猪圆环病毒2型感染对伪狂犬疫苗免疫应答的影响

为明确PCV2感染对伪狂犬(PR)疫苗免疫应答的影响,本研究采用阻断ELISA方法对单独接种猪PR疫苗组(A组)及PCV2人工感染3周后接种猪PR疫苗组(PA组)不同时相血清中的猪PR病毒gB抗体进行检测;同时对不同时相前腔静脉血进行CD4+/CD8+流式细胞术及血常规分析。结果表明,在PCV2感染后2周至5周间,A组白细胞含量均高于PA组,随后PA组白细胞恢复至与A组略高的正常水平;在整个实验中,除接种猪PR疫苗后1周(WPI)和9周(WPI)外的所有时相PA组的淋巴细胞含量均略高于A组;PCV2感染后可使记忆/激活Th细胞数量略有升高,幼稚型Th细胞含量的下降;PCV2感染后2周～7周PA组Tc细胞均高于A组,在9WPIPA组Tc细胞数量显著下降(p<0.05);除9WPI外,A组的S/N值均低于PA组。结果表明,PCV2感染看降低机体产生针对PRVgB特异性抗体水平,而且在一定程度上降低了幼稚型Th细胞及Tc细胞含量。

RNA干扰抑制猪繁殖与呼吸综合症病毒N基因表达及病毒复制

根据siRNA设计原则,选取了PRRSV N基因上的保守序列作为可能的干扰位点,设计、合成了3个siRNAs,分别将其克隆到pSIREN-Shuttle中,获得3个siRNA重组表达质粒:pShuttle-N1,pShuttle-N2和pShuttle-N3。将siRNA重组表达质粒与融合表达质粒pEGFP-ORF7共转染Marc145细胞,并通过荧光显微镜观察。结果显示,siRNA重组表达质粒能显著抑制PRRSV N基因的表达。在转染总剂量(0.7μg/孔)固定的条件下,分别将不同组合的siRNA表达质粒共转染Marc145细胞,各组合转染孔对PRRSV复制的抑制作用没有明显差异,其中3种siRNA表达质粒共转染对PRRSV复制的抑制最好,证实siRNA对病毒复制作用具有相加性。

广东部分地区H1和H3亚型猪流感抗体监测和病毒分离

从广东省17个未免疫猪流感病毒(SIV)疫苗的规模化猪场和3个肉联厂的待屠宰猪群中采集2 155份血清样品,采用ELISA方法进行猪流感的血清学调查。结果发现,种猪和肉猪H1亚型猪流感抗体阳性率分别为39.6%(329/830)和37.6%(498/1325),H3亚型抗体阳性率分别为10.8%(90/830)和4.6%(61/1325),H1+H3阳性率分别为5.2%(43/830)和1.8%(25/1325)。从281份猪鼻拭样品和肺样品中分离并鉴定出5株猪流感病毒,其中H1N1亚型3株,H3N2亚型和H1N2亚型各1株。

胸膜肺炎放线杆菌ApxIA在大肠杆菌中的可溶性表达及纯化

以胸膜肺炎放线杆菌1型参考菌株App-259株基因组DNA为模板,PCR扩增apxIA全基因,构建表达重组质粒apxIA-c2X,并将其转化至大肠杆菌TB1,SDS-PAGE和Western-blot分析表达产物。结果表明:成功构建了apxIA-C2x表达质粒,重组菌在15℃经0.2 mmol/L IPTG诱导16 h获得高效表达,融合蛋白大小为150 ku左右,目的蛋白约50%可溶,可溶蛋白经Amylose树脂亲和柱纯化,纯度可达到95%。本研究为猪传染性胸膜肺炎诊断抗原和亚单位疫苗的研制奠定了基础。