玻璃化冷冻技术与程序化冷冻技术在人类辅助生殖技术中的地位

近年来玻璃化冷冻法凭借其众多优势,在人类辅助生殖领域的应用越来越广泛,甚至有以玻璃化冷冻全面取代程序化冷冻的观点。

0PN来源胚胎形成的影响因素及其利用价值分析

目的探讨常规体外受精(IVF)后的未见原核(0PN)受精卵发生的影响因素及对其发育潜能影响。方法对2019年1月至2021年12月期间在保定市妇幼保健院生殖医学科1597个常规IVF周期及596个冻融胚胎移植(FET)周期进行回顾分析。将常规IVF-ET周期分为A1组(无0PN来源胚胎,n=731)、A2组(0<0PN来源胚胎率≤20%,n=495)和A3组(0PN来源胚胎率>20%,n=371)三组,比较三组的患者基本情况、新鲜周期临床治疗情况和实验室指标。依据行囊胚培养的D3卵裂胚来源不同分为B1组(0PN来源,n=2409)和B2组(2PN来源,n=6602)两组,比较两组囊胚形成率、可利用囊胚形成率。依据囊胚来源将囊胚FET周期分为C1组(0PN来源冻融囊胚,n=85)和C2组(2PN来源冻融囊胚,n=511),比较两组的妊娠率、着床率、流产率、活产率、胎儿畸形率等指标。结果(1)与A1组比较,A2、A3组的年龄更小、基础FSH水平更低、抗苗勒管激素(AMH)水平更高(P<0.05),而组间不孕年限、体质量指数(BMI)无显著差异(P>0.05)。A2、A3组两组患者用药天数、长方案占比、获卵数显著高于A1组(P<0.05),其中A2组拮抗剂方案占比最低,获卵数最高。(2)B1、B2两组的囊胚形成率无显著差异(P>0.05),B1组的可利用囊胚形成率显著高于B2组(P<0.05)。(3)FET周期中,C1、C2组患者间年龄、不孕年限、BMI、优质囊胚比例、D5囊胚占比均无显著差异(P>0.05),C2组的移植胚胎数显著高于C1组(P<0.05)。囊胚移植后,两组间种植率、妊娠率、孕周、早产率、新生儿体重、新生儿体长比较均无显著差异(P>0.05),C1组流产率显著高于C2组、活产率显著低于C2组(P<0.05)。结论接受常规IVF-ET治疗的患者卵巢储备情况可能会对0PN来源胚胎的形成有一定影响;0PN来源囊胚移植流产率高于2PN来源囊胚,而活产率低于2PN来源囊胚,但在患者无2PN来源胚胎可移植的情况下,0PN来源囊胚移植提高了胚胎利用率,降低了患者诊疗费用,减少了患者精神及身体上的痛苦,有很大利用价值。

严重少弱畸精子症患者精液和睾丸中精子的ICSI临床结局比较

目的 探讨睾丸取精能否改善严重少弱畸精子症的男性不育患者行卵胞浆内单精子注射(ICSI)的临床结局。方法 回顾性分析2016年1月至2020年6月因男性严重少弱畸形精子症于保定市妇幼保健院生殖医学科行ICSI助孕的58对夫妇的临床资料。按照获取精子的方式不同,将患者分为两组:射出精子ICSI组(E-ICSI组,56个周期)和睾丸精子ICSI组(T-ICSI组,42个周期)。比较两组患者的基础资料、促排卵情况、授精及胚胎发育情况和临床妊娠结局的差异。结果 58对夫妇共接受了98个ICSI周期,56个周期(57.14%)使用射精精子,42个周期(42.86%)使用睾丸精子。两组患者的基础资料、促排卵方案、Gn用量、HCG日E2及P水平、成熟卵数、获卵数比较,均无统计学差异(P>0.05)。E-ICSI组与T-ICSI组的2PN受精率(56.4%vs. 53.4%)、优质胚胎率(8.5%vs. 6.1%)、卵母细胞利用率(25.9%vs. 24.2%)均无统计学差异(P>0.05)。E-ICSI组与T-ICSI组的新鲜周期临床妊娠率(22.7%vs. 27.0%)、冻融周期临床妊娠率(35.7%vs. 66.7%)和一次控制性卵巢刺激(COS)累积活产率(25.0%vs. 40.5%)均无统计学差异(P>0.05)。结论 基于本研究的结果,暂不推荐严重少弱畸精子症患者直接选择睾丸精子进行ICSI,只有当射出精液离心后未发现正常形态活精子的情况下,选择睾丸精子作为继续ICSI的补救性手段。

