安菲博肽生物活性测定

目的筛选并建立安菲博肽生物学活性测定方法。方法通过对比光学比浊法、电阻法、连续血小板计数法,确定以连续血小板计数法检测安菲博肽生物活性,并对检测方法进行验证。结果以光学比浊法、电阻法、连续血小板计数法检测安菲博肽生物活性的RSD分别为10.3%、14.0%和3.6%;6份平行供试品的重复性RSD为11.0%;不同人员12份供试品的中间精密度RSD为9.8%;安菲博肽在0.3~0.5 U范围内,抑制率呈线性关系,相关系数>0.990,测定3批安菲博肽的活性,抑制率49.9%~53.6%,活性良好。结论所建立的连续血小板计数法检测安菲博肽生物活性,操作简便,专属性、准确度和精密度符合生物制品活性测定的要求,可用于安菲博肽活性的质量控制。

抗血小板溶栓素对局灶性脑缺血/再灌注大鼠脑损伤的作用观察

目的:观察抗血小板溶栓素(anti-platelet thrombolysin,APT)对缺血性脑损伤的保护作用并初步探讨其作用机制。方法:SD大鼠,随机分为假手术组(Sham)、模型组(缺血再灌注组)、阳性组(依达拉奉注射液)、APT高、中、低组。双侧颈动脉结扎,建立脑缺血模型,测定大鼠脑含水量,HE染色观察脑组织病理改变;线栓法建立大鼠脑缺血/再灌注模型,进行行为学评分,酶联免疫法(ELISA)及免疫组化测定脑组织中Toll样受体4(TLR4)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)、Bax蛋白含量。结果:与模型组比较,APT高、中剂量组可明显改善缺血再灌注后大鼠神经功能障碍症状,降低脑水肿程度,改善缺血后脑组织的病理改变,明显降低缺血后脑组织中TLR4、JNK、Bax蛋白表达。结论:APT对缺血性脑损伤有较好的保护作用,其机制可能与抑制脑组织中TLR4/JNK/Bax信号通路表达,从而抑制细胞凋亡有关。

抗血小板溶栓素对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用机制研究

目的:探讨抗血小板溶栓素(anti-platelet thrombolysin,APT)对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用的机制。方法:采用TLR4-siRNA在体转染技术,下调大鼠脑组织中Toll样受体4(TLR4)蛋白表达。分别取野生型和TLR4下调的SD大鼠,随机分为假手术组,模型组,TLR4阻断剂(TAK-242 2 mg/kg)组,APT高、中、低组(0. 02、0. 01、0. 005 mg/kg),每组8只。线拴法建立大鼠局灶性脑缺血/再灌注损伤模型,G-LISA法测定大鼠脑组织中RhoA蛋白活性,Western blot法测定脑组织中TLR4、RhoA相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK1/2)、磷酸化的c-Jun氨基末端激酶(pJNK)蛋白表达。结果:与对照组比较,TLR4-siRNA在体转染大鼠脑组织中TLR4蛋白表达明显下降;在野生型大鼠中,与模型组比较,抗血小板溶栓素可明显降低脑组织中TLR4蛋白表达,抑制RhoA活性,减少ROCK1/2、p-JNK蛋白表达;在TLR4下调大鼠中,与模型组比较,APT对脑组织中RhoA活性,ROCK1/2、p-JNK蛋白表达无明显影响。结论:抗血小板溶栓素对大鼠脑缺血再灌注损伤保护作用机制主要与其抑制TLR4/RhoA/ROCK信号通路有关。

