低叶酸联合甲氨蝶呤诱导神经管畸形胎鼠的神经组织转录组学分析

目的利用低叶酸饲喂联合甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)诱导的小鼠神经管畸形(neural tube defects,NTDs)模型,分析孕9.5天胎鼠脑组织和脊髓组织基因转录表达的变化,探讨可能影响神经组织发育的功能基因及转录因子。方法将SPF级、6~8周龄健康雌性ICR小鼠分为两组,其中对照组采用正常饲喂,低叶酸联合MTX实验组采用低叶酸饲喂,4周后交配,受孕7.5天实验组以1.5mg/kg浓度腹腔注射MTX,受孕9.5天获取两组的胎鼠脑、脊髓组织,分别提取总RNA进行RNA-seq,采用DESeq软件筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),采用生物信息学方法分析实验组与对照组中影响神经组织发育的差异基因功能及转录因子。结果实验组与对照组比较,脑、脊髓组织基因转录组分别有939、879个DEGs。GO(gene ontology)功能分析显示,脑组织DEGs功能按生物学过程(biological process,BP)分类,上、下调的基因均主要集中在细胞过程、生物调节、发育过程;按细胞组分(cellular component,CC)分类,上、下调的基因均主要集中在细胞、细胞器相关组分;按分子功能(molecular function,MF)分类,上、下调的基因均主要集中在蛋白结合、转录调节活性。脊髓组织DEGs功能在各分类中结果与脑组织的相似。脑、脊髓组织的差异表达转录因子主要聚焦在zf-C2H2、bHLH、Homeobox、STAT等家族。结论低叶酸联合MTX能够引起胎鼠神经组织基因组的转录改变,DEGs功能主要与神经细胞发育、转录调节有关。影响神经发育的转录调节因子集中在zf-C2H2、bHLH、Homeobox、STAT家族。

基于RNA-seq的甲氨蝶呤处理sv129胚胎干细胞的转录组学分析

目的利用转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq)技术探讨抗叶酸代谢药物甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)处理的小鼠胚胎干细胞(mouse embryonic stem cells,mESC)基因转录表达的变化,并探讨其可能影响的生物学过程和关键信号通路。方法将mESC分为两组,其中对照组采用完全培养基培养,MTX组在此基础上加入0.12μmol/L MTX药物处理。MTX处理24 h分别收集细胞,提取总RNA进行RNA-seq,获得胚胎早期全基因转录组图谱并采用Deseq2软件筛选差异表达基因(differentially expressed genes,DEGs),采用生物信息学R软件包对MTX组与对照组进行差异基因的功能及通路分析。结果MTX组与对照组的转录组相比,共有365个DEGs,其中144个显著上调表达,221个显著下调。GO(Gene Ontology)功能富集分析显示,生物学过程(biological process,BP)分类集中在肌肉系统发育、肌肉收缩、肌纤维发育等肌肉系统发育过程,细胞组分(cellular component,CC)分类集中在细胞膜组分、肌原纤维、收缩纤维、肌丝、肌节等肌肉组分,分子功能(molecular function,MF)分类集中在跨膜转运蛋白结合活性及膜通道活性。KEGG(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes)生物功能分析显示DEGs显著性富集的通路在钙信号通路、紧密连接。结论抗叶酸代谢药物甲氨蝶呤能够引起mESC基因组的转录改变,DEGs功能主要与肌肉发育以及肌肉纤维发育相关,同时DEGs富集的关键信号通路主要有肌肉发育相关的膜通道的钙离子信号通路和紧密连接。

基于GAMLSS模型的北京地区儿童C反应蛋白百分位数分布曲线和参考值

目的 构建北京地区1个月~12岁儿童末梢全血C反应蛋白(CRP)百分位数曲线和参考值。方法 选取2015年1月—2020年6月首都儿科研究所健康儿童629名,检测其末梢全血CRP水平。按年龄分为<2岁组、2~<4岁组、4~<6岁组、6~<8岁组、8~<10岁组、10~<12岁组。应用GAMLSS模型绘制不同性别、年龄儿童CRP水平P_(50)、P_(75)、P_(90)、P_(95)、P_(97)和P_(99)百分位数标准曲线。结果 各组CRP数据均服从Box-Cox-t分布。<2岁组男童CRP水平高于女童,其他年龄组男、女童之间CRP差异无统计学意义(P>0.05)。<6岁男童的CRP水平随年龄增长而降低,6~12岁男童的CRP水平随年龄增长而升高;<9岁女童的CRP水平随年龄增长而升高,9~12岁女童的CRP水平随年龄增长而降低。结论 建立了北京地区1个月~12岁儿童末梢全血CRP的百分位数曲线图,男童和女童末梢全血CRP随年龄增长的变化趋势不同。