基于AGREEⅡ工具对男性不育症指南的质量评价

目的评价目前国内外男性不育症诊治指南的方法学质量,以选择最佳的指南指导临床应用。方法检索国内外指南网及相关数据库,按照纳入和排除标准筛选指南。4名评价人员独立利用指南研究与评价工具Appraisal of Guidelines for Research&EvaluationⅡ(AGREEⅡ)对指南制定的方法学质量进行评价。对4名评价人员的组内相关系数(ICC)进行一致性检验,并计算指南在AGREEⅡ6个领域的得分。结果共纳入指南7篇,其中英文指南5篇,中文指南2篇。7篇指南的ICC均>0.75,说明4名评价人员的一致性较高。纳入指南在AGREEⅡ6个领域(范围和目的、参与人员、制定的严谨性、表达的清晰性、应用性、编辑的独立性)的平均得分分别为50%、30%、25%、63%、17%、32%。其中A级(推荐)0篇,B级(修改完善后推荐)4篇,C级(不推荐)3篇。结论European Academy of Andrology guideline Management of oligo-astheno-teratozoospermia 2018和EAU Guidelines on Male Infertility 2018两篇指南均为循证指南,可在适当修订后使用。我国男性不育指南在制定的严谨性、应用性和编辑独立性等方面仍有待提高,建议制定证据等级更高的循证指南,以促进男性不育症的规范化诊治。

补肾调肝方对多囊卵巢模型大鼠血清TGF-β1、IGF-1、TNF-a及激素水平的影响

目的:探讨补肾调肝方对多囊卵巢模型大鼠血清TGF-β1、IGF-1、TNF-a及激素水平的影响。方法:选取雌性大鼠(SD)45只,随机分为PCO模型组36只和正常对照组9只。参照Poretsky法,将造模成功的36只模型随机分为4个组,各9只。分别给予补肾调肝汤68.66g/kg(中药大剂量组)、17.17g/kg(中药小剂量组),二甲双胍250 mg/kg(二甲双呱组)和蒸馏水1ml/100g(对照组)体重灌胃,1次/d,连续用14d。放射免疫法检测T、E_2、LH、FSH、INS水平;用ELISA法检测TGF-β1、IGF-1、TNF-a水平。结果:中药大剂量组与其他组比较,T水平明显降低,E_2水平、E_2/T比值明显升高,血清TGF-β1、IGF-1水平升高,TNF-a水平降低,比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:补肾调肝方能降低PCO模型大鼠血清T水平,升高E_2水平,也能够调节垂体LH、FSH的分泌,同时能够使PCO模型大鼠的血清TNF-a水平降低,TGF-β1、IGF-1水平升高,在一定程度上对恢复PCO模型大鼠的生殖功能有促进作用。