离子色谱法测定伊班膦酸钠注射液主成分的方法探讨

为建立一种药物伊班膦酸钠注射液主成分-伊班膦酸的离子色谱分析方法,采用Ion Pac AS18阴离子交换色谱柱,利用在线淋洗液发生器自动产生氢氧化钾梯度淋洗液(12~70 mmol·L^(-1),时间程序为17 min),并使用自动再生抑制型电导检测。结果表明,伊班膦酸浓度在0~75.25?g·m L^(-1)范围内,线性相关系数R2=0.9995,呈现显著的线性相关关系;供试液重复进样5次,峰面积RSD为0.21%,保留时间RSD为0.01%,理论板数均大于50 000,方法系统适用性良好;5份供试样品溶液伊班膦酸含量的RSD值为0.80%,小于等于2.0%,方法重复性良好;供试样品3个浓度水平的回收率均在99%~101%之间,加标回收率试验的RSD均小于1.00%,符合药品规定要求。该方法稳定、重复性好且回收率高,可满足伊班膦酸钠注射液中主成分含量的测定要求。

结直肠癌中葡萄糖转运蛋白-12作为化疗联合用药靶点的研究

目的研究葡萄糖转运蛋白-12(GLUT12)在结直肠癌(CRC)细胞和组织中的表达与功能,探讨其作为联合用药治疗靶点的可能性。方法分别采用RT-PCR和蛋白免疫印迹法检测CRC及正常结肠中GLUT12基因和蛋白水平。通过荧光免疫及蛋白印迹法观察槲皮素(QC)对肿瘤细胞中GLUT12定位的调节作用。四氮唑(MTT)比色法和克隆形成实验(CFA)观察QC和奥沙利铂(OXA)联合使用对CRC细胞增殖的影响。结果 GLUT12基因在肿瘤组织中的相对表达水平高于正常组织[(3. 2±0. 3) vs(0. 5±0. 6),P <0. 05]。高糖培养液能改变GLUT12在细胞中的定位及表达水平,QC能抑制高糖对GLUT12蛋白的调节作用。MTT和CFA试验显示,OXA和QC联用能使CRC细胞的活力降低[OXA+OC:(63. 3±7. 1)%vs OC:(88. 7±4. 2)%,P <0. 05]。QC和OXA联用能抑制结肠癌细胞群落的增殖能力。结论 QC能有效抑制CRC细胞GLUT12蛋白的功能,能增加OXA杀伤CRC的作用。

小牛血提取物口腔凝胶的制备及质量评价研究

制备小牛血去蛋白提取物(Deproteinised Calf Blood Extract,DCBE)口腔凝胶剂,并对质量标准进行初步研究。采用CMC-Na为凝胶基质,羟苯乙酯为防腐剂,糖精钠为矫味剂,DCBE为主药,制备DCBE口腔凝胶剂,并通过呼吸实验建立DCBE含量测定方法。凝胶剂处方为:CMC-Na用量为1%,防腐剂用量为0.03%,矫味剂的用量为0.01%。呼吸活力应大于4.0μL·O_2/mg·h。结论:DCBE口腔凝胶剂制备工艺简单,质量控制方法可行。

盐酸丙酰左卡尼汀片在健康人体中的药代动力学研究

目的考察盐酸丙酰左卡尼汀片在健康志愿受试者单次和多次口服给药的药代动力学及进食对其的影响。方法单次给药时受试者分4组(0.5、1、2 g、安慰剂)平行进行,多次给药1组(1 g),进食影响2组(餐前给药、餐后给药)交叉进行。采用LC-MS/MS法检测丙酰左卡尼汀、乙酰左卡尼汀、左卡尼汀的浓度,采用DAS2.1.1药代动力学程序估算丙酰左卡尼汀、乙酰左卡尼汀、左卡尼汀药代动力学参数。结果单次给药3个剂量组(0.5、1、2 g)的主要药动学参数为:丙酰左卡尼汀Cmax:(428.84±165.49)、(489.67±231.73)、(2 202.99±1 373.44)μg.L-1;AUC(0-t):(6 208.91±2 138.44)、(7 248.55±2 557.87)、(14 266.30±7 386.05)μg.L-1.h-1。空腹和进食后单次给药后丙酰左卡尼汀的Cmax分别为(904.23±868.38)μg.L-1和(326.95±130.97)μg.L-1;AUC(0-t)分别为(8 678.42±2 864.59)μg.L-1.h-1和(4 009.97±1 736.10)μg.L-1.h-1。多次给药后丙酰左卡尼汀的MRT为(15.03±1.28)h;Cmaxss为(778.78±342.05)μg.L-1;Cminss为(245.75±164.40)μg.L-1;AUC(0-t)及AUCbc分别为(7 664.89±1 555.36)μg.L-1.h-1和(4 343.95±2 388.05)μg.L-1.h-1,Css为(638.74±129.61)μg.L-1,DF为(84.57±51.25)%。结论单次和多次口服盐酸丙酰左卡尼汀片后盐酸丙酰左卡尼汀的药代动力学过程基本相似;在0.5～2 g剂量范围内,盐酸丙酰左卡尼汀符合线性动力学特征,多次给药后盐酸丙酰左卡尼汀代谢物在体内无蓄积现象,进食对盐酸丙酰左卡尼汀的药代动力学参数有显著影响。