碳酸锂联合长春新碱促进儿童急性T淋巴细胞白血病细胞增殖抑制和凋亡

儿童急性T淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)是T系前体细胞发生恶性转化的一种侵袭性肿瘤,化疗药物的毒副作用及耐药性问题仍然是阻碍其治疗成功的难题。长春新碱(vincristine,VCR)是治疗儿童T-ALL疗效显著的传统化疗药物,但其副作用明显。碳酸锂(Li_(2)CO_(3))可增强其它化疗药物的疗效,但其联合VCR的研究未见报道。该研究旨在探讨Li_(2)CO_(3)联合VCR对2种儿童T-ALL细胞系CCRF-CEM和Jurkat细胞增殖、凋亡及细胞周期的作用。噻唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)比色法结果显示,与对照组比较,单用VCR或Li_(2)CO_(3),随着其浓度的增加,2种细胞存活率均逐渐降低(P<0.05)。2种细胞在相同Li_(2)CO_(3)浓度下存活率不同(P<0.01)。Li_(2)CO_(3)联合VCR处理细胞存活率与单独VCR组处理相比,2种细胞的细胞存活率和VCR的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))值降低,Li_(2)CO_(3)与VCR的2药相互作用指数(coefficient of drug interaction,CDI)均小于1。流式细胞仪检测结果发现,对照组、Li_(2)CO_(3)组、VCR组和Li_(2)CO_(3)联合VCR组,2种细胞Li_(2)CO_(3)联合VCR组的G_(2)/M期和凋亡细胞占比最高,Li_(2)CO_(3)联合VCR组和VCR组比,均存在显著性差异(P<0.05)。总之,我们的研究结果提示,Li_(2)CO_(3)与VCR联合促进T-ALL细胞增殖抑制,使细胞周期阻滞于G_(2)/M期,且促进细胞凋亡,结果为儿童T-ALL临床治疗及减少VCR毒副作用提供了新的实验依据,也为其药物研发提供新的思路。

Ⅰ型神经纤维瘤病相关信号通路及微环境组分异常

Ⅰ型神经纤维瘤病(neurofibromatosis type 1,NF1)是一种由NF1基因突变导致的常染色体显性遗传病,以多发皮肤咖啡斑和神经纤维瘤为主要特征,国际上针对NF1尚无规范治疗策略。NF 1基因庞大,其编码的神经纤维蛋白(neurofibromin,NF)参与细胞增殖调控,该病发病机制复杂,为药物研发带来较大挑战。在NF1信号通路方面,丝裂原活化蛋白激酶的激酶的激酶/丝裂原活化蛋白激酶的激酶/丝裂原活化蛋白激酶通路(RAF/MEK/ERK)、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白通路(PI3K/AKT/mTOR)、无翅蛋白/β联蛋白通路(WNT/β-catenin)、河马蛋白/转录共激活子/YES相关蛋白通路(HIPPO/TAZ/YAP)等均有研究,其中针对RAF/MEK/ERK通路的MEK1/2抑制剂药物已上市,即司美替尼(selumetinib),用于治疗NF1和不能手术的丛状神经纤维瘤(plexiform neurofibroma,PNF)患者。近年研究发现,NF1肿瘤微环境包括施万细胞(Schwann cells,SCs)及其前体、肥大细胞、巨噬细胞、T细胞、树突状细胞、细胞外基质和周围血管等,对NF1的发生发展发挥不可忽视的作用。现今NF1的治疗方法包括手术切除肿瘤、放射治疗和药物治疗,这些方法均有缺陷,迫切需要从NF1信号通路及肿瘤微环境等方面继续深入探索新的治疗药物。本文主要综述了NF1相关信号通路及肿瘤微环境的研究现状,重点讨论了NF1基因突变引起的信号通路改变以及肿瘤微环境的组分异常,并剖析了NF1疾病可能的发病机制,以期为临床NF1早期诊断、治疗、预防和药物研发提供新的思路。