不同发育阶段、不同质量囊胚冷冻复苏移植周期妊娠结局分析

目的分析囊胚的发育阶段及其内细胞团、滋养层质量对妊娠结局的影响,从而为囊胚冷冻时机的把握及冻融胚胎移植(frozen-thawed embryo transfer,FET)周期解冻胚胎选择提供帮助。方法本研究回顾分析了在保定市妇幼保健院生殖医学科接受单囊胚FET周期的患者资料,依据囊胚扩张/孵出状态及囊胚质量将囊胚分为A1组(4期优质囊胚组)、A2(4期非优质囊胚组)、B1组(5期优质囊胚组)、B2组(5期非优质囊胚组)、C1组(6期优质囊胚)、C2组(6期非优质囊胚),比较相同质量不同发育阶段囊胚FET周期妊娠结局的差异,及同一发育阶段不同质量囊胚FET周期妊娠结局差异。结果优质囊胚组间比较,A1组FET周期的妊娠率、着床率显著高于B1组(P<0.05),A1组与C1组FET周期的妊娠率、着床率比较差异无统计学意义(P>0.05),但C1组的妊娠率、着床率有下降趋势,3组间FET周期流产率、活产率、男/女比例、孕周及新生儿体重差异无统计学意义(P>0.05);非优质囊胚组间比较,A2、B2、C23组FET周期妊娠率、着床率、流产率、活产率、男/女比例、孕周及新生儿体重差异无统计学意义(P>0.05);同一阶段不同质量囊胚组间比较,A1组的妊娠率、着床率、活产率显著高于A2组(P<0.05),而流产率、男/女比例、孕周及新生儿体重2组间比较差异无统计学意义(P>0.05),B1组对比B2组及C1组对比C2组FTE的妊娠率、着床率,流产率、活产率、男/女比例、孕周及新生儿体重差异无统计学意义(P>0.05)。结论囊胚的发育阶段对囊胚FET结局有一定的影响,其中4期优质囊胚FET的妊娠率、着床率显著优于5期优质囊胚FET临床结局,与6期优质囊胚ET周期的妊娠率、着床率比较差异无统计学意义,但6期囊胚的妊娠率、着床率有下降趋势;相同发育阶段的4期优质囊胚FET临床结局显著高于4期非优质囊胚FET妊娠率、着床率,因此囊胚FET周期应优先考虑4期优质囊胚。

体外受精周期低受精与精子相关参数的多因素分析

目的探讨体外受精(IVF)周期低受精的发生与精子参数的相关性。方法选取2017年6月—2018年10月于保定市妇幼保健院生殖医学科行IVF助孕的患者264例。根据受精5~6 h拆卵后第二极体的出现与否,分为低受精组(受精率<30%)和正常受精组(受精率≥30%),比较两组患者的基本资料和精子参数。采用二分类Logistic回归分析相关性。采用受试者工作特征曲线(ROC)的曲线下面积(AUC)分析预测价值。结果低受精组头部缺陷精子率、精子畸形指数和自发顶体反应(AR)高于正常受精组(P<0.05)。经二分类Logistic回归分析,头部缺陷精子率[OR=1.132(95%CI:1.058,1.211)]、精子畸形指数[OR=24.826(95%CI:3.186,193.439)]和自发AR[OR=1.268(95%CI:1.174,1.369)]均为IVF周期低受精的影响因素(P<0.05)。各因素的AUC比较,回归方程的预测价值最大[AUC=0.854(95%CI:0.805,0.894)]。结论头部缺陷精子率、精子畸形指数及自发AR与IVF低受精的发生相关,当回归方程预测值(P)>-1.461时,建议患者选择卵质内单精子注射助孕。

微刺激联合黄体期促排卵对卵巢低反应患者体外受精—胚胎移植中的效果观察

目的探讨微刺激联合黄体期促排卵对卵巢低反应患者体外受精—胚胎移植中应用效果。方法选择接受体外受精—胚胎移植的卵巢低反应患者146例,共394个周期,随机分为两组:对照组73例采用微刺激方案治疗,联合组73例采用微刺激联合黄体期促排卵方案治疗,比较两组患者的促排卵结局和妊娠结局。结果联合组平均Gn量、平均Gn天数、获卵数、可移植胚胎数均显著高于对照组,联合组共治疗112个周期,其中有23个周期无可利用胚胎,对照组共治疗282个周期,其中有144个周期无可利用胚胎,联合组的周期取消率显著低于对照组(P<0.05);两组患者的扳机日子宫内膜厚度、胚胎移植数、临床妊娠率、胚胎种植率以及早产率差异无统计学意义(P>0.05),但是联合组的促排卵周期妊娠率显著高于对照组(P<0.05)。结论微刺激联合黄体期促排卵可以有效的增加获卵数量、可移植胚胎数量,降低周期取消率,增高周期妊娠率,从而提高患者的治疗效果,改善妊娠结局,是有效的促排卵方案。

