转录因子SP1对急性T淋巴细胞白血病进程的影响

目的:研究转录因子SP1对支架蛋白ARRB1的转录调节及其在急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)中的作用。方法:构建p GL3-ARRB1-luc、p CDNA3.1-SP1及其他可能结合的转录因子质粒,采用双荧光素酶报告基因实验证明ARRB1启动子区与转录因子结合;利用慢病毒感染构建SP1过表达的稳定细胞株JK-SP1,RT-PCR及Western blot验证SP1与ARRB1表达的关系;进一步流式细胞术检测SP1对细胞凋亡、细胞周期以及细胞活性氧含量的作用。构建NCG小鼠异种移植模型,探讨SP1对白血病小鼠成模能力的影响。结果:p GL3-ARRB1-luc、p CDNA3.1-SP1质粒共转入HEK293T细胞后,虫荧光素高表达(P<0.001);同时,与对照组相比,稳定细胞株JK-SP1中ARRB1 m RNA水平、蛋白水平均增加(均P<0.01)。进一步体外实验结果显示,与对照组相比,JK-SP1细胞凋亡比例更高(x=22.78%),细胞周期多阻滞于G1期(63.00%),活性氧含量增加。体内实验证明,尾静脉输注JK-SP1细胞的NCG小鼠生存时间更长(平均33.8 d),肝脾肿瘤细胞浸润相对较少。结论:转录因子SP1通过直接结合于ARRB1启动子区,促进ARRB1转录与表达,进而延缓体内、体外T-ALL疾病进程。本研究完善了ARRB1调控T-ALL进程的机制并为新的靶向药物研发提供了理论依据。

儿童睾丸附件扭转手术治疗与保守治疗疗效观察

目的:总结儿童睾丸附件扭转患儿的临床特点,探讨手术治疗还是保守治疗对睾丸附件扭转的患儿更有益。方法:回顾性分析2017~2022年期间于重庆医科大学附属儿童医院就诊的睾丸附件扭转患儿的临床资料,分析不同治疗方法的疗效差异。结果:符合入组标准的睾丸附件扭转患儿有89例。发病年龄主要集中在8~11岁。有42例为左侧睾丸附件扭转,47例为右侧睾丸附件扭转。主要临床表现为阴囊疼痛(96.7%),阴囊红肿(95.5%)、阴囊皮温升高(83.1%)、睾丸上方结节(56.2%),阴囊外症状如发热(1.1%)、恶心呕吐(0%)极少,提睾反射消失(0%)极少。保守治疗组的治愈率为35.3%,手术治疗组的治愈率为100%;保守治疗组疼痛缓解时间为8.8天,手术治疗组疼痛缓解时间为2.9天;保守治疗组阴囊水肿的消失时间为13.2天,手术治疗组阴囊水肿消失时间为5.6天;保守治疗组治愈后有22例复发,手术治疗组术后随访有0例复发。两者在治愈率、疼痛缓解时间、阴囊水肿消失时间上有统计学差异。结论:睾丸附件扭转患儿手术治疗疗效上优于保守治疗。临床上若因阴囊急诊就诊可积极手术探查。

早发型与晚发型足月新生儿坏死性小肠结肠炎临床对比分析

目的探讨影响足月新生儿早发型及晚发型坏死性小肠结肠炎(NEC)发病及预后的相关因素。方法回顾分析1996年至2015年收治的253例足月NEC病例,NEC按照发病时间不同分为早发型(≤7天发病,n=150)及晚发型(>7天发病,n=103),比较两组围产期情况、合并症、并发症等。结果早发型组平均胎龄大于晚发型组(39.2±1.2对38.8±1.11),早发型组Ⅲ期NEC患病率(27.3%对12.6%)、腹膜炎(20.7%对8.7%)比例均高于晚发型组,差异有统计学意义(P均<0.05)。早发型组NECⅢ期手术治疗率、总病死率与晚发型组比较,差异无统计学意义(P均>0.05)。早发型组中,病死患儿Ⅲ期、腹膜炎、败血症、呼吸衰竭、肾功能损害、休克、多器官功能障碍比例均高于存活患儿;晚发型组中,病死患儿Ⅲ期NEC、腹膜炎、败血症、呼吸衰竭、休克比例均高于存活患儿,差异有统计学意义(P均<0.05)。Logistic回归分析发现,早发型组预后不良的危险因素为腹膜炎(OR=17.49,95%CI:5.89~51.93,P<0.001)及肾功能损害(OR=10.33,95%CI:2.7~154.17,P=0.003);晚发型组为腹膜炎(OR=20.58,95%CI:3.62~116.85,P=0.001)及呼吸衰竭(OR=12.03,95%CI:1.33~109.14,P=0.027)。结论足月儿早发型NEC病情较晚发型更重;腹膜炎、肾衰竭是导致足月早发型NEC患儿预后不良的危险因素,腹膜炎、呼吸衰竭则是导致晚发型NEC患儿预后不良的危险因素。