丹皮酚凝胶剂体外经皮渗透性研究

目的研究丹皮酚凝胶剂中丹皮酚的经皮渗透性。方法把小鼠离体皮肤夹在Fran′s扩散池供给室和接收池间做经皮渗透试验。结果丹皮酚从凝胶中扩散出,并穿过皮肤渗透到接收池中,24 h透过率约为46.73%。结论丹皮酚凝胶剂中的丹皮酚具有良好的渗透性。因丹皮酚具有杀菌、抗炎等功效,可将其制备成凝胶剂用于皮肤疾病的治疗,故有进一步研究和推广的价值。

低分子量肝素钙口服制剂的研究

目的研究低分子量肝素钙(LMWH-Ca)口服制剂的制备和口服吸收。方法将LMWH-Ca用聚乙二醇制成微囊、β-环糊精(-βCD)包合和在LMWH-Ca口服液中加入促胃肠道黏膜吸收剂N-[10-(2-羟基苯甲酰基)氨基]癸酸钠(SNAD)等方法制备成不同制剂后,SD大鼠采用灌胃给药,用生色底物法测定不同取样时间的药物浓度。结果在试验的LMWH-Ca口服处方中,加入SNAD的处方具有较好的吸收。结论SNAD对LMWH-Ca口服制剂具有优良的促胃肠道黏膜吸收能力,有助于LMWH-Ca口服制剂的深入研究。

不同提取方法盐全蝎水溶性蛋白含量对比研究

目的通过对不同提取方法盐全蝎水溶性蛋白含量的比较研究,寻找水溶性蛋白含量较高的提取方法,为全蝎的临床用药提供借鉴。方法对活体东亚钳蝎进行盐制后,分别对水浸泡24h、水煎30、60、90、120min、75%乙醇浸泡24h六组样品浸出液进行粗蛋白、蛋白氮和氨基酸含量的测定。结果水煎60min盐全蝎水提液的粗蛋白、蛋白氮、氨基酸的含量与清水浸泡24h,水煎30min、90min、120min相比具有极显著差异。结论临床应用上采取水煎60min的方法可能更有利于全蝎的药效发挥。

川芎嗪纳米脂质体对HUVEC细胞VEGF基因表达的抑制作用

制备川芎嗪纳米脂质体,并对其进行质量控制。3批川芎嗪脂质体的颗粒小于220 nm;Zeta电位大于30 mV;包封率分别为43.89%±3.88%,61.23%±4.71%和84.35%±6.67%。采用MTT和Real-time PCR方法研究川芎嗪及其脂质体对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖及对其VEGF基因表达的影响。结果表明,川芎嗪及其脂质体对HUVEC细胞的增值无统计学差异,但下调VEGF165诱导的HUVEC细胞中VEGF基因的表达。它们可能通过抑制VEGF基因的表达而抑制血管新生,其中川芎嗪脂质体的抑制作用较川芎嗪弱,且随着包封率的提高,作用依次减弱,表明脂质体是一种缓慢释放的优良剂型,有进一步临床应用价值。