重度卵巢过度刺激综合征患者的护理体会

卵巢过度刺激综合征（ovarian hyperstimulation syndome,OHSS）是辅助生殖技术治疗中主要的并发症,随着辅助生殖技术的广泛开展,OHSS的发病率有上升的趋势.目前,OHSS是在促排卵过程中发生的常见的医源性疾病,总发生率为23%,中、重度者占1%~10%[1].其特征表现为下腹痛、腹胀、卵巢囊性增大、毛细血管通透性增加,血管内液体向第三体腔转移,腹水、胸腔积液、血液浓缩、水电解质失衡及血栓形成严重者可导致肝肾功能衰竭.我院生殖医学科自2006年2月-2009年5月行外源性促性腺激素诱导排卵患者共2 254例,其中发生重度OHSS住院患者12例,由于治疗及护理得当,使患者顺利渡过危险期,护理体会如下.

尿促性素促排卵周期宫腔内人工授精效果观察

目的：探讨尿促性素（HMG）促排卵周期宫腔内人工授精（IUI）治疗不孕的效果。方法：对我院2008年4月～2009年4月128例采用HMG促排卵进行夫精人工授精的患者的临床资料进行回顾性分析。结果：本组卵泡破裂数是（1．8±1．4）个，排卵率93．8％，妊娠率17．19％，流产率18．18％。结论：HMG促排卵周期官腔内人工授精妊娠率较高。

精子DNA碎片指数与单精子显微注射妊娠结局的相关性分析

目的分析精子DNA碎片指数(DNA fragmentation index,DFI)对接受卵胞浆内单精子显微注射(Intracytoplasmic sperm injection,ICSI)助孕后冷冻胚胎移植后的临床妊娠率的影响。方法回顾性分析接受ICSI助孕的87对夫妇的一般资料,排除女性因素不孕与夫妇双方染色体结构异常和男性Y染色体微缺失,对不同DFI男性患者进行分组,并对2组患者睾丸体积(超声多普勒)、血清促卵泡素(follicle stimulating hormone,FSH)等激素、精液常规分析、精子DFI和临床妊娠率进行统计学分析。结果不同DFI患者组的女方年龄、男方年龄、不孕时间、冷冻解冻胚胎移植(Frozen embryo transfer,FET)日雌二醇(E2)、FET日子宫内膜厚度等差异无统计学意义;DFI≤25%组的受精率、双原核(2 Pronucleus,2PN)形成率、卵裂率、优质胚胎率、囊胚形成率分别为80.92%、85.37%、96.34%、23.56%、31.78%,DFI>25%组分别为70.51%、71.71%、88.05%、11.30%、14.14%,上述各指标DFI≤25%组均大于DFI>25%组且差异有统计学意义。DFI≤25%组的临床妊娠率(45.24%)大于DFI>25%组(20.00%),且差异有统计学意义(χ^(2)=6.340,P=0.012)。结论精子DFI与妊娠结局密切相关,异常升高的精子DFI(DFI>25%)将对临床妊娠率产生不利影响。

用小剂量的甲氨蝶呤联合米非司酮治疗宫外孕的效果观察

目的:观察使用小剂量的甲氨蝶呤联合米非司酮治疗宫外孕的临床效果。方法:将2014年3月至2016年3月保定市妇幼保健院收治的84例宫外孕患者作为研究对象,并将其随机平均分为甲组(n=42)和乙组(n=42)。为甲组患者使用小剂量的甲氨蝶呤进行治疗。为乙组患者使用小剂量的甲氨蝶呤联合米非司酮进行治疗。然后,比较两组患者血人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)的水平、子宫旁包块的直径及治疗的效果。结果:治疗后,两组患者血β-HCG的水平均下降,P <0.05。与甲组患者相比,治疗后乙组患者子宫旁包块的直径更短,其治疗的有效率更高,P <0.05。治疗4日后、治疗7日后、治疗10日后及治疗14日后,与甲组患者相比,乙组患者血β-HCG的水平均更低,P <0.05。结论:使用小剂量的甲氨蝶呤联合米非司酮治疗宫外孕的效果较好。