5例STAT1功能获得性基因突变儿童慢性皮肤黏膜念珠菌病临床特点及生化免疫分析

目的分析STAT1功能获得性儿童慢性皮肤黏膜念珠菌病(CMC)的临床特点、生化及免疫学检查结果。方法回顾分析2016—2019年经基因检查确诊的5例CMC患儿的临床资料。结果5例患者,男4例,女1例,平均发病年龄(4.2±3.6)月龄(1~10月龄)。5例患儿均有黏膜感染,4例反复呼吸道感染,4例皮肤感染,3例指趾甲反复念珠菌感染,2例桥本甲状腺炎,甲状腺功能低下、甲状旁腺功能减低、肾上腺皮质功能减退、矮小症各1例。5例患儿基因突变位点均为STAT1,分别为c.849G>T、c.988C>A、c.862A>G、c.1154C>T、c.974T>A。5例患儿的IgG、IgE无异常,2例IgA、IgM降低明显。CD3+细胞减少;CD3+CD4+细胞减少、CD19细胞明显减少各1例。5例患儿的血细胞计数均无异常,2例抗甲状腺球蛋白抗体、抗甲状腺过氧化酶抗体明显增高,甲状旁腺激素降低、皮质醇降低各1例。2例G试验阳性,但无侵袭性真菌感染表现。结论反复皮肤、黏膜、指趾甲念珠菌感染是CMC的重要临床表现,免疫功能筛查有提示意义,须基因检测才能确诊。

儿童髋关节一过性滑膜炎发病时间特征及与气候因素的相关性

目的探讨儿童髋关节一过性滑膜炎(TSH)发病的时间特征,及其发病情况与气候因素之间的联系。方法选取2008年至2012年收治的1 401例TSH患儿的临床资料,收集同期的月平均气温、月平均气压、月平均湿度、月平均风速、月日照总时数和月总降水量等气象资料,采用卡方-拟合优度检验分析TSH发病的时间特征,运用相关分析和逐步线性回归方法探讨TSH发病与各气象因素的关系。结果 TSH发病以春夏季为主(P<0.001),3月份是发病高峰(P<0.001),10月份发病数最少(P<0.001)。TSH的月发病数与月平均湿度呈负相关(r=-0.466,P<0.001),与月平均风速、月日照总时数呈正相关(r=0.286、0.262,P均<0.05);逐步回归分析中只有月平均湿度对进入回归模型(β=-0.470,P<0.001)。结论 TSH的发病具有明显的时间周期性,在低湿度的气象条件下更容易发生。

