miRNA-30C减轻高糖诱导H9c2大鼠心肌细胞损伤研究

目的探究微小RNA-30c(miRNA-30c,miR-30c)是否能够通过调控p53来减轻高糖诱导的H9c2大鼠心肌细胞损伤。方法应用35 mM高糖(high glucose,HG)培养H9c2大鼠心肌细胞48 h,建立高糖诱导的心肌细胞损伤模型,5.0 mM葡萄糖处理48 h作为阴性对照(NG组),检测高糖环境对大鼠心肌细胞miR-30c表达水平的影响。然后将miR-30c mimics和阴性对照mimics control转染到H9c2心肌细胞内,转染后各组细胞给予35 mM HG孵育48 h。根据不同的处理方法将所有细胞分为四组:5.0 mM葡萄糖对照组(NG组);35 mM葡萄糖刺激组(HG组);转染miR-30c mimics再进行35 mM高糖刺激组(miR-30c mimics+HG组);转染mimics control再进行35 mM高糖刺激组(mimics control+HG组)。应用CCK-8检测各组心肌细胞的活力,DCFH-DA检测各组细胞活性氧水平的高低,JC-1荧光探针检测各组活细胞线粒体膜电位高低,Annexin V-FITC试剂盒检测各组凋亡细胞的情况。Western blot技术检测并分析各组心肌细胞中相关的凋亡蛋白p53、Bcl-2和Cleaved Caspase-3的表达水平,以β-actin为内参。结果高糖处理可以明显下调H9c2细胞中miR-30c表达,降低细胞活力和线粒体膜电位的表达水平,提高细胞内活性氧和凋亡的水平,促进凋亡相关蛋白p53和Cleaved Caspase-3的表达,抑制抗凋亡相关蛋白Bcl-2的表达;miR-30c模拟物转染后可以抑制上述高糖诱导的H9c2细胞损伤。结论在高糖诱导的H9c2大鼠心肌细胞中miR-30c低表达,而p53蛋白高表达;过表达的miR-30c可负性调节p53蛋白,可减轻高糖诱导的H9c2大鼠心肌细胞凋亡损伤。