蒿汤对酒精性肝纤维化大鼠肝功能和pERK/eIF2a信号通路的影响

目的:探究蒿汤对酒精性肝纤维化大鼠肝功能的改善及磷酸化细胞外调节蛋白激酶/真核翻译起始因子2α(pERK/eIF2a)信号通路的影响。方法:将40只健康的雄性SD大鼠随机分成4组:正常组、假手术组、模型组及蒿汤组,每组10只。采用“酒精-玉米油-吡唑”灌胃联合12周的高脂饮食构建酒精性肝纤维化模型,造模成功后,正常组不做处理,假手术组给予生理盐水灌胃,模型组和蒿汤组于相同时间给予等量蒿汤灌胃治疗。连续治疗12周后检测各组血清羟脯胺酸(HYP)、透明质酸酶(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、Ⅲ型前胶原(PⅢNP)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)、γ-谷氨酰转肽酶(γ-TG)、总胆汁酸(TBA)、总胆红素(TB)、白蛋白(ALB)、总胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)水平,苏木精-伊红染色法(HE)观察大鼠肝脏纤维化程度,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肝脏组织中pERK/eIF2a信号通路的表达水平。结果:与正常组对比,假手术组血清HYP、HA、LN、CIV、PⅢNP、AST、ALT、γ-GT、ALP、TBL、TB水平无明显改变(P>0.05),模型组显著升高(P<0.01);给予蒿汤干预治疗后,与模型组相比,大鼠血清HYP、HA、LN、CIV、PⅢNP、AST、ALT、γ-GT、ALP、TBL、TB水平显著降低(P<0.01)。血清白蛋白、脂代谢及氧化损伤指标显示,与正常组对比,假手术组血清ALB、CHOL、TG、GSH、SOD、MDA水平无明显改变(P>0.01),模型组血清ALB、GSH、SOD水平显著降低(P<0.01),CHOL、TG、MDA水平显著升高(P<0.01);给予蒿汤干预治疗后,与模型组相比,大鼠血清ALB、GSH、SOD水平显著升高(P<0.01),CHOL、TG、MDA水平显著降低(P<0.01)。HE染色结果显示,与对照组比较显示假手术组肝脏切片形态学正常,而模型组肝脏切片可见明显空泡状改变,给予蒿汤干预治疗组肝脏切片明显好转。ELISA结果显示,与正常组对比,假手术组肝脏组织中pERK和eIF2a水平无明显改变(P>0.05),模型组肝脏组织中pERK和eIF2a水平显著升高(P<0.01);给予蒿汤干预治疗后,与模型组相比,大鼠肝脏组织中pERK和eIF2a水平显著降低(P<0.01)。结论:蒿汤可以有效阻碍酒精性肝纤维化大鼠的肝脏纤维化程度,降低肝纤维化指标,改善肝胆功能。发挥这一作用可能与抑制pERK/eIF2a信号通路有关。

茵陈蒿汤对肝纤维化大鼠Caspase-12通路以及TIMP-1、Smad2的影响

目的探究茵陈蒿汤对肝纤维化(LF)大鼠Caspase-12通路以及TIMP-1、Smad2的影响。方法雄性SD大鼠45只,随机分为3组,即对照组,模型组和茵陈蒿汤组。使用腹腔注射CCl4建立LF模型,茵陈蒿汤组在建模时使用茵陈蒿汤灌胃,持续8周。比较8周后各组大鼠的一般情况,分别使用HE染色和Masson染色观察肝组织形态和纤维化情况。分别使用Western blot和RT-qPCR检测蛋白和mRNA的水平。结果模型组大鼠出现明显的肝损伤和纤维化,茵陈蒿汤组大鼠肝损伤情况和纤维化情况显著减轻。血生化结果显示,模型组ALT和AST水平显著高于对照组(P<0.05),菌陈蒿汤干预后ALT和AST水平显著低于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05)。建模后8周模型组大鼠肝组织中GRP78、eIF2α和Caspase-12显著升高(P<0.01),茵陈蒿汤组的GRP78、eIF2α和Caspase-12显著低于模型组(P<0.01)。模型组的CollagenⅠ、CollagenⅢ、TIMP-1、Smad2 mRNA和蛋白水平显著高于对照组(P<0.01),茵陈蒿汤组CollagenⅠ、CollagenⅢ、TIMP-1、Smad2 mRNA和蛋白水平显著低于模型组(P<0.01)。结论茵陈蒿汤可显著缓解大鼠肝组织的纤维化,这可能由于茵陈蒿汤具有抑制Caspase-12通路以及Smad2基因的表达发挥抗纤维化和抗凋亡的作用有关。

RNA、lnc-EGFR对肝细胞癌免疫逃避调节的相关性

目的探讨RNA、表皮生长因子受体长链非编码RNA(lnc-EGFR)对肝细胞癌(HCC)免疫逃避调节的相关性。方法通过医院病理档案室随机选择保定市第一中心病医院2017年1月至2019年1月收集的HCC标本30份和癌旁正常组织30份,采用RT-PCR法检测各组织中RNA、lnc-EGFR表达水平;蛋白质印迹法检测HCC组织中化学因子和细胞免疫因子表达情况,并分析RNA、lnc-EGFR与其相关性;将HCC细胞株随机分为两组,分别为RNA、lnc-EGFR抑制组(n=15)与空白对照组(n=15),MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况与细胞周期分布情况。结果癌旁正常组织中RNA、lnc-EGFR表达水平分别为(0.46±0.12)和(0.62±0.15)低于HCC组织(0.22±0.06)和(0.14±0.05)(P<0.05)。HCC组织中CXCL12-CXCR4表达水平低于癌旁正常组织(P<0.05);HCC组织中CCL20-CCR6、CX3CLI-CX3CR1高于癌旁正常组织(P<0.05);HCC组织中细胞免疫因子IL-6、IL-10、TGF-β、TNF-α表达水平高于癌旁正常组织(P<0.05);RNA、lnc-EGFR表达水平与CXCL12-CXCR4呈显著负相关(P<0.05),与CCL20-CCR6、CX3CLI-CX3CR1、IL-6、IL-10、TGF-β、TNF-α呈显著正相关关系(P<0.05);HCC、癌旁正常组织中细胞相对吸光度、细胞凋亡率、细胞周期占比均具有统计学差异(P<0.05)。结论RNA、lnc-EGFR在HCC组织中呈高表达水平,可通过上调组织中化学因子和细胞免疫因子水平来提高癌细胞免疫逃避调节水平,与HCC免疫逃避调节具有显著相关性。