Aβ_(25-35)寡聚体对大鼠海马神经细胞的活性影响及形态学观察

目的研究以β淀粉样蛋白(Aβ25-35)损伤原代培养海马神经元建立Alzheimer病(AD)细胞模型的方法。方法运用细胞原代培养的方法培养大鼠海马神经元并进行鉴定,以不同浓度Aβ25-35寡聚体建立海马神经元损伤模型,将培养的细胞分为Aβ25-35寡聚体致伤高、中、低剂量组,同时设立正常对照组,倒置显微镜观察细胞形态学变化及通过四唑盐(MTT)比色实验检测细胞存活率。结果当Aβ25-35寡聚体终浓度为5.0μmol/L、10.0μmol/L、20.0μmol/L时,作用于细胞24h,可使神经细胞的形态发生改变和活力显著下降,在显微镜下可见神经元形态有明显的变化,失去贴壁能力或易脱落、突起变短、细胞存活率明显下降,与对照组相比较差异有显著性(P<0.01)。结论 Aβ25-35寡聚体可导致原代培养海马神经元变性、死亡,且有剂量依赖关系,可用于构建AD的细胞模型;并筛选出5.0μmol/L Aβ25-35寡聚体为AD模型的适宜致伤浓度。

神经生长因子诱导神经干细胞向胆碱能神经元分化过程中相关基因表达的研究

目的 通过检测神经生长因子（NGF）定向诱导神经干细胞（NSC）分化为胆碱能神经元过程中Neurod、Hes1基因的表达变化,探讨NSC的定向诱导分化机制.方法 Wistar大鼠海马形成原代克隆球后传代第3代检测.应用不同浓度（5,10,50,100 μg/L）的NGF对NSC进行诱导分化.免疫荧光检测胆碱乙酰转移酶（ChAT）的表达.实时定量聚合酶链反应（PCR）分析NSC诱导分化1周时Neurod、Hes1基因的表达变化.结果 培养获稳定状态的NSC,并具有多向分化能力.NSC经不同浓度的NGF诱导1周后,免疫荧光检测ChAT阳性率最高25％,50 μg/L NGF具最显著的诱导作用.实时定量PCR技术检测50 μg/L组NeuroD mRNA的达量最高[（1.010±0.024）]；高于其他各低浓度组[5μg/L（0.130 ±0.013）,10 μg/L（0.510±0.016）],差异有统计学意义（P＜0.01）；Hes1 mRNA的表达量在50 μg/L组最低[（0.080±0.010）],低于各低浓度组[5 μg/L（0.220 ±0.014）,10μg/L（0.130±0.012）],差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 ①在体外环境下 NGF具有较强的诱导NSC向胆碱能神经元分化的作用.②Neurod和Hes1基因的表达变化与NGF诱导NSC向胆碱能神经元的分化过程密切相关,改变bHLH正负调控基因的表达的平衡点可能对NSC分化为胆碱能神经元有重要调控作用.

神经生长因子对阿尔茨海默病治疗的研究进展

神经生长因子（nervegrowthfactor，NGF）是一类影响神经元生存和发育、诱导神经元分化的生物活性物质。从现有流行病学资料来看，阿尔茨海默病（AlzheimerDisease，AD）可能是一组异质性疾病，在多种因素的作用下发病。从目前研究来看，AD的可能致病因素和假说多达30余种，如家族史、女性、头部外伤、低教育水平、甲状腺病、母育龄过高或过低、病毒感染等。AD临床表现为记忆衰退，认知障碍，智能低下，语言模糊、

比较四种消化方法对神经干细胞传代增殖及活性的影响

目的:观察4种消化方法对体外培养的神经干细胞(N SC s)增殖及活性的影响。方法:原代培养新生大鼠海马N SC s,采用机械消化、0.25%单纯胰酶、0.25%胰酶+0.02%EDTA和0.02%EDTA 4种不同消化方法对N SC s球进行传代培养,经四唑盐比色法(M TT法)法检测不同方法对N SC s活性及增殖能力的变化。结果:与机械消化相比,0.25%单纯胰酶组,0.25%胰酶+EDTA组消化后的大鼠海马N SC s球长时间不聚集,细胞增殖停顿,而单纯EDTA组则明显提高了N SC s的增殖及活性,其余各组差异无统计学意义。结论:随培养时间延长,单纯0.02%EDTA组能够显著提高体外培养的大鼠海马N SC s的增殖水平及活力,且对细胞的后续损伤相对较小。