阻塞性睡眠呼吸暂停和认知障碍:表观遗传学进展综述

阻塞性睡眠呼吸暂停(obstructive sleep apnea,OSA)属于慢性、复杂性、异质性呼吸系统疾病,主要特征是在夜间睡眠期间发生的上呼吸道反复塌陷。这种疾病会导致睡眠碎片化和认知行为缺陷等临床表现。OSA的典型病理生理改变是慢性间歇性缺氧(chronic intermittent hypoxia,CIH),CIH会造成不同程度的中枢神经系统病理学损伤和功能障碍。表观遗传学范畴涵盖DNA甲基化、组蛋白翻译后修饰和非编码RNA等,它们能够调控应激反应、细胞缺氧、炎症和代谢异常等过程。这些过程与OSA的发病机制和CIH的潜在驱动力有关。综述了OSA影响认知功能的表观遗传学研究进展,以及诊断及治疗进展,期望为未来深入探索OSA致病机制、找到药物治疗新靶点拓宽思路。

磷脂酰肌醇-4-磷酸在神经发育性疾病中的研究进展

磷脂酰肌醇-4-磷酸(phosphatidylinositol 4-phosphate,PI4P)是真核细胞中的一类执行多种生理功能的磷脂酰肌醇,在信号传导、膜重塑和运输等重要生物学功能中有着至关重要的作用,进而影响神经发育过程。PI4P动态平衡的维持需要PI4P生物合成、分解及细胞内其他信号分子共同完成。本文综述了PI4P在神经发育性疾病中的研究进展,以期为儿童神经发育性疾病的早期诊断、治疗及其防控提供新的方向。

北京与西宁两所医院儿童B族维生素水平分析

目的分析比较北京和西宁地区两所医院0~7岁儿童全血中维生素B1、B2、B6(VitB1、VitB2、VitB6)的营养状况,以期为儿童保健工作提供现实依据。方法选取2016年8月在首都儿科研究所、青海省妇女儿童医院门诊就诊,排除营养元素缺乏及罹患血液系统疾病的0~7岁140例儿童为研究对象,其中北京地区72例,西宁地区68例;根据年龄将儿童分为:婴儿组(0~<1岁)42例,幼儿组(1~3岁)60例,学龄前组(>3~7岁)38例;采集末梢全血40μL制备成全血干血斑,应用高效液相色谱—串联质谱法(LC-MS/MS)对干血斑中三种B族维生素(VitB1、VitB2、VitB6)水平进行定量分析。结果在140例受检儿童全血中,VitB1水平为2.86(2.07~4.49)ng/mL,VitB2水平为5.73ng/mL,VitB6水平为24.88(18.91~36.46)ng/mL。幼儿组儿童全血中VitB1、VitB2营养状况优于学龄前组及婴儿组儿童(H=14.41,P<0.05;F=9.84,P<0.05)。北京地区医院儿童全血中VitB2水平显著高于西宁地区医院儿童(t=4.89,P<0.05)。结论幼儿组全血中VitB1、VitB2含量高于婴儿组与学龄前组,来自北京地区医院儿童VitB2营养状况优于同年龄段西宁地区医院儿童。

