蛋白质工程技术在生物药物研发中的应用研究

蛋白质工程技术是当下生物技术工程中的一个重要研究对象,在了解蛋白质结构和功能的前提下,运用生物学知识进行的一种特异性改造,进而得到具有新的特性的蛋白质。蛋白质工程技术一般是对已经存在的或人们已经发现的其他蛋白质进行模式分析或采取分子进化等手段,简要对生物药物研发应用蛋白质工程技术进行分析。

重组人白介素-22生物学活性检测方法研究

目的建立重组人白介素-22(IL-22)生物学活性的检测方法。方法将pSTAT3-TA-Luc质粒与pcDNA3.1质粒共转染HepG2细胞,经G418筛选出稳定转染的HepG2/STAT3细胞株。用重组人IL-22刺激细胞,定量检测荧光强度确定IL-22的活性。通过正交实验确定最佳检测条件,观察此方法的重复性和特异性,并进行方法对比。结果最佳检测条件为细胞密度4×105/mL,加重组人IL-22刺激4h,加入萤光素酶底物50μL。本方法检测结果为半数有效量(ED50)=16.89ng/mL,变异系数(RSD)=7.09%。中和抗体实验证实其特异性好。与ELISA法比较,该方法稳定性更好,耗时少且价格更便宜。结论选择萤光素酶为报告基因,将报告基因的检测与细胞的转录诱导机制相结合,构建了生物活性检测细胞株,建立了IL-22活性检测方法。

rhEPO-L-Fc融合蛋白的表达、生物活性和初步药动学分析

为了延长人促红细胞生成素(hEPO)体内半衰期以达到更好的药效,制备通过柔性接头相连接的重组人红细胞生成素-IgG1 Fc融合蛋白(rhEPO-L-Fc),并对其生物学活性和体内药动学进行初步研究。利用PCR技术构建rhEPO-L-Fc融合基因,克隆至表达载体pOptiVEC-TOPO?,在二氢叶酸还原酶缺陷型中国仓鼠卵巢细胞(CHO-dhfr?)表达。Protein A亲合层析柱纯化融合蛋白,SDS-PAGE、质谱、Western blotting鉴定表达产物,细胞增殖实验检测融合蛋白的体外活性,动物实验检测融合蛋白的体内活性和半衰期。成功构建pOptiVEC-TOPO?-rhEPO-L-Fc重组子,实现了在CHO细胞表达,纯化后的rhEPO-L-Fc融合蛋白经鉴定,其分子量和特异性均与理论值相符,能刺激体外培养的EPO依赖型细胞生长,ED50为2 ng/mL,且明显增加大鼠外周血网织红细胞数,体内消除半衰期达到27 h。rhEPO-L-Fc融合蛋白能延长hEPO体内半衰期,为其临床研究奠定了基础。

液相色谱法快速检测土壤和水中10种邻苯二甲酸酯

塑化剂对环境的污染随着塑料使用的增加日益严重。本研究使用QuEChERS方法指导邻苯二甲酸酯液相色谱检测方法的建立,同时检测了邻苯二甲酸二甲酯等10种塑化剂成分。分别考察了线性、回收率、重复性和定量限等方法学特性。结果表明该方法能够快速、简单、便宜、有效、可靠和安全地检测水土环境样品中的塑化剂含量。

药物分析和药物质量控制中高效液相色谱仪的运用

高效液相色谱分离技术是现代药物分析和质量控制的一种重要手段,它采用小粒径填料填充的色谱柱,运用高压运送流动相,从而使柱效高于常规的液相色谱,分辨率得到极大提高。而超高效液相色谱分析是在高效液相色谱的基础上,采用更小颗粒填料的色谱柱,从而使分辨率、分析时间得到不同程度的提高。这种方式也更好的对于研究药物产品或者药物控制进行质量把握。本文详细地论述了这种技术在不同的检测器中的不同作用,体现了在药物分析和药物质量控制中的方法。