基因芯片用于检测β地中海贫血

目的探讨基因芯片诊断β地中海贫血的方法。方法抽提样品基因组DNA,经聚合酶链反应后,进行荧光标记及杂交,扫描芯片荧光信号图像,将分析的结果与原基因类型进行对照。结果在40例被检样品中,正常个体4例,β地贫杂合子29例,双重杂合子或纯合子7例。结论基因芯片法能同时快速、准确地筛查多种β地中海贫血。

深圳地区结核分枝杆菌耐利福平株rpoB基因突变分布

目的 :调查深圳地区结核分枝杆菌耐利福平 (RFP)株rpoB基因突变的分布情况 ,建立结核分枝杆菌耐药基因快速检测的方法。方法 :对 5 5株结核分枝杆菌临床分离株的rpoB基因 2 80个碱基 (包括其核心区 75个碱基 )应用PCR 直接测序法 (PCR DS)测定序列 ,其中耐利福平株 5 1株 ,敏感株 4株。结果 :4株敏感株无突变 ,92 2 % (47/ 5 1)耐利福平临床分离株存在rpoB基因突变。基因突变导致 5 31位氨基酸突变率为 4 1 2 % (2 1/ 5 1) ;导致 5 2 6位氨基酸突变率为 2 9 4 % (15 / 5 1) ;导致 5 16位氨基酸突变率为 13 7%(7/ 5 1)。联合突变发生率为 2 0 % (1/ 5 1)。未检测到发生缺失或插入碱基突变的菌株。结论 :深圳地区结核分枝杆菌耐利福平株发生rpoB基因突变最常见的是 5 31位丝氨酸、5 2 6位组氨酸和 5 16位天冬氨酸的基因突变 ,三者突变率之和为 84 3% (43/ 5 1)。PCR DS方法可快速测定结核分枝杆菌RFP耐药基因突变。

CS型血红蛋白H病复合β地中海贫血的实验研究

目的 探讨血红蛋白H病复合β地中海贫血 ( β 地贫 )的实验诊断。 方法 用血红蛋白电泳对患者作血红蛋白组份定量测定 ,红细胞形态观察协助鉴别诊断 ,PCR扩增作α与 β地贫基因分型 ,DNA测序用于检测αCS 基因突变位点。结果 先证者血红蛋白电泳检出微量HbBart’s与HbConstantSpring(HbCS) ,但未发现HbH带 ,常法PCR扩增仅检测 SEA基因与ⅣS Ⅱ 6 5 4位点突变双杂合子 ,DNA测序结果显示 ,无缺失的α珠蛋白基因上αCS 位点存在T→C突变 ,临床表现为血红蛋白H病。结论 血红蛋H病复合β 地贫时可检测不到HbH( β4 )区带。HbA2 的准确定量分析与红细胞形态的仔细观察有助于该病的分析。该病的发现 ,为认识我国地贫的高度异质性提供了新的资料 。

用反向斑点杂交法检测结核杆菌对链霉素和乙胺丁醇的耐药性

目的建立结核分支杆菌对链霉素（SM）和乙胺丁醇（EMB）耐药基因突变的快速检测方法。方法根据结核分支杆菌标准株H37Rv序列，自行设计针对rpsL和embB基因常见耐药突变的系列寡核苷酸探针，制成膜芯片，并对64例结核分支杆菌临床株的基因突变情况进行检测。结果在34株SM耐药菌中，有25株被检出在rpsL基因分析部位发生突变，检出率为73．5％（25／34），其中23株（67．6％）为第43位密码子AAG→AGG突变，2株（5．9％）为第88位密码子AAG→AGG突变；在32株EMB耐药菌中，有19株在embB基因分析部位发生突变，检出率为59．4％（19／32），其中12株（37．5％）为ATG→GTG突变；6株（18．8％）为ATG→ATA突变；1株（3．1％）为ATG-＊CTG突变。膜芯片检出的突变与基因测序结果一致。结论用膜芯片检测结核分支杆菌对链霉素和乙胺丁醇的耐药性，具有较高的特异性和敏感性，可作为常规药敏方法的补充，用于指导开展早期、有效的临床化疗。

结核分枝杆菌耐药基因rpoB.katG.inhA突变快速检测方法研究

目的通过PCR及芯片杂交技术平台,建立临床样品中结核分枝杆菌及耐药基因突变的快速诊断新方法。方法根据结核分支杆菌标准株H37Rv序列,我们设计了覆盖rpoB基因81个碱基高变区的5个正常探针和6个可以探测特定突变类型的突变探针,制作膜芯片,并检测临床样品中结核杆菌的基突变情况,以此来判断耐药结果。结果18个利福平培养耐药中的15个样品都在rpoB基因上检出有突变,利福平耐药突变检出率为83.0%(18/15);25个利福平敏感样品rpoB基因上都未检出突变。20个异烟肼培养耐药的样品中有16个在katG或inhA基因上检出有突变,异烟肼耐药突变检出率为80.0%(16/20);25个异烟肼敏感样品katG或inhA基因上都未检出突变。结论用膜芯片检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性,具有较高的特异性和敏感性,可用于临床结核杆菌耐药性检测。并具有快速、简便、敏感的特点。

DNA芯片快速检测耐利福平结核分枝杆菌rpoB基因突变

目的 开发快速检测耐利福平结核分枝杆菌 (结核菌 )rpoB基因突变的DNA芯片。方法 根据结核菌rpoB基因序列设计探针并制作基因芯片 ,从临床样品中分离出结核菌的基因组DNA ,PCR扩增含有rpoB基因突变位点的特异DNA片段 ,荧光标记后与芯片上含有的检测特异突变位点的寡核苷酸探针进行杂交 ,同时与DNA直接测序法测定序列比较。结果 35株耐利福平结核菌中有 91 4 % (32 / 35 )用直接测序法检测出存在rpoB基因突变 ,DNA芯片的检测效率为 71 4 % (2 5 / 35 )。结论 用DNA芯片检测结核菌对利福平的耐药性具有较高的特异性和敏感性 ,可用于临床结核菌耐药性检测。

DNA芯片联合检测耐利福平与异烟肼结核分枝杆菌及其临床应用

目的开发快速检测耐利福平与异烟肼结核分枝杆菌rpoB、katGi、nhA基因突变的DNA芯片。方法根据结核分枝杆菌rpoB、katGi、nhA基因序列设计探针并制作基因芯片,从临床样品中分离出结核分枝杆菌的基因组DNA,PCR扩增含有上述几个基因突变位点的特异DNA片段,并事先在PCR引物的5′端作生物素标记,然后与膜条芯片上的检测特异突变位点的寡核苷酸探针进行杂交,通过生物素-链霉亲和素-过氧化物酶体系显色,直接观察突变情况,以此来判断耐药结果。结果35个利福平和异烟肼单耐药或多药耐药的结核分枝杆菌中有82.9%用芯片法检出的结果与药敏培养法一致;其中利福平耐药样品突变检出率为100.0%;有20.0%异烟肼耐药的样品芯片未检出突变,可能是突变发生在芯片检测位点范围之外。结论用DNA芯片检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性,具有较高的特异性和敏感性,可用于临床结核分枝杆菌耐药性检测。