴有EGFR—TKI耐药的A549、H1650、H1975细胞内自噬蛋白P62相对表达量减少，EGFR—TKI敏感的肺癌细胞PC9中P62的相对表达量增多。CCK8法检测表明特罗凯可明显抑制PC9细胞的生长活性，对A549、H1650、H1975细胞系的生长则无明显抑制作用；进一步采用mTOR抑制剂Torin2作用于肺癌细胞，发现Torin2对PC9的生长抑制作用较明显，对其他3种细胞的生长无明显抑制作用。采用氯喹作用于肺癌4种细胞系，Westernblot检测其未显著改变磷酸化S6蛋白的相对表达量，但显著抑制4种细胞系的生长活性，并以PC9与A549的抑制作用尤为明显。CCK8法检测表明氯喹与特罗凯的联合作用明显抑制PC9、A549和H1975的增殖，但对H1650的生长抑制作用较弱。结论EGFR—TKI耐药细胞系中存在mTOR活化并伴自噬表达增强，但采用Torin2未改变自噬表达及肺癌细胞生长活性。氯喹能明显抑制EGFR—TKI肺癌耐药细胞系的生长活性，氯喹联合EGRI—TKI能协同抑制细胞生长，自噬抑制剂联合EGFRTKI可作为未来克服EGFR—TKI耐药的治疗方案之一。

mTOR信号通路在博来霉素诱导小鼠肺纤维化中的作用机制研究

目的探讨mTOR信号通路在博来霉素诱导小鼠肺纤维化中的作用机制。方法将60只C57BL/6小鼠随机分为对照组和实验组。对实验组气管内滴注博来霉素(2.5 mg/kg)建立肺纤维化模型,对照组在相同条件下注入等体积0.9%氯化钠。在造模第21 d取小鼠肺组织标本行HE和Masson染色分析肺组织形态学变化,同时对肺泡灌洗液行细胞总数和分类分析;运用Ashcroft评分评估肺纤维化程度;Westen blot方法检测mTOR信号通路的变化;RT-PCR法检测胶原蛋白1(Collagen1)和胶原蛋白3(Collagen3)mRNA的表达水平。结果实验组与对照组相比,肺泡炎和肺纤维化程度明显加重,肺组织内充填大量炎细胞及纤维病灶。实验组Ashcroft评分较对照组显著升高(P<0.05),同时mTOR信号通路在肺组织内明显活化并伴有Collagen1和Collagen3 mRNA水平增加。结论 mTOR信号通路的异常活化促进了肺纤维化形成。