处理后精子参数对AIH临床妊娠率的影响研究

目的探讨处理后精子参数对夫精人工授精(AIH)临床妊娠率的影响。方法回顾性分析2018年1-10月该院生殖医学科进行AIH助孕的176对患者夫妇共337个AIH周期的资料,根据妊娠情况将研究对象分为临床妊娠组(43对)和未临床妊娠组(133对)。比较两组处理后的前向运动精子总数、正常形态精子率和正常形态前向运动精子总数的变化,并分析其对临床妊娠的影响。结果两组处理前的前向运动精子总数和正常形态精子率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。两组处理后的前向运动精子总数、正常形态精子率和正常形态前向运动精子总数比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。处理后正常形态前向运动精子总数是临床妊娠的影响因素之一,其临界值为1.19×106时预测临床妊娠的灵敏度和特异度分别为79.07%和63.27%。结论处理后精子参数与AIH成功率存在相关性,当处理后前向运动精子总数小于临界值时,应谨慎告知患者临床妊娠率再下降,建议其选择体外受精/胞质内单精注射等更高级的助孕方式。

235例410个周期夫精人工授精分析

目的探讨影响宫腔内人工授精(intra-uterine insemination,IUI)治疗成功的临床因素。方法通过对我院235例共410个周期接受IUI治疗妇女的促排卵方案、IUI的时机、IUI的周期数进行统计,分析其与妊娠的关系。结果①IUI治疗结局与促排卵方案有关。②1～4个周期IUI治疗的妊娠率分别为12.67%、13.01%、18.75%、6.67%,5～6周期IUI治疗的妊娠率均为0,前4周期IUI治疗的妊娠率明显高于4个以上周期(P<0.05)。结论 1～4个周期IUI治疗的妊娠率明显高于4个以上的周期,增加IUI周期数不能提高成功率。

论针灸在卒中单元中的治疗作用

脑卒中目前是我国死亡的第二要素及致残第一要素,虽然新药物、新治疗方法、新治疗手段不断出现,但是发病率、复发率、致残率及病死率均较高,而治愈率较低,巨额医疗费用给家庭及社会带来沉重的负担.目前,世界许多国家都强调把脑卒中患者收入卒中单元治疗[1].而在我国,除了依据卒中单元治疗卒中外,中医针灸治疗广泛应用于临床实践,并且取得了较好的疗效,所以创建有中国特色的卒中单元应充分发挥针灸的特有优势.

黄素化卵泡不破裂综合征患者112例治疗探讨

黄素化卵泡不破裂综合征（luteinized unruptured follicle syndrome，LUFS）是一种卵泡持续存在，在LH峰值后48小时仍然不能排出卵子的现象。为探讨治疗自然周期LUFS的方法，我们采用前瞻性随机对照研究对自然周期LUFS患者进行了相应的治疗,分析如下。

白藜芦醇拮抗卵泡颗粒细胞氧化应激的损伤

目的探讨白藜芦醇是否可以拮抗过氧化氢诱导的卵泡颗粒细胞氧化应激损伤。方法收集体外受精/单精子卵泡浆内注射(IVF/ICSI)患者捡卵后卵泡液中的颗粒细胞并进行培养。将培养后的颗粒细胞分为4组:对照组,损伤模型组,10μmol/L白藜芦醇组和50μmol/L白藜芦醇组。采用CCK-8法测定细胞活性,硫代巴比妥酸(TBA)法测定丙二醛(MDA)含量,水溶性四氮唑-1(WST-1)法测定超氧化物歧化酶(SOD)水平,竞争ELISA法测定孕酮分泌量,AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞仪测定细胞凋亡,Western blotting测定Bcl-2、Caspase-3和沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)蛋白表达。结果与对照组比较,损伤模型组的细胞活性、SOD水平、孕酮分泌量和Bcl-2蛋白表达均明显降低,而MDA含量、细胞凋亡率和Caspase-3凋亡蛋白表达均明显增加(P<0.05)。与损伤模型组比较,10μmol/L白藜芦醇组各项指标未显示出统计学差异;而50μmol/L白藜芦醇组的细胞活性、SOD水平、孕酮分泌量和Bcl-2及SIRT1蛋白表达均明显升高,MDA含量、细胞凋亡率和Caspase-3凋亡蛋白表达均明显下降(P<0.05)。结论50μmol/L白藜芦醇可以通过增加SIRT1的活性,增强颗粒细胞的抗氧化及抗凋亡能力,改善颗粒细胞的功能。