小儿氨基酸(19AA-1)用于新生儿严重消化道畸形术后全静脉营养支持的安全性及有效性

目的:观察19AA-1氨基酸作为全静脉营养的氮源对严重消化道畸形患儿术后营养支持的疗效及安全性,为临床新生儿外科严重消化道畸形手术后完全静脉营养实施配方提供实验依据。方法:选取我院2011年10月至2014年4月新生儿外科重症监护病房收治的严重消化道畸形需手术治疗的患儿,随机分为观察组和对照组各50例,观察组为使用小儿氨基酸(19AA-1)为氮源的全肠外营养(TPN),对照组使用其他氨基酸为氮源的TPN,比较两组患儿术前、术后7 d的营养状况指标、肝肾功能指标以及患儿术后出现的并发症及总住院时间等。结果:两组患儿性别、胎龄、体质量、分娩方式、身长、头围等比较差异均无统计学意义(P>0.05);术前两组患儿的营养指标包括体质量、白蛋白(Alb)、总蛋白(TP)、前白蛋白(PA)比较差异均无统计学意义(P>0.05),而在术后7 d时,观察组患儿的体质量、Alb、TP、PA水平均显著高于对照组患儿(P<0.01);两组患儿术前、术后7 d的肝肾功能指标(ALT、AST、TBIL、BUN、CREA等)比较差异均无统计学意义(P>0.05);两组患儿的术后并发症发生率比较差异无统计学意义,观察组患儿的平均住院时间短于对照组(P<0.01)。结论:严重消化道畸形术后采用19AA-1为氮源的TPN比使用其他氨基酸为氮源的TPN改善患儿营养状况更佳,住院时间更短,对患儿的肝肾功能影响较小,术后并发症较少,安全性高。

64例儿童睾丸畸胎瘤病例分析

目的：分析儿童睾丸畸胎瘤的诊断与治疗，旨在提高其临床诊治水平。方法：回顾性分析本院1995—2014年收治的64例儿童睾丸畸胎瘤的临床资料。结果：61例以无痛性阴囊包块就诊，查体均有沉重感；3例因阴囊空虚诊断为隐睾时发现。术前46例甲胎蛋白（AFP）明显升高，18例AFP值正常。超声检查提示异常混杂回声区，内有钙化成分或液化坏死。阴囊x片检查28例有点片状、弧形高密度影。40例于我院行睾丸肿瘤剜除术（TSS），1例院外手术，20例行高位瘤睾切除术，3例放弃手术治疗。病理检查成熟畸胎瘤均可见成熟的3个胚层，未成熟畸胎瘤可见原始神经管等未成熟胚层成分。60例手术患儿中11例为不成熟畸胎瘤，49例成熟畸胎瘤。成熟畸胎瘤术后无需化疗，未成熟畸胎瘤术后采用顺铂＋依托泊苷＋博来霉素（Cisplatin，Etoposide，Bleomy-cin，PEB）方案化疗。随访2年均未见复发或转移。结论：儿童睾丸畸胎瘤多因无痛性阴囊包块就诊，查体包块有沉重感；AFP多有异常，超声及阴囊平片对诊断有一定帮助。手术方案主要为TSS，术中冰冻能协助术者选择手术范围。成熟畸胎瘤术后无需化疗，未成熟畸胎瘤术后应配合化疗。

低氧环境下丙泊酚可增加PC12细胞的凋亡

目的探讨低氧环境下丙泊酚对PC12细胞株凋亡的影响及机制。方法将PC12细胞接种于培养板中,采用随机数字表法,将其随机分为6组:低氧对照组(CH组)、空气对照组(CA组)和氧气对照组(CO组),对照组加入脂肪乳浓度10μmol/L。丙泊酚低氧组(PH组)、丙泊酚空气组(PA组)和丙泊酚氧气组(PO组),丙泊酚浓度为10μmol/L。药物处理完毕后分别放入低氧(5%O_2),空气和氧气(35%O_2)环境的细胞培养箱培养,8 h后流式检测细胞凋亡情况,检测细胞内ROS水平和细胞SOD酶活力。结果与CA组比较,PA组细胞凋亡增加,活性氧簇(ROS)升高,超氧化物歧化酶(SOD)活力增强;与CH组比较,PH组细胞凋亡增加,ROS升高,SOD活力增强;与CO组比较,PO组细胞凋亡增加,ROS升高,SOD活力增强;与PA组比较,PH细胞凋亡增加,ROS升高,SOD活力增强;CO组、CA组和CH组上述各指标差异无统计学意义。结论低氧环境下丙泊酚可通过氧化应激损伤导致PC12细胞凋亡增加。