PI3K/Akt信号通路在小鼠胚胎神经发育中的作用及机制

目的探究磷脂酰肌醇-3-激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶(phosphatidylinositol-3-kinase/serine-threonine kinase,PI3K/Akt)信号通路对小鼠胚胎神经发育的影响及作用机制,进一步阐明PI3K/Akt信号通路相关胚胎神经发育异常的分子机制。方法实验动物为C57BL/6J小鼠,胚胎第7.5天(embryonic day,E7.5)孕鼠随机分为6组,实验组分别腹腔注射12.5、25、50、75、100 mg/kg的LY294002(PI3K/Akt信号通路抑制剂),对照组注射生理盐水。E13.5解剖,观察小鼠胚胎畸形情况。确定最佳造模剂量后,取该组小鼠胚胎神经及脊柱样本,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测细胞凋亡及音猬因子(sonic hedgehog,Shh)信号通路关键基因的mRNA表达水平,采用免疫印迹法检测蛋白质表达水平。实验细胞选用小鼠神经干细胞NE-4C细胞系,采用噻唑兰法(methylthiazolyldiphenyl tetrazolium bromide,MTT)检测不同浓度LY294002处理后细胞存活情况;采用原位末端标记(TdT-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL)实验检测细胞凋亡;采用流式细胞术检测细胞周期。统计学方法采用单因素方差分析和Dunnett’s t检验。结果动物实验结果显示,LY294002给药组出现神经管畸形(neural tube defect,NTD)表型;50 mg/kg组的NTD发生率80.7%(46/57),均为脊髓脊膜膨出和脊柱裂,选为最佳造模剂量。RT-qPCR结果显示,与对照组相比,给药无畸形组、脊髓脊膜膨出组及脊柱裂组的细胞凋亡标志物肿瘤抑制基因(tumor suppressor gene P53,P53)和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶3(cysteinyl aspartate-specific proteinase 3,Caspase3)的相对mRNA表达均上升(P<0.01),磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸-3-激酶催化亚基α基因(phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate-3-kinase catalytic subunit alpha,PIK3CA)及Shh信号通路关键基因[平滑蛋白(smoothened,Smo)、神经胶质瘤相关癌基因同源物(glioma-associated oncogene homolog,Gli)1及Gli2]的相对mRNA表达均显著降低(P<0.01)。免疫印迹结果显示,与对照组相比,给药无畸形组、脊髓脊膜膨出组和脊柱裂组的PI3K、Gli2相对蛋白表达均降低(P<0.01);脊髓脊膜膨出组和脊柱裂组的Smo、Gli1相对蛋白表达均降低(P<0.01),但给药无畸形组与对照组比较差异无统计学意义。细胞实验结果显示,LY294002抑制细胞增殖,细胞周期阻滞在G1期,诱导NE-4C细胞凋亡。MTT检测结果显示,随着LY294002浓度的增大,对细胞存活的抑制作用越强。TUNEL染色结果显示,20μmol/L与25μmol/L处理组中阳性细胞数与总细胞数的比例均高于对照组(4.22±0.16、8.56±0.24、1.00±0.14,t值分别为6.225和15.089,P值均<0.001)。流式细胞术检测结果显示,随着LY294002浓度增加(0、20、25μmol/L),G1期细胞占总细胞的百分比显著升高[(53.1±3.1)%、(66.4±2.1)%、(76.3±1.6)%,F=31.627,P<0.001],S期与G2期细胞比例逐渐减少。结论在小鼠胚胎神经发育过程中,抑制PI3K/Akt信号通路导致Shh信号通路传导受到抑制,促进细胞凋亡,影响小鼠胚胎神经管闭合,导致NTD的发生。

北京市学龄前儿童园外身体活动及其社区家庭运动环境调查

目的了解北京市部分城区学龄前儿童园外身体活动现状并探究相关社区家庭运动环境,为园外儿童身体活动评估及干预提供依据。方法采用方便整群抽样方法于2018年5—6月在北京东城区招募3所幼儿园527名学龄前儿童,采用自编学龄前儿童身体活动问卷,调查儿童身体活动、电子屏幕、睡眠时间及社区家庭运动环境。同时参照《学龄前儿童(3~6岁)运动指南》对各类身体活动时间、户外活动时间、屏幕时间和睡眠时间达标率进行分析。结果上学日和周末儿童园外每天总活动时间分别为(86.39±59.75)min、(155.67±81.56)min。中高强度活动时间分别为(57.58±55.16)min、(83.14±61.22)min;户外活动时间分别为(67.77±46.26)min、(181.31±96.11)min;屏幕时间分别为(30.42±23.52)min、(51.06±41.25)min;睡眠时间分别为(10.94±0.83)h、(10.47±1.05)h。周末总活动时间、中高强度活动时间、户外活动时间、屏幕时间及睡眠时间达标率分别为30.9%、65.1%、81.7%、83.5%、80.2%。家庭运动养育环境得分与儿童睡眠时间和户外活动时间均呈显著正相关(r=0.110~0.270,P<0.05)。结论学龄前儿童存在园外身体活动普遍缺乏,中高强度活动不足、屏幕时间过多的问题。改善社区及家庭运动环境可能对儿童户外活动及睡眠时间有积极作用。

