我国梨腐烂病病原菌的初步鉴定及序列分析

【目的】为了对我国梨腐烂病病原菌进行初步鉴定和序列分析,【方法】从我国15个省（市）梨产区采集腐烂病样品并观察其田间危害症状,通过组织分离法分离获得168份梨腐烂病菌分离株,从中选取72份进行单孢纯化,共获得79份梨腐烂病菌纯化分离株;观察在PDA、25℃黑暗条件下病原菌菌落形态以及产孢体形态,并对其在梨枝条上产生的分生孢子器徒手切片置显微镜下观察其结构特征和分生孢子形态;采用菌丝块接种法测定梨腐烂病菌在‘翠冠’梨离体枝条上的致病力。对部分菌株rDNA-ITS进行PCR扩增、测序,利用BLAST软件与GenBank数据库进行序列相似性分析,并用MEGA 4.1和邻接法构建系统发育树。【结果】根据梨腐烂病菌各分离株在PDA上的菌落形态特征可分为Ⅰ型和Ⅱ型两种菌落类型,不同梨腐烂病菌分离株在PDA上产生多种类型的产孢体,不同梨腐烂病菌菌株在离体梨树枝条上的致病力存在差异,我国梨腐烂病菌的rDNA-ITS核苷酸序列一致率为99.98%~100%,与苹果腐烂病菌分别聚在同一亚组的两个分支。【结论】我国梨腐烂病病原菌存在不同的菌落类型,其rDNA-ITS核苷酸序列分析显示均为V.mali var.pyri。

梨腐烂病致病力的室内快速测定方法研究

【目的】为了研究建立我国梨腐烂病致病力室内快速、稳定的测定方法,【方法】以‘丰水梨’的离体枝条、叶片、嫩梢和果实为材料,采用不同方法造成伤口后接种梨腐烂病的强致病力菌株F-AH-3a,在25℃下保湿培养后观测各处理的发病程度,并在‘丰水梨’和‘康德梨’上用梨腐烂病致病力已知的菌株对测定方法进行验证。【结果】叶片伤口接种,叶正面的病斑较背面的大,经6针与1和3针刺伤处理产生的病斑大小之间存在显著性差异;嫩梢和果实伤口接种,不同处理产生的病斑大小之间无显著性差异;枝条伤口接种3d后,经打孔、环割、烫打及10针刺伤处理的枝条发病率均为100%,而经3针刺伤、烫伤和芽痕处理的分别为55%、40%和15%。前4种处理病斑的长度显著大于后3种处理。在‘丰水梨’和‘康德梨’品种上,用5个梨腐烂病致病力已知菌株对测定方法进行验证的结果表明,各菌株通过枝条打孔接种后产生的病斑,在其长度之间的差异与菌株致病力已知的强弱相吻合。【结论】采用枝条打孔接种法的测定效果显著、稳定,且操作简单,可用于梨腐烂病菌致病力的室内快速测定。

我国梨树腐烂病菌致病力分化分析

【目的】研究明确我国梨树腐烂病菌致病力的分化状况。【方法】梨离体枝条经打孔法造成伤口后接种梨树腐烂病菌,通过接种在5个梨系统(白梨、沙梨、秋子梨、西洋梨和新疆梨)不同品种上观测和比较不同来源菌株的致病力差异,并根据各菌株的综合致病力强弱划分为不同类型,分析致病力分化与菌株来源间的相关性。【结果】研究发现来源于我国14省市5个梨系统的91份梨树腐烂病菌株在不同梨品种上的致病力均存在显著性差异,但同一菌株在5个梨品种上的症状反应程度有异。根据各供试菌株在不同梨品种上的综合致病力强弱可将其划分为3个类型,其中强致病力菌株16份,占17.6%;中致病力菌株70份,占76.9%;弱致病力菌株5份,占5.5%。来源于不同地区和梨系统的菌株之间其致病类型的分布比例存在明显的差异,这种差异可能与其梨系统的抗病性相关。【结论】来源于我国不同地区和梨系统的梨树腐烂病菌存在明显的致病力分化,其综合致病力可划分为强、中、弱3个致病类型,以中等致病力菌株为优势群体。