对比多种眼药治疗先天性上睑下垂术后相关性干眼症的临床疗效

目的比较妥布霉素眼膏单独使用及联合小牛血去蛋白提取物眼用凝胶、聚乙二醇滴眼液治疗先天性上睑下垂术后相关性干眼症的临床疗效。方法采用回顾性研究,对2012年8月~2016年5月于重庆医科大学附属儿童医院眼科诊断为先天性上睑下垂并接受额肌瓣悬吊术的术后住院患儿478例(640只眼)的临床资料进行统计分析。根据上睑下垂程度分为轻、中、重度3类,根据术后单独使用妥布霉素眼膏(A组),妥布霉素联合小牛血去蛋白提取物眼用凝胶(B组),妥布霉素联合聚乙二醇滴眼液分为三组(C组)。分别统计三组患儿术后第3天的症状评分、角膜荧光素染色评分(FL)、泪膜破裂试验(BUT)及基础泪液分泌试验(Sit)。结果对比A组,B组在轻、中、重3种不同程度的上睑下垂术后干眼有显著疗效(P<0.05);而C组在轻、中程度的上睑下垂术后的干眼有明显疗效(P<0.05);B与C组进行比较,显示前者在治疗中、重度上睑下垂术后疗效更好(P<0.05)。结论相较于单独使用妥布霉素眼膏,额肌瓣悬吊术后使用妥布霉素眼膏联合小牛血去蛋白提取物眼用凝胶或聚乙二醇滴眼液对术后并发的干眼症具有明显优越性,且联合使用小牛血去蛋白提取物眼用凝胶更利于减轻干眼症症状及预防暴露性角膜炎。

儿童嗜酸细胞性胃肠炎的诊治体会并文献复习

目的探讨儿童嗜酸细胞性胃肠炎(eosinophilic gastroenteritis,EG)的临床表现、诊断和治疗.方法回顾性分析2012-04/2016-04重庆医科大学附属儿童医院消化内科住院并确诊的10例E G患儿的临床表现、实验室检查、内镜检查及黏膜组织病理学、治疗及预后,并结合文献复习进行分析.结果10例患儿主要症状为腹痛4例(40%)、腹泻4例(40%)、腹胀2例(20%)、呕吐2例(20%,伴有呕血)、血便2例(20%)、浮肿2例(20%)等.9例(90%)外周血白细胞升高,7例(70%)血小板升高,9例(90%)嗜酸细胞显著升高,4例(40%)大便隐血阳性.腹部彩超:2例肝脏稍肿大,2例腹腔中量积液,1例胃潴留、肠腔淤胀.胃镜检查9例,结肠镜检查1例.胃镜下可见黏膜充血、水肿,伴点或片状糜烂、溃疡,部分黏膜覆薄白苔;结肠镜下可见黏膜充血水肿、红斑和浅表溃疡.病理学检查:发现黏膜较多嗜酸细胞浸润(均≥20个每高倍视野),2例患儿腹水发现大量嗜酸细胞.临床分型:黏膜病变型8例,浆膜病变型2例.给予饮食治疗(氨基酸配方奶粉)和/或药物治疗(糖皮质激素、白三烯受体拮抗剂、地氯雷他定等),均好转出院,9例无症状复发,1例因进食快餐食品后症状复发.结论儿童EG临床表现多样,绝大多数患儿外周血嗜酸细胞升高,内镜和黏膜组织病理学检查对EG的确诊有重要意义,饮食干预对部分儿童EG治疗有效,糖皮质激素治疗效果好.

HIF-1α基因启动子-1946位点基因多态性与紫绀型先天性心脏病低氧耐受的相关性

目的研究低氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因多态性与紫绀型先天性心脏病(CCHD)低氧耐受能力是否具有相关性。方法用靶向捕获技术,对97例CCHD患儿和108例非紫绀型先天性心脏病(ACHD)患儿HIF-1α基因二代测序;生物信息学分析后找出差异分布的多态位点;用Sanger测序验证。针对HIF-1α启动子区多态位点,构建不同基因型HIF-1α启动子-荧光素酶报告基因载体;转染HEK293T和H9C2细胞;用双荧光素酶报告基因检测系统,分析HIF-1α不同基因型启动子活性。结果 CCHD组HIF-1α启动子区-1 946位点A碱基删除变异频率高于ACHD组(P<0.05)。与AA基因型比较,DD基因型HIF-1α启动子转录活性更高(P<0.05)。结论 HIF-1α基因-1 946位点与CCHD耐受低氧能力相关,DD基因型HIF-1α转录活性明显增高,可能是耐受低氧的分子遗传学机制之一。