学龄前儿童身体活动水平与家长运动观念行为的关联

目的探究家长运动观念及行为对学龄前儿童身体活动的影响,为儿童家庭运动健康指导提供参考依据。方法2020年11—12月,采用整群方便抽样方法在北京、沈阳和西安各选择1所幼儿园共283名儿童进行调查。受试儿童连续1周配戴ActiGraph GT9X加速度计,收集儿童不同强度的身体活动时间;使用学龄前儿童园外运动行为问卷调查家长运动观念及行为。身体活动水平、身体活动达标率的性别差异分析采用t检验、Mann-Whitney U检验、χ^(2)检验;家长运动观念及行为与学龄前儿童身体活动之间的关系采用Spearman等级相关分析和多元线性回归分析。结果家长运动观念与儿童的平均每日中高强度身体活动(MVPA)、总身体活动(TPA)呈正相关(r=0.12~0.16);家长运动行为与儿童的平均每日TPA呈正相关(r=0.25)(P值均<0.05);多元线性回归分析显示,家长运动观念与男、女童平均每日MVPA和TPA均呈正性相关(B=0.65~0.83),而家长运动行为仅与男童平均每日MVPA、TPA呈正性相关(B=0.24~0.25)(P值均<0.05)。结论家长运动观念及行为可影响学龄前儿童身体活动水平,并呈现性别差异。今后家庭养育的运动指导,需考虑家长运动观念及行为因素,并注意儿童性别的影响。

体细胞变异对神经系统常见肿瘤和发育异常类疾病的致病性

在生物体发育过程中各种内源性及外源性因素均可造成DNA损伤,引起体细胞变异。研究表明体细胞变异对肿瘤具有致病性作用,而体细胞变异对神经系统发育异常类疾病的致病性鲜有报道。新一代测序技术的发展,尤其是全外显子测序、靶向深度测序的应用大大提高了低频体细胞变异检出的敏感性,使科研人员重新认识了体细胞变异在神经系统肿瘤和发育异常类疾病发生中的致病性。本文综述了体细胞变异在神经系统肿瘤和发育异常类疾病致病性方面的研究进展,旨在为今后研究该类疾病的遗传病因提供新的思路,同时也为新药开发提供理论依据。

5-氟尿嘧啶对神经管畸形胎鼠脑组织基因表达的影响

目的利用5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)诱导C57BL/6J小鼠神经管畸形(neural tube defects,NTDs),观察5-FU对NTDs胎鼠脑组织基因表达的影响。方法采用无特定病原体(specific pathogen free,SPF)级C57BL/6J小鼠,孕鼠随机分为实验组和对照组。在孕7.5 d时,实验组孕鼠腹腔注射12.5 mg/kg的5-FU(叶酸相关代谢通路中关键酶胸苷酸合成酶抑制剂);对照组孕鼠腹腔注射等体积的生理盐水。孕13.5 d时通过体视显微镜及HE染色观察胎鼠畸形及神经管发育情况。在此基础上利用表达谱芯片分析NTDs胎鼠脑组织中基因表达的变化,并利用实时荧光定量PCR进行验证。统计学方法采用t检验。结果实验组小鼠NTDs的发生率为42.3%(22/52),主要为露脑畸形;对照组无一例NTDs。HE染色可见NTDs胎鼠的端脑和后脑结构紊乱。表达谱芯片筛选出差异表达基因137个,其中表达上调的基因40个,表达下调的基因97个,这些基因主要参与了多器官发育、细胞增殖及分化等生物过程以及与脑部发育相关的重要通路。选择表达差异明显且与胚胎神经发育相关的基因Avp、Hes3和Wnt1进行实时荧光定量PCR验证,结果发现所验证的基因表达情况与表达谱芯片的结果一致。结论5-FU可能通过影响胚胎神经发育过程中与神经发育相关基因Avp、Hes3及Wnt1等的表达,进而导致NTDs的发生。

