抗弧菌三联特异性卵黄抗体的制备与体外抑菌作用

【目的】制备抗弧菌三联特异性卵黄抗体,并研究其对创伤弧菌(Vibrio vulnificus)、河流弧菌(Vibrio fluvialis)和霍乱弧菌(Vibrio cholerae)的体外抑菌作用,为抗生素替代品的研发以及弧菌混合感染的防治提供参考。【方法】制备创伤弧菌、河流弧菌和霍乱弧菌三联灭活疫苗,免疫蛋鸡,制备特异性卵黄抗体(IgY),并检测IgY的效价、纯度和特异性。通过免疫荧光、扫描电镜和体外抑菌试验初步探究制备的三联特异性卵黄抗体对3种弧菌的体外抑菌效果。【结果】使用间接ELISA检测特异性IgY效价,分别以创伤弧菌、霍乱弧菌和河流弧菌作为抗原,特异性IgY效价峰值高达1∶51200,可持续4~5周。对水稀释-盐析分离纯化的IgY进行SDS-PAGE分析,可见IgY的重链和轻链,且蛋白杂带逐渐减少,纯度逐渐变高。免疫印迹分析发现,特异性IgY可以和抗原发生特异性结合,出现IgY的蛋白条带。免疫荧光试验结果表明,特异性IgY可以与3种弧菌发生特异性结合,出现明显的菌体凝集。扫描电镜观察发现,特异性IgY处理过的3种弧菌,菌体黏附,菌体细胞结构遭到破坏。体外抑菌试验发现,特异性IgY对3种弧菌的体外生长繁殖具有明显的抑制作用,抑菌效果随抗体用量增加而增强。【结论】本研究制备的抗弧菌三联特异性卵黄抗体对创伤弧菌、河流弧菌和霍乱弧菌有较强的抑制作用,在弧菌混合感染的防治和开发新型抗生素替代品方面具有很大的潜力。

贝莱斯芽孢杆菌LG37全基因组测序分析及无机氮代谢相关候选基因的筛选

前期研究发现贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)LG37可高效同化无机氮,但其机理尚不清楚。为解读其高效同化无机氮的机理,结合三代PacBio RS II和二代Illumina HiSeq 2000测序技术对贝莱斯芽孢杆菌LG37进行全基因组测序,在此基础上利用NR、KEGG、eggNOG、GO和CARD数据库进行序列注释、分析,并通过本地Blast+对无机氮代谢相关基因进行挖掘。测序结果表明:1)贝莱斯芽孢杆菌LG37的基因组为3929697 bp的环状染色体,GC含量为46.5%,包含3854个蛋白质编码基因、86个tRNA基因和27个rRNA基因。2)共筛选出无机氮代谢相关候选基因94个,主要涉及编码感应蛋白、转录调控因子、转运蛋白、氧化还原酶和同化酶等,并对这些基因的GO功能进行了注释分析。综上,LG37全基因组测序及无机氮代谢相关基因的分析为芽孢杆菌降低养殖水体中无机氮的研究提供了基因水平数据,为芽孢杆菌微生态制剂降低水体中无机氮的应用研究提供了理论依据。

小柴胡汤对D-GalN/LPS诱导的虎龙杂交石斑鱼肝细胞损伤的保护作用

为探讨小柴胡汤对虎龙杂交石斑鱼(Epinephelus lanceolatus♂×E.fuscoguttatus♀)化学性肝细胞损伤的免疫功能影响,用D-氨基半乳糖(D-GalN,20 mmol·L^(–1))和脂多糖(LPS,1μg·mL^(–1))作用肝细胞24 h构建虎龙杂交石斑鱼肝细胞损伤模型,用不同质量浓度的小柴胡汤(100、200和400μg·mL^(–1))对肝细胞进行前处理[D-氨基半乳糖联合脂多糖(DGalN/LPS)损伤前加药],通过CCK-8法检测肝细胞活力,HE染色观察肝细胞形态,收集细胞上清液检测炎症因子INFγ、COX-2和PGE2的含量,以及细胞沉淀中凋亡和免疫相关基因的表达。结果表明,小柴胡汤可以提高肝细胞的成活率,不同程度地抑制D-GalN/LPS损伤引起的肝细胞培养上清液中INF-γ活性以及COX-2和PGE2含量的升高,降低细胞内乳酸脱氢酶(LDH)、谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)活性以及细胞凋亡率,对肝细胞结构具有明显的保护作用;同时显著抑制凋亡相关基因caspase-3、caspase-9和P53的上调,促进免疫相关基因TLR3的上调。数据统计分析显示,添加200μg·mL^(–1)小柴胡汤组的抑制效果最明显。综合以上结果,小柴胡汤对虎龙杂交石斑鱼化学性肝损伤有一定的保护作用,可预防肝脏疾病的发生和发展,为鱼类保肝药物研究提供了新的见解。