化疗对于肾母细胞瘤肺转移灶的疗效观察

目的观察肾母细胞瘤(WT)肺转移灶的转归,探讨不同化疗方案的疗效。方法回顾性分析2012年至2020年就诊并规律随访的WT肺转移患儿的临床资料,分析肿瘤肺转移灶对不同化疗的应答差异。结果20例WT肺转移患儿,男11例、女9例,中位年龄38.0(20.0~5.8)月;其中预后良好型17例,预后不良型3例;单肺转移13例,双肺转移7例;初诊时肿瘤分期Ⅰ期1例,Ⅱ期5例,Ⅲ期3例,Ⅳ期9例,2例患儿外院首诊分期不明;12例术前发现肺转移,8例术后发现;合并其他远处转移者8例;化疗后转移应答为8例完全缓解,4例部分缓解,4例稳定,4例进展。采用有序logistic回归分析进行多因素分析,结果显示化疗方案CCCG-WT-2016的偏回归系数为-2.05,并呈现出0.05检验水准的显著性(Z=-2.03,P=0.043),采用CCCG-WT-2016方案化疗患儿的肺转移灶转移应答优于NWTS-5方案。结论采用WT-2016方案化疗的患儿转移应答明显优于采用NWTS-5方案化疗的患儿。

糖皮质激素调控Keap1-Nrf2通路减轻哮喘小鼠肺氧化应激反应的作用研究

目的探讨哮喘小鼠肺氧化应激水平以及地塞米松对其影响及可能的机制,为哮喘治疗提供新的方向。方法将30只6-8周龄C57BL/6雌鼠随机分为对照组、哮喘组及地塞米松组,利用屋尘螨(House dust mites,HDM)建立哮喘小鼠模型,检测哮喘激发后或地塞米松干预后,各组小鼠脂质过氧化物代谢产物丙二醛(Malondialdehyde,MDA)、氧化型谷胱甘肽(Oxidized glutathione,GSSG)的表达水平。利用qPCR检测小鼠肺部氧化应激转录因子NF-E2相关因子2(Nuclear factor erythroid 2-related factor2,Nrf2)和血红素加氧酶1(Heme oxygenase-1,HO-1)表达情况。免疫组化和免疫荧光检测小鼠肺部Nrf2蛋白表达水平。Western blot检测Nrf2-Keap1信号通路改变情况。结果哮喘组小鼠肺组织中MDA含量较对照组明显升高(P<0.01),地塞米松组MDA较哮喘组明显降低(P<0.05);哮喘小鼠的GSSG含量较对照组升高(P<0.01),地塞米松组小鼠GSSG含量较哮喘组降低(P<0.05)。qPCR结果显示哮喘组小鼠Nrf2和HO-1mRNA表达均较对照组明显增加(P<0.05),地塞米松组小鼠Nrf2和HO-1 mRNA表达较哮喘组降低(P<0.05)。免疫组化和免疫荧光检测结果显示哮喘组小鼠肺组织中Nrf2蛋白表达较对照组明显增加(P<0.01),地塞米松组小鼠肺组织Nrf2蛋白表达较哮喘明显减少(P<0.01)。Western blot结果显示地塞米松组肺组织Nrf2蛋白表达较哮喘组明显降低(P<0.05),Keap1蛋白表达较哮喘组明显增加(P<0.05)。结论哮喘小鼠中氧化应激水平增加,地塞米松可能通过调节Keap1-Nrf2通路,影响下游抗氧化反应元件的表达,从而抑制哮喘小鼠肺部氧化应激水平。