NGF对神经干细胞内Mash1表达的影响

目的:以Mash1为切入点,深入研究NGF反应性NSCs向胆碱能神经元分化过程中的机制。方法:取体外培养传至第三代的神经干细胞,在含不同浓度NGF的神经干细胞分化培养基中进行分化诱导,采用RT-PCR法测定诱导后Mash1的mRNA相对表达水平。结果:各实验组均有Mash1的表达,其中空白对照组表达最少,以NGF100mg/L组表达量最高。结论:NGF能够促进NSCs内Mash1的表达。

卒中单元对老年急性脑梗死患者神经缺损功能恢复的影响

目的:探讨卒中单元对老年急性脑梗死患者神经缺损功能恢复的影响。方法:选取我院2020-01~2020-04收治的54例老年急性脑梗死患者为观察组,另选2011-01~2011-12以盲抽法选取的53例老年急性脑梗死患者为对照组。对照组入住普通病房,并予以神经内科常规治疗,观察组入住卒中单元病房,以卒中单元模式治疗,于治疗前、治疗1周、2周、4周比较两组神经功能缺损情况(NIHSS评分)、肢体运动功能(Fugl-Meyer评分)、日常生活能力(MBI指数)及血流变学指标(血高切黏度、低切黏度、血浆黏度)。结果:两组治疗1周、2周、4周后NIHSS评分均较治疗前逐步降低,且观察组较对照组低,差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗1周、2周、4周Fugl-Meyer评分均较治疗前逐步升高,且观察组较对照组高,差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗1周、2周、4周MBI评分均较治疗前逐步升高,且观察组较对照组高,差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗1周、2周、4周全血高切黏度、全血低切黏度、血浆黏度均较治疗前逐步降低,且观察组较对照组低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:老年急性脑梗死患者以卒中单元模式治疗可促进神经缺损功能恢复,提高肢体运动功能,改善血流变力学指标,提高日常生活能力。

脑循环功能治疗仪对急性脑梗死患者神经功能恢复的影响

目的:观察脑循环功能治疗仪对急性脑梗死患者神经功能恢复的影响。方法:在常规用药基础上应用脑循环功能治疗仪对19例急性脑梗死患者进行治疗,于治疗第6天进行欧洲卒中量表评分并与对照组进行比较。结果:治疗组神经功能缺损明显改善,评分增高,与对照组比较差异具有显著的统计学意义。结论:脑梗死急性期短期应用脑循环功能治疗仪可显著改善急性脑梗死患者神经功能缺损症状,促进神经功能恢复。

新生大鼠原代皮质神经元细胞差数贴壁培养法的优化

神经元的培养是神经细胞生物学、神经药理、毒理学及神经电生理研究的重要手段,但要获得纯度较高,生长状态较好的神经元并非易事。神经元属于终末分化细胞,给培养带来一定难度,传统的方法多用胎鼠进行神经元的原代培养,因其细胞分化程度低利于存活,但胎鼠取材需处死孕鼠,费用较高且操作繁琐，本实验利用细胞的贴壁时间不同，筛选了一种简便、经济、可行的大鼠原代神经元差数贴壁培养方法。1材料与方法1．

Chk1/chk2在Aβ致伤海马神经元中的表达及意义

目的:探讨Chk1/chk2在Aβ致伤海马神经元中的表达及意义。方法:应用新生(3d以内)SD大鼠采用急性分离、胰酶消化的方法培养海马神经细胞,分别于Aβ25-35致伤0h、8h、16h、24h,并采用免疫细胞染色观察各时间点Chk1/chk2表达情况。结果:体外培养的神经细胞生长状态良好,免疫细胞染色鉴定结果表明Chk1、chk2蛋白在Aβ致伤神经元后,随致伤时间延长均有表达,且以chk1表达显著,在致伤16h有差异明显(P<0.05)。结论:Chk1/chk2共同参与了在Aβ致伤海马神经元中的DNA损伤修复,以chk1表达更显著,提示可望为AD中神经元的DNA损伤修复提供新的干预点。