孕妇患有甲状腺功能减退症对其妊娠结局的影响

目的 :分析孕妇患有甲状腺功能减退症对其妊娠结局的影响。方法 :将近期内保定市妇幼保健院收治的98例患有甲状腺功能减退症的产妇作为研究对象。为这98例产妇均使用左旋甲状腺素进行治疗。治疗后,将其中45例甲状腺功能未恢复正常的产妇设为甲组;将其中53例甲状腺功能已恢复正常的产妇设为乙组。然后,比较两组产妇促甲状腺激素(TSH)的水平、血清游离甲状腺激素(FT4)的水平、分娩期并发症的发生情况及不良妊娠结局的发生情况。结果 :与甲组产妇相比,乙组产妇TSH的水平、妊娠期高血压的发生率、胎儿宫内窘迫的发生率、胎盘早剥的发生率、产后出血的发生率、早产的发生率、新生儿窒息的发生率及新生儿畸形的发生率均更低,其FT4的水平更高,P <0.05。结论 :孕妇患有甲状腺功能减退症可明显提高其分娩期并发症和不良妊娠结局的发生率,不利于产妇及其新生儿的健康。

组蛋白磷酸化修饰与精子发生

组蛋白磷酸化是组蛋白氨基酸残基的磷酸化修饰,是一类重要的翻译后修饰,与有丝分裂和减数分裂的染色质压缩、染色质功能调节、转录的激活与抑制、DNA损伤修复以及物质代谢等多种机制相关。文章对国内外近10年多种代表性生物精子发生(孢子形成)的相关文献进行总结,论述了组蛋白磷酸化在精子发生中调控蛋白质作用因子的结合位点、调控减数分裂过程中的DNA复制与重组、保障正确的染色质重塑、对减数分裂后的成熟精子核的完全包装等重要功能。这些发现加深了人们对于组蛋白及其翻译后修饰在精子发生及分化中作用的理解。

人类精原细胞分化过程的生物信息学分析

目的为了明确精子发生过程中的关键基因和生物学过程, 挖掘人类精原细胞(spermatogonia, SPG)分化过程中的差异表达基因(differentially expressed genes, DEGs)及其信号通路, 探索精子发生早期的分子机制, 增加对SPG分化过程的分子生物学认识。方法从公共数据库下载人类未分化精原细胞(undifferentiated spermatogonia, uSPG)和分化精原细胞(differentiating spermatogonia, dSPG)的转录组数据, 利用Hisat2和StingTie筛选DEGs, 并对差异表达基因进行GO和KEGG功能富集分析。利用MACS2软件对ATAC-seq数据中开放染色质区域进行富集分析。结果共筛选出8 532个DEGs, 包括4 127个上调基因和4 405个下调基因, 它们通过一些重要的生物学过程, 如细胞周期、细胞因子介导的信号通路、有机物代谢过程、细胞运动、甲基化等来调控SPG的分化过程。KEGG富集分析结果表明一些重要信号通路包括FoxO信号通路、JAK-STAT信号通路等在SPG分化过程中具有重要作用。GO富集分析结果显示甲基化在SPG分化过程中发挥重要作用, 甲基化相关基因表达差异显著。组蛋白甲基化词条相关基因TDRDs家族显著富集, 9个TDRDs基因在dSPG中表达更加活跃。结论本研究通过生物信息学分析鉴定了SPG分化过程中的差异表达基因, 明确了关键基因在转录和染色质水平的差异, 为SPG分化机制研究奠定了重要的理论基础。