影响新生儿坏死性小肠结肠炎严重程度的危险因素

目的:探讨影响新生儿坏死性小肠结肠炎(NEC)患儿疾病严重程度的危险因素。方法:采用回顾性研究,选择2010年1月至2016年5月在我院新生儿中心住院的新生儿,符合NEC诊断且Bell分期≥Ⅱ期。采用单因素分析和二元Logistic回归分析,讨论NEC严重程度相关的危险因素。结果:本研究共纳入197例新生儿,其中NECⅡ期组121例,Ⅲ期组76例;单因素分析结果表明:胎龄、发病日龄、溶血症、败血症、CRP>8 mg/L、休克、血小板减少症、确诊前胃肠减压的时间两组比较差异均有统计学意义(P均<0. 05);将单因素分析提示差异有统计学意义的变量,进一步进行二元Logistic回归分析,得到发病日龄(OR:0. 958,95%CI:0. 927～0. 991,P<0. 05)、胎龄(OR:0. 872,95%CI:0. 784～0. 971,P<0. 05)和确诊前胃肠减压的时间(OR:1. 377,95%CI:1. 054～1. 801,P<0. 05)为影响NEC严重程度的危险因素。结论:发病日龄及胎龄越小、确诊前胃肠减压的时间越长的患儿越容易发展至NECⅢ期。因此,应高度重视胎龄小的NEC患儿,缩短胃肠减压的时间,以降低NEC患儿病情的严重程度。

西酞普兰对APP23小鼠学习记忆及Aβ神经性病变的影响

目的探讨早期给予低剂量西酞普兰对阿尔茨海默病(AD)小鼠学习记忆和β淀粉样蛋白(Aβ)病理性变化的影响。方法将5月龄APP23转基因小鼠30只随机分为西酞普兰组和对照组,每组15只。西酞普兰组给予西酞普兰10 mg/kg腹腔注射,对照组腹腔注射等容量的生理盐水,连续3个月。最后一次药物干预后24 h行Morris水迷宫实验,测定小鼠空间学习与记忆能力。水迷宫实验结束后断头取脑,ELISA法检测脑组织中Aβ40和Aβ42水平,免疫组织化学检测老年斑数量,Western blotting检测海马Aβ前体(APP)、β位分解酶1(BACE1)和β-C末端片段(β-CTF)C99/C89的表达水平。结果与对照组比较,西酞普兰组小鼠隐蔽平台逃避潜伏期明显缩短,活动总路径减少,穿越平台次数增加(P<0.05);西酞普兰组小鼠脑组织内Aβ40和Aβ42水平明显低于对照组,老年斑数量明显减少(P<0.05),但APP、BACE1和β-CTF蛋白表达未见明显改变(P>0.05)。结论早期低剂量长疗程给予西酞普兰干预可改善AD小鼠空间学习记忆能力,减轻Aβ神经性病变,其机制可能与西酞普兰上调α分泌酶水平、促进APP在该切割途径代谢增强有关。

敲除Brg1基因对小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞数量和功能的影响及其机制研究

目的研究染色质重构复合物核心催化亚基(Brahma-related gene 1,Brg1)对C57BL/6小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞数量和功能的影响及其可能的机制。方法取6~8周龄雌性野生型C57BL/6小鼠(Wild type,WT)及Ⅱ型肺泡上皮细胞(alveolar epithelial cell Ⅱ,AECⅡs)上特异性敲除Brg1的C57BL/6小鼠(Brg1fl/fl)作为实验对象,每组选取8只小鼠,收取标本,利用免疫组化及免疫荧光分析肺组织中表面活性物质相关蛋白C(surfactant-associated protein C,SFTPC)阳性的细胞率,流式细胞术分析小鼠肺组织中表面活性物质蛋白C前体蛋白(prosurfactant protein C,pro SP-C)阳性的细胞(即AECⅡs)数量。Western blot检测各组小鼠肺组织中pro SP-C、SFTPC、表面活性物质相关蛋白A(surfactant-associated protein A,SFTPA)、表面活性物质相关蛋白D(surfactant-associated protein D,SFTPD)的表达水平。Western blot检测细胞周期蛋白D1(CyclinD1)表达及增殖相关信号转导途径中关键蛋白EGFR、p-EGFR、PI3K、p-PI3K、AKT、p-AKT及NF-κB p65的活化水平。结果抗SFTPC免疫组化、免疫荧光显示其在肺泡上皮表达较WT小鼠增多(P<0.05);流式细胞术显示Brg1fl/fl组小鼠肺组织中pro SP-C+的细胞百分比较WT小鼠明显增高(P<0.05),Western blot检测结果显示AECⅡs的功能性蛋白pro SP-C、SFTPC、SFTPA及SFTPD在Brg1^fl/fl小鼠中明显增多;Brg1^fl/fl组小鼠肺组织中NF-κB p65及周期蛋白CyclinD1的表达增加,且p-EGFR/EGFR、p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT百分比显著提高,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论特异性敲除C57BL/6小鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞中的Brg1可促使AECⅡs数量和分泌功能的增加,其可能机制与敲除Brg1促进EGFR/PI3K/AKT/NF-κB信号通路的激活,且与增殖周期蛋白CyclinD1表达的增加有关。