纳洛酮对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡的影响

目的 :研究纳洛酮在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的保护机制。方法 :腔内线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞模型。16只雄性 Wistar大鼠随机分为缺血组及纳洛酮治疗组 ,采用 TUNEL法检测各组大鼠脑组织于缺血再灌注各 2 .5 h后神经细胞凋亡情况。结果 :大鼠脑缺血再灌注 2 .5 h后凋亡的神经细胞主要分布在梗死灶边缘 ,纳洛酮治疗组细胞凋亡数量低于缺血组 (P<0 .0 5 )。结论 :纳洛酮具有减少大鼠脑组织缺血再灌注损伤后神经细胞凋亡的作用。

磁敏感加权成像在诊断脑微出血中的应用

目的 探讨SWI在诊断脑微出血（CMBs）中的应用价值。方法 回顾性分析15例CMBs患者共257个病灶的影像学资料,观察病灶信号、大小、位置,并分析不同类型图像检出CMBs病灶的差异。结果 257个CMBs病灶中均匀信号病灶165个,混杂信号病灶92个;最大径1.4--8.4mm,混杂信号病灶最大径明显大于均匀信号病灶（P〈0.01）;混杂信号主要分布于幕上,少见于幕下。SWI、幅度（Mag）、相位（Phase）及最小密度投影（mIP）图像检出的CMBs病灶总数差异无统计学意义（P〉0.05）。Phase图像混杂信号占比明显高于SWI及Mag图像（P均〈0.01）,mIP图像明显低于SWI及Mag图像（P均〈0.01）。结论 CMBs影像表现多样,并受病灶大小和位置影响。SWI可作为诊断CMBs的有效检查方法。

Trizol法提取新生小鼠脑组织总RNA优化比较

目的对Trizol法中不同组织研磨方法进行比较,优化新生鼠脑总RNA提取方法。方法取新生24h小鼠脑组织,分别采用常规玻璃组织研磨器(常规研磨法)、剪刀剪碎法、液氮研钵研磨(液氮研磨法)3种方法对组织匀浆进行分离,采用Trizol试剂提取总RNA,紫外分光法测定浓度和纯度,凝胶电泳验证完整性。结果 3种方法均可以提取出总RNA,但相对剪碎法和常规研磨法,液氮研磨法提取的总RNA浓度、纯度及完整性更佳(P<0.05)。结论液氮研磨法虽然对实验条件有一定要求,但仍然是目前最为可靠的脑组织总RNA提取方法,可以完全满足后续实验需要。

生长激素释放肽对心衰大鼠心肌细胞中ERK^(-P)表达的影响

目的研究大鼠慢性心衰时细胞外信号调节激酶(ERK-P)含量的变化以及生长激素释放肽(GHRP)对其的影响。方法 Wistar成年大鼠45只随机分为假手术组、模型组和治疗组,每组15只。采用结扎左冠状动脉前降支建立大鼠慢性心衰模型,假手术组只挤出心脏,不结扎冠状动脉;治疗组造模后给予GHRP尾静脉注射4 w,通过HE染色观察心衰大鼠心肌组织形态学变化、Western印迹法检测各组大鼠心肌细胞中ERK-P蛋白表达水平。结果模型组与假手术组相比,左室峰压、左室压力最大上升和下降速率(±dp/dtmax)明显降低,心肌组织中ERK-P明显升高(P<0.01);治疗组与模型组相比,左室峰压、左室压力最大上升和下降速率(±dp/dtmax)明显增高,心肌组织中ERK-P较模型组明显降低(P<0.01),与假手术组相比ERK-P升高(P<0.05)。结论 ERK-P在慢性心衰发生过程中起重要作用,GHRP可降低慢性心衰大鼠心肌细胞ERK-P含量,有保护和改善心衰大鼠心功能的作用。

纳洛酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后的脑保护作用

目的:探讨纳洛酮对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法:24只Wister大鼠随机分为3组,采用腔内线栓法制备动物模型,检测纳洛酮治疗组及对照组髓过氧化物酶(MPO)含量。结果:大鼠脑缺血再灌注后脑组织MPO含量明显增加(P<0.05),应用纳洛酮后缺血侧脑组织MPO含量显著下降(P<0.05)。结论:纳洛酮可以减轻脑缺血再灌注损伤,纳洛酮具有神经保护作用。