应用末梢全血干血斑评估学龄前儿童维生素A营养状况的可靠性研究

目的评估应用末梢全血干血斑(DBS)诊断边缘性维生素A(VA)缺乏(MVAD)的可靠性,为临床科学评估VA营养状况提供参考依据。方法2018年选择130名赵县地区2~7岁儿童,采集末梢全血制备干血斑,其中48名儿童同时采集静脉血浆。采用超高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS)检测两种生物基质中视黄醇水平。应用两种校正方法将干血斑视黄醇转化为其同源血浆中视黄醇水平。采用组内相关系数(ICC)和Bland-Altman评估转换后视黄醇水平与血浆视黄醇水平的一致性。应用敏感性、特异性、准确性指数(AI)、阳性预测值(PPV)和阴性预测值(NPV)评估DBS诊断MVAD的可靠性。结果DBS视黄醇经两种方法校正后与同源血浆中水平一致性良好,ICC值均大于0.8,其中系数校正后的等效血浆视黄醇更接近血浆真实值。应用系数校正后DBS视黄醇分析目标人群MVAD患病率为45.00%,与血浆视黄醇诊断的MVAD患病率一致(45.83%),系数校正后DBS视黄醇诊断MVAD的灵敏度及特异性分别为77.78%,81.82%,AI为80.00%,PPV为77.78%,NPV为81.82%。赵县130例2~7岁儿童VAD及MVAD患病率为3.08%,45.38%,大年龄组(5~7岁)儿童有更高的MVAD患病风险(51.22%,t=1.975,P=0.359)。结论DBS视黄醇经系数校正后可用于MVAD的诊断。赵县2~7岁儿童MVAD比例较高,应及时增补并加强监测。

基因组DNA甲基化的高效毛细管电泳定量检测

目的建立快速准确的高效毛细管电泳(HPCE)定量基因组DNA甲基化的方法。方法以含有十二烷基磺酸钠(SDS)的碳酸氢钠溶液作为背景电解质溶液,优化运行电压、柱温,对DNA组成单元脱氧核苷酸进行分离定量。结果 5种脱氧核糖核苷和5种核糖核苷在10 min内实现基线分离。脱氧胞苷(dC)的标准曲线为Y=172540.15X-6.19,相关系数(R)为0.999,线性范围从2×10^(-3)mol/L到2×10^(-1)mol/L。5-甲基脱氧胞苷(5 mdC)的标准曲线为Y=170271.74X-46.19,相关系数(R)为0.995,线性范围从1×10^(-4)mol/L到2×10^(-2)mol/L。日内相对标准偏差(RSD%)<5%,日间相对标准偏差(RSD%)<9%。5 mdC和dC的检测限均为1×10^(-5)mol/L。样品的甲基化程度以(5 mdC)含量占总脱氧胞苷(5 mdC+dC)的比率表示。应用本方法分析小牛胸腺DNA的甲基化水平,结果为6.18%,与本研究组所得液质联用(LC-MS/MS)的定量结果 (6.77%)和文献报导中应用液相色谱-紫外检测器(HPLC-UV)的检测结果 (6.26%)对比,一致性好。结论本研究建立的方法分析速度快,准确性高,稳定性好,灵敏度满足微量样本的检测需求,可以用于临床甲基化诊断。

维生素D与儿童感染性疾病相关性及其抗感染机制研究

维生素D是类固醇类激素超家族中的一员,除调节钙磷代谢,维持儿童骨骼健康的经典作用外,维生素D还具有重要的免疫调节作用。近年来多项研究表明,维生素D低水平与儿童多种感染性疾病的发生、进展相关,维生素D增补被用于治疗与预防多种儿童感染性疾病。本文就维生素D营养状况与儿童感染性疾病的相关性及其抗感染机制进行简要综述。

