HSV-TK基因和IL-12基因治疗裸鼠鼻咽癌的实验研究

目的:研究腺病毒介导的KDR启动子-单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)系统(AdKDR-tk)联合白细胞介素12基因对裸鼠鼻咽癌的治疗作用.方法:建立鼻咽癌裸鼠模型,将36只成瘤鼠随机分成IL-12基因组、AdKDR-tk/GCV组、IL-12基因+AdKDR-TK/GCV组和生理盐水/GCV组(对照组),每组9只.采用瘤内注射分别给予相对应的重组腺病毒液及生理盐水,24h后重复注射1次.次日起连续10d每天ipGCV1次,100mg/kg.治疗结束后处死裸鼠,检测肿瘤质量、组织形态学变化及肿瘤微血管密度.结果:IL-12基因组裸鼠鼻咽癌瘤体质量(1.82±0.78)g及肿瘤微血管密度(15.54±3.46)个/mm3和AdKDR-tk/GCV组[分别为(1.61±0.61)g,(10.69±4.12)个/mm3]与IL-12基因+AdKDR-TK/GCV组[分别为(1.04±0.52)g,(6.53±1.61)个/mm3]相比差异有显著性(P<0.05);IL-12基因组,AdKDR-tk/GCV组及IL-12基因+AdKDR-TK/GCV组与生理盐水/GCV组[分别为(2.52±1.18)g,(22.78±5.12)个/mm3]比较也存在显著差异(P<0.05).结论:HSV-TK基因和IL-12基因治疗可抑制裸鼠鼻咽癌皮下移植瘤的生长,提高机体的抗肿瘤免疫应答,两者联合运用可产生协同效应,为鼻咽癌的治疗提供新的方法.

转染T-bet鼻咽癌细胞肿瘤疫苗的体外抗肿瘤效应中干扰素-γ的表达

目的研究转染T-bet鼻咽癌细胞肿瘤疫苗的体外抗肿瘤效果。方法构建转染T-bet鼻咽癌细胞肿瘤疫苗,体外培养鼻咽癌患者的外周血淋巴细胞,用肿瘤疫苗刺激后ELISA检测上清中细胞因子干扰素(IFN)-γ的分泌量。结果淋巴细胞+TCV-T-bet组细胞因IFN-γ的含量24 h、48 h、72 h与淋巴细胞+培养液组及淋巴细胞+TCV-CNE-2组相比差异显著(P<0.01)。结论表达T-bet基因的人鼻咽癌细胞CNE-2肿瘤疫苗在体外能够诱导有效的抗肿瘤免疫反应。

腺病毒介导的KDR-HSV-tk系统对血管内皮细胞的杀伤作用及旁观者效应

目的研究腺病毒介导的KDR-HSV-tk系统对血管内皮细胞的杀伤作用及旁杀效应。方法体外构建受KDR启动子和巨细胞病毒(CMV)启动子调控并可表达HSV-tk基因的Ad KDR-HSV-tk和Ad CMV-HSV-tk,经293细胞包装、扩增后,分别感染表达KDR的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)和不表达KDR的人鼻咽癌细胞CNE-2,建立HUVEC/tk及CNE-2/tk,观察丙氧鸟苷(GCV)处理后HUVEC杀伤率及旁观者效应。结果受感染的HUVEC和CNE-2细胞中均有绿色荧光蛋白的表达。在感染复数(MOI)为100的条件下,GCV浓度由0增至50 mg/L时含Ad KDRHSV-tk的HUVEC和CNE-2细胞存活率从100%分别降至(23.1±3.9)%和(69.8±3.1)%(P<0.01);感染Ad CMV-HSV-tk的HUVEC和CNE-2细胞存活率从100%分别降至(13.9±2.9)%和(15.7±5.2)%(P<0.05);HUVEC/tk细胞对GCV的敏感性明显高于亲代HUVEC细胞,HUVEC+HUVEC/tk混合细胞的生存率随HUVEC/tk比例的增加而下降,说明Ad KDR-HSV-tk/GCV系统不但能杀伤转染tk基因的HUVEC,也能杀伤未导入转染tk基因的HUVEC细胞,存在明显的旁观者效应。结论腺病毒介导的KDR-HSV-tk/GCV系统对血管内皮细胞具有特异的杀伤作用及旁观者效应,为抗肿瘤血管靶向治疗奠定了基础。

重组IL-12逆转录病毒转染树突细胞体外对鼻咽癌细胞的杀伤作用

目的体外实验评估重组白细胞介素(IL)-12逆转录病毒转染树突细胞对鼻咽癌细胞的杀伤作用。方法构建重组IL-12重组逆转录病毒,体外转染树突细胞(DC),经培养后收集上清液,检测IL-12、干扰素-γ(IFN)的分泌水平。以鼻咽癌细胞CNE-2为靶细胞,进行细胞毒T淋巴细胞(CTL)细胞毒活性测定。结果成功构建含有m IL-12的重组逆转录病毒;IL-12基因修饰DC可以显著诱导的大量IL-12和IFN-γ分泌,与未转染DC组比较,差异有显著意义(P<0.01);DC-IL-12诱导的CTL及其上清液对鼻咽癌细胞CNE-2均有显著杀伤作用,与未转染DC组相比较差别有显著(P<0.01)。结论 IL-12基因修饰树突细胞可显著诱导大量IFN-γ分泌并增强其诱导特异性CTL对肿瘤的杀伤效能。

中医药治疗鼻咽癌放疗中口、咽黏膜副反应的疗效观察

目的探讨中医药治疗鼻咽癌放疗中口、咽黏膜副反应的疗效。方法68例鼻咽癌患者随机分两组,每组34例。治疗组放疗期间配合中医药治疗,对照组用朵贝氏液治疗。结果治疗组有效率为82.3%,对照组总有效率为44.1%,两组有显著性差异(P<0.05)。结论中医药对鼻咽癌放疗中口、咽黏膜副反应有显著疗效。