新生儿Prader-Willi综合征临床诊疗思路

目的总结新生儿Prader-Willi综合征(Prader–Willi syndrome,PWS)的临床特征,并构建其临床诊断思路,为临床早期筛选并进一步基因诊断提供帮助。方法收集2014年1月至2018年5月在重庆医科大学附属儿童医院新生儿科住院并诊断为PWS的患儿临床资料,分析患儿相关临床表现,并复习国内有关新生儿期PWS临床表现的报道,总结其最常见的临床表现,构建临床诊疗思路。结果本院15例患儿中剖宫产10例(66.7%)。11例(73.3%)为小于胎龄儿(small for gestational age,SGA)。临床表现上15例(100%)患儿均有肌张力低下、吸吮能力差、喂养困难、反应差、少动、哭声弱。10例有外生殖器小或发育不全:9例男性患儿均有性腺发育不良,其中7例有隐睾;6例女性患儿中有1例表现为大阴唇小。皮肤色素减低6例(40.0%)。特殊面容1例(6.7%)。纳入的17篇文献中85例新生儿PWS临床表现依次为:肌张力低下(100%,85/85)、哭声弱(95.3%,81/85)、喂养困难(90.6%,77/85)、皮肤色素减低(78.5%,51/65)、外生殖器发育不良(72.9%,62/85)、剖宫产(71.4%,50/70)、特殊面容(67.1%,57/85)、胎动减少(37.0%,20/54)、SGA(33.3%,24/72)、低出生体重(21.2%,11/52)、羊水过多(20.3%,14/69)、早产(18.1%,15/83)。结论新生儿时期不明原因的肌张力低下需高度警惕PWS可能,识别临床表现,尽早行基因检测确诊,以便早期干预,改善预后。

运用无创容量指标评价儿童先天性心脏病术后液体反应性

目的运用连续多普勒超声心排量监测仪(ultrasonic cardiac output monitor,USCOM)对先天性心脏病(先心病)术后患儿液体治疗前后进行血流动力学监测,比较血流动力学指标如中心静脉压(central venous pressure,CVP)、每搏量变异度(stroke volume variation,SVV)、校正血流时间(corrected flow time,FTc)及肌力指数(smith madigan inotropy index,SMII)等预测先心病术后患儿液体反应性的准确性。方法应用USCOM对先心病术后患儿进行液体治疗前后血流动力学的监测。根据液体治疗前后的每搏输出量指数(stroke volume index,SVI)计算每搏输出量指数变化率(ΔSVI),根据正性肌力药物的使用情况计算出正性肌力药物评分(inotropic scores,IS)。定义液体治疗后ΔSVI≥15%为液体治疗有反应组,<15%为液体治疗无反应组;根据正性肌力药物的使用情况分亚组:IS≤10组及IS>10组。结果 (1)全部患儿中仅SVV的ROC曲线下面积(area under the ROC curve,AUC)具有评估液体反应性的价值(AUC为0.776,P<0.01);(2)亚组中:IS≤10组及IS>10组中也表现为仅SVV的AUC具有评估液体反应性的价值(AUC分别为0.732,P<0.05及0.813,P<0.01)。结论 (1)用USCOM监测的SVV可以预测先心病术后的液体反应性,而CVP、FTc及SMII均不能准确预测先心病术后的液体反应性;(2)亚组中,IS>10组SVV预测液体反应性的准确性要高于IS≤10组。