法舒地尔对自发高血压大鼠血压的作用及其机制研究

目的:探讨法舒地尔对自发高血压(SHR)大鼠血压的作用及其机制。方法:将30只SHR大鼠随机分为5组:模型组、硝苯地平组(10mg/kg灌胃),法舒地尔低、中、高剂量组(分别为5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg灌胃),每组6只。另取6只健康WKY大鼠作为空白组。模型组和空白组均灌胃给予等量生理盐水。对比不同时刻各组尾动脉收缩压(SBP)、治疗8周后血清一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET-1)水平、左心室重量指数(LVWI)、心脏、肾脏以及主动脉组织RhoA和Rho激酶mRNA相对表达量。结果:干预后2周、4周、6周、8周,硝苯地平组、法舒地尔中、高剂量组大鼠尾动脉SBP均显著低于模型组(P<0.05),且法舒地尔高剂量组SBP低于中剂量组和硝苯地平组(P<0.05)。干预后各时间点,6组大鼠尾动脉SBP、血清NO水平、LVWI及不同组织RhoA和Rho激酶mRNA相对表达量由低至高为空白组、法舒地尔高剂量组、法舒地尔中剂量组、硝苯地平组、法舒地尔低剂量组、模型组,而血清ET-1水平相反,组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论:法舒地尔能有效降低SHR大鼠尾动脉SBP,且在一定范围内剂量越高效果越理想,推测与降低RhoA和Rho激酶mRNA的表达,调控血清NO和ET-1水平有关。

hβ-NGF基因真核表达载体构建及亚细胞定位

目的构建含EGFP标签的人β-神经生长因子(hβ-NGF)的真核表达载体,观察和分析其在HEK293细胞中的定位,为后续基因转移实验奠定基础。方法PCR扩增hβ-NGF基因编码框,连接到pEGFP-N1载体,将HEK293细胞分为对照组(不转染)、空载组(转染pEGFP-N1质粒)和实验组(转染pEGFP-N1-hβ-NGF质粒),后两组采用脂质体法转染,24h后荧光显微镜下观察EGFP瞬时表达及细胞定位,通过蛋白序列数据库和生物信息学软件进一步分析亚细胞定位。结果经双酶切和测序鉴定,pEGFP-N1-hβ-NGF真核表达载体构建成功。与空载组比较,实验组融合EGFP只少量分布于胞质中(P<0.05),不存在于细胞核内。生物信息学分析表明,hβ-NGF基因编码长241个氨基酸的肽链,由信号肽、前导肽和功能肽3段构成,含有2个N-糖基化位点,6个高度保守半胱氨酸残基,可以形成3个二硫键,是可溶、不稳定的分泌型蛋白;亚细胞定位该蛋白主要位于细胞外,部分分布于胞吞内体和高尔基体,以模序二聚体形式发挥生物学功能。结论成功构建了有活性的hβ-NGF真核表达载体,观察到融合蛋白在HEK293真核细胞系分泌表达,其亚细胞分布与生物信息学分析一致。

植物雌激素类成分治疗阿尔茨海默病的应用前景

植物雌激素是一类在很多中药中也广泛存在的,具有类似雌激素生物活性的植物成分。近年来,更多的研究表明植物雌激素可能在预防和治疗阿尔茨海默病中发挥积极作用,这使得植物雌激素具有更广阔的研究前景。

卒中单元对动脉溶栓治疗急性脑梗死患者预后的影响

目的:探讨急性卒中单元(ASU)对尿激酶(UK)动脉溶栓治疗急性脑梗死患者预后的影响。方法:选择2018-03~2020-03,我院发病6h内UK动脉溶栓治疗大脑中动脉(MCA)病变的急性脑梗死患者60例,随机分为ASU组(收入NICU) 26例和对照组(收入普通病房)34例,根据患者不同情况给予相应治疗过程。两组患者发病90d的临床预后评分(改良Rankin量表,mRS);两组患者出血转化及肺炎并发症有无差别。结果:ASU组90d临床预后不良(mRS≥3分)较对照组减少(P<0.05);ASU和对照组间比较,出血转化率无统计学差异(P>0.05),肺炎发生率有统计学差异(P<0.05)。结论:发病6h内UK动脉溶栓治疗的急性脑梗死患者,ASU可以减少并发症发生,改善发病90d的临床预后。