犬和猫皮肤癣菌三重荧光定量PCR检测方法的建立及应用

建立鉴别犬小孢子菌(Microsporum canis,MC)、须癣毛癣菌(Trichophyton mentagrophytes,TM)和秕糠马拉色菌(Malassezia furfur,MF)的三重荧光PCR检测方法,根据MC、TM和MF 3种真菌的ITS基因保守序列设计引物和探针,建立三重荧光PCR检测方法。所建立的三重荧光PCR方法仅对MC、TM和MF出现阳性扩增,与大肠埃希氏菌、产色葡萄球菌和铜绿假单胞菌等犬、猫皮肤病常见病原无交叉反应,对MC、TM和MF的最低检出限分别为1.36×10~1、1.35×10~1、1.33×10~1拷贝;组内和组间变异系数均小于2%,重复性好。应用建立三重荧光PCR方法对88份犬、猫临床样品进行检测,结果检出1份MC阳性、21份TM阳性、20份MF阳性,检测结果与单一荧光PCR方法一致。该方法可对MC、TM和MF同时快速检测,可用于犬、猫真菌性皮肤病的快速诊断。