构建口腔医学生临床技能实践教学体系的研究

运用口腔临床医学实用型人才的教学模式对井冈山大学医学院5个班共262名学生进行口腔临床技能教学效果的研究,形成了一整套的临床技能培训与考核体系教学改革经验。口腔医学专科教学新模式逐渐趋于成熟,锻炼了学生的实践能力、综合能力、交流能力和社区工作能力,学生的临床技能获得了患者和社会的高度评价,进一步推动了口腔医学的教育改革。

重组pcDNA3.1-HEGF基因真核表达载体的构建

目的采用基因工程技术克隆HEGF结构基因,并构建HEGF基因真核表达载体。方法查询Pubmed上的HEGF基因的序列,并设计合适的酶切位点,将HEGF基因定向克隆到真核表达载体pc DNA3.1中,完成HEGF真核表达载体构建,对HEGF基因序列测定及分析。结果经酶切将HEGF基因定向克隆到真核表达载体pc DNA3.1中,序列分析结果表明,pc DNA3.1-HEGF基因序列与Gen Bank HEGF序列相比氨基酸编码高度类似。结论成功构建了HEGF基因真核表达载体。

小鼠精原干细胞体外培养诱导成骨的能力

背景:精原干细胞具有自我更新及多向分化潜能,并可将其体外定向诱导为特异性细胞,提示精原干细胞亦可能具有向成骨细胞转化的可能性,但有关这方面的研究尚未见报道。目的:观察小鼠精原干细胞在体外成骨细胞培养条件下的生物学特征变化。方法:取生后15-20 d小鼠胫骨骨髓,分离、培养骨髓基质细胞,5 d后丝裂霉素C处理制备成饲养层;取生后七至八天小鼠睾丸,经酶消化后制成单细胞悬液并接种于饲养层上。3 d后实验组和对照组分别用条件培养液和基本培养液进行诱导培养,通过倒置相差显微镜观察培养细胞生长状况及形态变化,并结合碱性磷酸酶染色、Ⅰ型胶原免疫荧光染色等方法进行结果检测。结果与结论:实验组精原干细胞在条件培养液中较对照组细胞贴壁生长快,条件培养3-6 d后见细胞生长迅速,呈集落样增长,细胞立体感增强,细胞团、簇的大小继续增加,细胞外基质增多,但未见明显细胞间桥。培养15 d后,对两组细胞进行碱性磷酸酶染色可见胞质、胞膜染为黑色,呈阳性。在荧光显微镜下可见实验组细胞浆内出现绿色荧光,呈阳性荧光反应;对照组细胞呈阴性反应,说明实验组细胞Ⅰ型胶原染色阳性,这与成骨细胞的生物学特性相似。提示精原干细胞在一定的诱导条件下具有成骨能力,有望为骨组织工程学研究提供种子细胞。

人牙髓干细胞的体外分离培养及表面标志鉴定

目的从人正畸牙牙髓提取牙髓干细胞,并对其表面标志鉴定进行研究。方法以经典的酶联合消化细胞原代培养方法培养牙髓干细胞,镜下观察细胞,并以流式分析仪检测STRO-1、CD34、CD45和CD146的鉴定方法对牙髓干细胞进行鉴定。结果倒置相差显微镜下观察可见细胞呈回形状或椭圆形,细胞较小,排列紧密,集落边缘细胞呈梭形,细胞大且较长,流式细胞术检测牙髓干细胞表面标志可见Stro-1,CD34、CD45和CD146为阴性。结论经典的酶联合消化细胞原代培养方法培养牙髓干细胞取得了较好的效果,可以通过检测STRO-1、CD34、CD45和CD146的鉴定方法对牙髓干细胞进行鉴定。

p38-MAPK信号通路对牙髓干细胞生物性能的影响

牙髓干细胞（DPSC）作为一种成体干细胞,在牙髓组织损伤的自我修复过程中起重要作用,牙髓和牙本质组织损伤修复的过程受到多种细胞外基质分子网络调控^（[1]）。DPSC在增殖、分化、迁移、凋亡及细胞周期的运行过程中,DPSC内的一些信号通路被激活,包括细胞外调节蛋白激酶（ERK1/2）信号通路、c-Jun氨基末端激酶（JNK）信号通路.

Notch配体Delta-1基因真核表达载体的构建

目的利用基因工程技术克隆Delta-1结构基因,构建Delta-1基因真核表达载体。方法通过Genbank公布的Delta-1基因的序列分析,设计合适的酶切位点,将Delta-1基因定向克隆到真核表达载体pc DNA3.1中,完成Delta-1真核表达载体构建,并用生物学软件对Delta-1基因序列测定及分析。结果经酶切将Delta-1基因定向克隆到真核表达载体pc DNA3.1中,序列分析结果表明,pc DNA3.1-Delta-1基因序列与Genbank Delta-1序列相比,氨基酸编码是相同的。结论成功构建了Delta-1基因真核表达载体。

变形链球菌LuxS基因缺失株对生物膜结构影响的研究

目的研究变形链球菌标准株和LuxS基因缺失菌株变形链球菌在离体模型上生物膜形成的差异变化情况。方法收集临床上因正畸而拔除的前磨牙或无龋坏的第三磨牙,行菌株复苏增菌及变形链球菌鉴定,最后将标本置于扫描电镜下观察。结果变形链球菌标准菌株和LuxS基因缺失菌株在24 h形成的生物膜有明显差异,经观察发现LuxS基因缺失菌株较标准菌稀疏。结论口腔变形链球菌可通过LuxS基因介导的菌种密度感应信号来影响口腔生物膜的形成。

生物蛋白胶-牙髓干细胞构建三维支架的生物相容性

目的构建牙髓干细胞-生物蛋白胶支架的三维培养体系,研究牙髓干细胞在生物蛋白胶中的生物相容性。方法体外复苏牙髓干细胞并复合进入生物蛋白胶中培养,通过CCK-8检测提取液对细胞增长情况的影响,并通过细胞的矿化情况进一步分析生物蛋白胶的生物特性。结果冻存的牙髓干细胞经免疫荧光染色具备干细胞的特性,细胞包埋于生物蛋白胶内可见三维培养下细胞状态更加伸展,更加模拟自然生长,细胞形态典型,2 w后生物蛋白胶可完全降解,牙髓干细胞矿化诱导结果较典型。结论生物蛋白胶是一种适宜的组织工程牙髓种子细胞载体。

pCDNA3.1-HEGF真核表达质粒转染牙髓干细胞的研究

目的将人表皮生长因子基因转染入牙髓干细胞,并检测其蛋白的表达,为下一步的牙髓干细胞的增殖和分化取得前期的实验基础。方法利用前期实验构建的pcDNA3.1-HEGF,经脂质体转染质粒pcDNA3.1-HEGF入牙髓干细胞,转基因细胞培养48h后作Q-PCR和Western-blot分析。结果成功把pCDNA3.1-HEGF真核表达质粒转染到牙髓干细胞,而且通过检测其表达增强,转hEGF基因细胞经Q-PCR检测,与对照组相比,该基因上调表达了6-21倍,扩增反应产物溶解温度较均一,目的基因具有很好的特异性,反应体系良好,Western-blot检测到HEGF表达明显升高。结论质粒pcDNA3.1-HEGF在脂质体介导下成功转染牙髓干细胞,而且表达增强。