Piwi互作RNA的筛选及其在儿童肾母细胞瘤组织中的表达

目的探讨Piwi互作RNA(piRNA)在儿童肾母细胞瘤中的表达及临床意义。方法对Piwi样蛋白2(Piwil2)基因重编程人成纤维细胞所形成的肿瘤样干细胞进行高通量测序,筛选出差异表达piRNA,并利用miRanda软件预测其靶基因,对靶基因进行基因本体(GO)功能分析。采用qRT-PCR检测差异表达piRNA及其靶基因在34例肾母细胞瘤患儿肿瘤组织及癌旁正常肾组织标本中的表达,并分析差异表达piRNA及其靶基因与肾母细胞瘤临床病理特征的关系。结果通过高通量测序筛选出230个差异表达piRNA,利用miRanda软件预测出43个靶基因,经GO分析发现其参与的生物学过程主要为调节细胞钙离子浓度,分子功能主要为参与ATP酶的活动及多聚A尾RNA结合。选取5个未知的差异表达piRNA及其靶基因检测其在肾母细胞瘤肿瘤组织及癌旁正常组织中的表达情况,结果显示第13位未知上调piRNA(NU13)表达量在肿瘤组织中下调(P<0.01),其靶基因NOP56核糖核蛋白(NOP56)表达在肿瘤组织和癌旁正常组织中差异表达无统计学意义(P=0.58);第9位未知上调piRNA(NU9)表达量在肿瘤组织中下调(P<0.01),其靶基因40S核糖体蛋白S8(RPS8)基因在肿瘤组织和癌旁正常组织中差异表达无统计学意义(P=0.29);第5、7、9位未知下调piRNA(ND5、ND7、ND9)及其共同靶基因MT-RNR2样蛋白1(MTRNR2L1)基因的表达量在肿瘤组织中均下调(P均<0.01)。以上在儿童肾母细胞瘤组织中出现差异表达的piRNA及其靶基因与患儿年龄、性别、肿瘤临床分期、病理分型无明显相关性(P均>0.05)。结论piRNA NU9、NU13、ND5、ND7、ND9及靶基因MTRNR2L1在儿童肾母细胞瘤组织中出现差异表达,有望成为鉴别肾母细胞瘤与正常肾组织的标志物。

Mafb基因敲除小鼠的构建及其尿道下裂表型初步分析

目的利用成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)及其相关蛋白9(Cas9)构建v-maf肌筋膜纤维肉瘤癌基因同源物B(Mafb)基因敲除小鼠,初步研究该基因缺失对尿道发育的影响。方法根据CRISPR/Cas9技术原理构建Mafb基因敲除F0代C57BL/6J小鼠;经PCR及基因测序鉴定阳性的F0代小鼠与野生型C57BL/6J小鼠交配繁殖,获得F1代Mafb基因敲除杂合子(Mafb^(+/-))小鼠;Mafb^(+/-)小鼠间进行交配繁殖,获得Mafb基因敲除纯合子(Mafb^(-/-))胎鼠。收集雄性Mafb^(-/-)胎鼠阴茎组织,通过免疫荧光技术检测阴茎组织中Mafb蛋白表达情况及尿道缝处上皮钙黏蛋白(E-cadherin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达情况,扫描电子显微镜及石蜡切片H-E染色观察阴茎组织形态。结果成功构建、繁育Mafb^(+/-)小鼠并得到雄性Mafb^(-/-)胎鼠。免疫荧光检测结果显示雄性Mafb^(-/-)胎鼠阴茎组织中几乎不存在Mafb蛋白表达,且相较于野生型小鼠其尿道缝处E-cadherin蛋白表达明显降低、α-SMA蛋白表达明显增高;扫描电子显微镜及H-E染色显示雄性Mafb^(-/-)胎鼠为尿道下裂表型。结论成功构建Mafb基因敲除小鼠模型,该基因敲除可导致小鼠出现尿道下裂表型及尿道缝处细胞中E-cadherin和α-SMA的表达差异,为进一步研究该基因在尿道下裂发生机制中的作用奠定了基础。