X染色体变异对男性精神发育迟滞致病性的研究进展

精神发育迟滞(旧称智力低下)作为儿科神经科常见的一组疾患,具有高度的遗传和表型异质性,大约25%~50%的精神发育迟滞是由遗传因素引起的,其中X染色体基因/基因组变异占25%~30%,导致X连锁的精神发育迟滞。X连锁的精神发育迟滞患者占所有精神发育迟滞患者的10%~15%以上,约20%~25%的男性精神发育迟滞归因于X连锁的精神发育迟滞。精神发育迟滞男女患病比例为1.3:1,这与男性只有一条X染色体的遗传背景有关。随着新一代基因组检测技术的快速发展和临床应用,尤其是全外显子测序、高深度测序、X染色体深度测序和全基因组芯片杂交,这些大大改善了精神发育迟滞患者的X染色体基因/基因组变异检出。本文综述了致精神发育迟滞的X染色体基因组/基因变异特点、其对男性精神发育迟滞的致病性,以及如何采用新测序技术提高检出率,旨在促进科研人员认识X染色体变异在男性精神发育迟滞的致病性,拓宽精神发育迟滞遗传病因的认识,同时也为遗传咨询和产前诊断提供理论依据。

PI3k/Akt/mTOR信号通路与儿童急性T淋巴细胞白血病

PI3k/Akt/m TOR信号通路在细胞生长、增殖和生理条件下生存起着核心作用。该信号通路被认为是一个有效的靶向治疗癌症的创新性治疗策略,其异常激活已被证实与急性T淋巴细胞性白血病(T-ALL)相关。尽管多药联合和大剂量化疗等治疗手段不断改进及各类造血干细胞移植的应用和推广,对耐药或复发T-ALL患者治疗效果仍然较差,该病的总体疗效和预后远不如常见的B细胞系淋巴细胞白血病。因此,迫切需要寻找更有效和更少细胞毒性的抗白血病靶向药物,本文就PI3k/Akt/m TOR信号通路与T-ALL关系的最新研究进展作一综述,以期为T-ALL发病的确切分子机制及治疗提供线索。

微量随机尿液中多种氨基酸和有机酸定量方法及其在维生素B12营养状况及相关代谢的初步应用

目的建立一种高效液相色谱-串联质谱同时定量微量随机尿液中多种氨基酸和有机酸的方法。方法10μl随机尿液样本经乙腈沉淀蛋白后使用饱和的盐酸正丁醇进行衍生化,衍生后的样本经ACE Excel 2 AQ(50×2.1 mm,2μm)色谱柱分离,采用电喷雾离子源,在正离子扫描和多反应监测模式下检测。参照现有指南,从灵敏度、特异性、准确度、精密度、回收率、基质效应、稳定性等方面完成系统方法学确证。并检测70例健康儿童、27例维生素B12可疑缺乏儿童及3例甲基丙二酸血症cblC型患儿尿液中的19种目标待测物。结果19种目标待测物定量下限为0.01~1.00μmol/L,标准曲线线性良好,R^(2)均>0.990。准确度良好(相对误差均<±15%),日内、日间精密度均<15%。分析时间为8 min,除精氨酸外,其余待测物未见明显基质效应,加标回收率为80.20%~114.97%,室温8 h和3个冻融循环稳定性良好。健康儿童尿液中目标待测物测定值在Labcorp实验室公布的儿童参考区间内,维生素B12可疑缺乏儿童尿液中甲基丙二酸(P=0.030)和同型半胱氨酸(P<0.001)水平显著高于健康儿童,甲基丙二酸血症cblC型患儿尿液中甲基丙二酸、甲基枸橼酸和同型半胱氨酸水平高于健康儿童中位数水平5.14~76.52倍。结论本研究建立的液相色谱-串联质谱同时定量微量随机尿液中多种氨基酸和有机酸的方法样本需求量小,分析时间短,可准确反映儿童尿液中目标待测物水平,可为维生素B12缺乏儿童尿液氨基酸及其代谢产物代谢特征研究提供数据支持。

自噬调节基因AMBRA1在神经管发育中的作用及机制研究进展

神经管畸形(NTDs)是在胚胎发育过程中,由于神经管闭合缺陷导致的先天性畸形。在神经管闭合过程中,自噬是必不可少的。许多研究表明,自噬/苄氯素1调节因子1基因(AMBRA1)编码的蛋白质在自噬调节过程中发挥着重要作用。AMBRA1基因缺失导致胚胎发育早期自噬损伤,发生严重NTDs表型。本文从自噬角度对AMBRA1基因在神经管发育过程中的作用及其机制进行综述,以期为进一步阐明NTDs的发生机制提供新思路。