桃褐腐病菌对多菌灵抗性的AS-PCR检测技术

由于杀菌剂的长期大量使用,植物病原菌对杀菌剂抗性问题日趋突出,严重影响病害防治的效果。褐腐病是一种在全世界范围内广泛发生和流行的重要果树病害。本文以桃褐腐病菌Monilinia fructicola为例,基于已知的多菌灵抗性机理,即靶标β微管蛋白基因TUB2的点突变E198A,建立了一种桃褐腐病菌对多菌灵抗性的等位基因专化性PCR检测技术。结果表明,碱基错配、内参引物、退火温度、dNTPs、Taq DNA聚合酶、专化性引物浓度及配比等因素均对检测效率有影响。经过对以上因素的优化,并对优化后的检测技术进行专化性及灵敏度评价,证实该检测技术能特异性地鉴别桃褐腐病菌M.fructicola对多菌灵抗性基因型E198A,且检测灵敏度可达到4.342 pg/μL病菌DNA,有望在实践中推广使用。

拟康宁木霉T-51几丁质酶活性及内切几丁质酶基因克隆与分析

木霉是一类重要的生防真菌,木霉产生的几丁质酶在其生物防治的重寄生过程中起着重要作用。拟康宁木霉Trichoderma koningiopsis T-51是一株对番茄灰霉病有生防潜力的木霉菌株,本文测定了T-51菌株产生几丁质酶的活性,结果表明T-51在PDB中液体培养以及与灰霉病菌在PDA上对峙培养时产生的几丁质酶活性显著受到灰霉病菌的诱导。采用RACE技术首次克隆了拟康宁木霉T-51中一个几丁质酶基因Tkchit42,全长为1 817bp,包含4个外显子和3个内含子。预测该基因有一个1 275bp的开放阅读框,编码424个氨基酸,预测的蛋白总分子量为46.378kDa,预测的等电点(pI)为5.16,与T.koningii中42kDa内切几丁质酶的氨基酸序列相似性达到99%。

核盘菌菌核围微生物群落分析及其对盾壳霉重寄生的影响

重寄生真菌盾壳霉(Coniothyrium minitans)是核盘菌的一种生防菌,它通过寄生核盘菌菌核,减少初侵染来源,从而达到防病效果。但在田间自然土壤中,核盘菌菌核围微生物对盾壳霉寄生菌核的影响还不清楚。本研究对核盘菌菌核围微生物进行了分离鉴定,并评估了菌核围细菌对盾壳霉重寄生的影响。结果表明,不同取样时间和不同深度的核盘菌菌核围土壤中,均存在可培养微生物富集的"菌核围效应",即菌核围土壤中可培养细菌数量和真菌数量均高于非菌核围土壤。从菌核围土壤中共分离获得了253株细菌和180株真菌,并对其中的代表菌株进行了分子鉴定,发现假单胞菌属(Pseudomonas)和芽胞杆菌属(Bacillus)是菌核围细菌的优势种群,青霉属(Penicillium)是菌核围真菌的优势种群。通过平板对峙,从菌核围细菌中筛选到25个菌株对核盘菌有拮抗活性,22个菌株对盾壳霉具有拮抗活性。砂皿寄生菌核试验证实,7株菌核围细菌对盾壳霉寄生菌核有显著的抑制作用。核盘菌菌核围细菌对盾壳霉重寄生的抑制作用,可能是导致盾壳霉田间生防效果不稳定的原因之一。

稻曲病菌bZIP转录因子UvbZIP12的功能研究

稻曲病是由稻绿核菌(Ustilaginoidea virens)侵染水稻穗部引起的真菌病害,严重影响稻米的产量和品质。bZIP转录因子参与多种植物病原菌的生长发育和致病过程。稻曲病菌中有28个bZIP转录因子,但其具体功能尚未被研究。本研究对bZIP转录因子UvbZIP12在稻曲病菌生长发育和致病过程中的功能进行分析。稻曲病菌接种水稻后,UvbZIP12基因表达量逐渐升高,在接种后3 d和5 d时具有最高表达量。对UvbZIP12基因的敲除转化子分析发现,敲除转化子ΔUvbZIP12在PSA、PDA、YTD培养基上生长速率显著加快,菌丝干重显著增加;产孢量减少;对NaCl和sorbitol的耐受性增强,对SDS、CR、CFW和H_(2)O_(2)的耐受性减弱;对水稻的致病力无明显变化。结果表明,稻曲病菌UvbZIP12参与调控生长发育和对非生物胁迫的耐受性,但不参与致病。