EAE模型中IL-17阻断MBP经鼻黏膜免疫诱导耐受的机制研究

目的探讨MBP68-86肽段经鼻黏膜诱导EAE模型免疫耐受中IL-17的作用机制。方法向4组Lewis大鼠鼻黏膜分别给与PBS、MBP、MBP+IL-17及MBP+IL-17^+腹腔注射Anti-IL-6,诱导免疫耐受给药5 d后,建立EAE动物模型。ELISA方法测定各组血清中细胞因子IFN-γ、IL-4、IL-6、IL-17和TGF-β的含量;评估EAE临床发病情况;脊髓切片分别做HE染色观察淋巴细胞浸润及分布情况,免疫组化方法检测脊髓中单位面积IL-17^+细胞数量;流式细胞仪检测淋巴结中Th17细胞和Treg细胞数量。结果IL-17组与MBP组细胞因子含量相比IFN-γ(P<0.05)、IL-4(P<0.01)、IL-6(P<0.01)、IL-17(P<0.001)、TGF-β(P<0.01)有显著差异,与PBS组无差异;IL-17组、PBS组与MBP组、Anti-IL-6组相比,免疫后出现体重减轻、尾瘫、后肢瘫痪等临床表现;脊髓切片中淋巴细胞浸润面积较大且细胞数量较多、IL-17^+细胞数显著增多;淋巴结中CD4^+IL-17^+T细胞百分率显著增多、CD4^+Foxp3^+T细胞显著减少。结论鼻黏膜给予IL-17可以打破MBP特异性免疫耐受的形成;并且IL-17是通过促进IL-6表达增加,使初始化的T细胞向Th17细胞分化增加,从而打破MBP鼻黏膜免疫耐受治疗EAE。

模拟微重力条件对神经细胞分泌功能的影响

目的分析微重力条件下和正常重力条件下神经细胞培养的上清液中蛋白质表达的差异。方法用旋转细胞培养系统提供的微重力环境进行神经细胞微重力培养。应用表面增强激光解吸离子化（SELDI）蛋白质芯片技术检测微重力和正常重力条件下神经细胞培养上清液的蛋白质谱。用PBSII—C型蛋白质芯片阅读机读取数据，采用Ciphergen Protein Chip3．2．1软件分析数据。结果WCX2两种蛋白芯片共捕获246个蛋白峰，发现14个差异蛋白。与正常重力培养组蛋白谱相比，11个蛋白在微重力培养后高表达，3个蛋白在微重力培养后低表达。结论微重力条件下和正常重力条件下神经细胞培养的上清液中存在差异蛋白表达，这些差异蛋白为进一步了解失重对神经细胞的影响提供了重要线索。

自然杀伤细胞参与脑缺血后损伤的作用机制

目的探讨自然杀伤细胞（NK）参与脑缺血后损伤的作用机制。方法①体内实验：免疫荧光检测永久性大脑中动脉栓塞（pMCAO）小鼠模型脑组织中NK细胞浸润情况以及干扰素（IFN）-γ表达情况；流式细胞术检测pMCAO小鼠模型脑中NK细胞浸润数目和IFN-γ表达；腹腔注射NK细胞中和抗体，流式细胞术检测pMCAO小鼠12h脑内NK细胞浸润情况。②体外实验：建立体外血脑屏障并加入NK细胞和荧光标识的牛血清白蛋白（BSA—FITC），氧糖剥夺（OGD）实验6h后荧光分光光度计检测血脑屏障通透性；将NK细胞与小鼠神经细胞共培养，并加入IFN-γ阻断剂，OGD6h后流式细胞术检测神经细胞凋亡。结果①体内实验示pMCAO小鼠脑中有NK细胞浸润和IFN-γ表达，与非缺血侧相比，缺血侧的NK细胞浸润显著增多并于12h达到高峰（P12h〈0．001）；脑缺血组织中浸润的NK细胞表达IFN-γ与非缺血侧相比增多（P12h〈0．001、P24h〈0．01、P96h〈0．05）；清除体内NK细胞后，pMCAO小鼠脑内NK细胞浸润显著减少（P〈0．001），脑内IFN-γ表达显著下降（P〈0．001）。②体外实验示OGD条件下，NK细胞组与对照组相比，BSA-FITC渗透显著增多（P〈0．01）；NK细胞可促进神经细胞死亡（P〈0．01）。结论NK细胞参与脑缺血损伤过程；NK细胞通分泌IFN-γ加重血脑屏障破坏和神经细胞损伤。