高效液相色谱法测定育发凝胶中胸腺素β4（17～23）片段的含量

目的建立育发凝胶中胸腺素β4（17～23）七肽片段的含量测定方法。方法采用反相C-12色谱柱，以三氟乙酸-乙腈-水为流动相进行梯度洗脱，检测波长为215nm,用高效液相色谱法测定育发凝胶中胸腺素β4七肽片段的舍量。结果胸腺素β4七肽片段含量的线性范围在0．02～0．18mg／mL，r=0.9998（n=5），平均回收率为100．06％，RSD为0．59％（n=9）。结论此法操作简便、快捷、准确、专属性高，可用于育发凝胶中胸腺素β4七肽片段的含量测定。

氧化型谷胱甘肽肌苷注射液的制备及质量考察

以氧化型谷胱甘肽和肌苷为主药,注射用水为溶剂制备氧化型谷胱甘肽肌苷注射液,采用高效液相色谱法测定含量,通过6个月加速试验和12个月长期试验考察其稳定性。制得的氧化型谷胱甘肽肌苷注射液无色澄明,p H值在5.5左右;肌苷和氧化型谷胱甘肽含量测定的线性关系、回收率和RSD结果均符合要求;稳定性试验中样品在考察期内各项指标均未见明显改变。该制剂处方工艺合理可行,质量可控,稳定性良好。

动态浊度法定量检测磺达肝癸钠注射液细菌内毒素含量的研究

目的:建立动态浊度法定量检测磺达肝癸钠注射液中细菌内毒素的含量。方法:使用两个厂家的动态浊度法鲎试剂建立细菌内毒素标准曲线,对3批供试品进行干扰试验,分析不同稀释倍数下细菌内毒素的回收率并进行验证,完成供试品溶液中内毒素含量的定量检测。结果:两个厂家鲎试剂的标准曲线均符合标准要求,3批供试品在稀释10、100、800、1 600倍时细菌内毒素回收率均在50%~200%范围内,均无干扰,符合药典要求。结论:采用动态浊度法检测磺达肝癸钠注射液中细菌内毒素含量是可行的。

药物制剂新技术在中药制剂现代化中的应用

现代中药发展迅速——传统中药制剂研究需要积极结合现代制药技术以响应行业新的发展需求。本文将深入研究药物制剂新技术在中药制剂现代化发展中的实际应用状况,并对常见的药物制剂新技术在现代中药研究中的应用进行分析,从而为中药制剂的现代化发展提供理论依据。

磺丁基醚-β-环糊精在药物制剂中的应用及安全性研究

磺丁基醚-β-环糊精(SBE-β-CD),为β-环糊精(β-CD)衍生物(β-CD水溶性较高)。SBE-β-CD可与药物结合,形成包合物(非共价键),进而提高该药物的稳定性、安全性等。相比于β-CD,SBE-β-CD的水溶性更高,而且存在肾毒性低、溶血作用小等优势,具有较广泛的应用前景。鉴于此,本文重点阐述SBE-β-CD在药物制剂的应用及安全性研究进展。

安菲博肽调控小胶质细胞M1/M2极化抑制脑缺血再灌注损伤后炎症反应研究

目的研究安菲博肽(anfibatide,ANF)对脑缺血再灌注损伤后小胶质细胞M1/M2极化及神经炎症的影响。方法取SD大鼠64只,随机分为正常组,模型组,Toll样受体4(TLR4)阻断剂TAK-242(2 mg·kg^(-1)),ANF(4μg·kg^(-1))组,每组16只。线栓法建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,缺血2 h后恢复再灌,连续尾静脉注射给药5 d。氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定脑梗死体积,神经功能缺损评分(mNSS)方法进行神经功能缺损评分;免疫荧光及Western blot测定脑组织中CD86/CD206蛋白表达。取BV-2细胞,建立糖氧剥夺/复糖复氧(OGD/R)模型,分对照组、OGD/R组、TAK-2421μmol·L^(-1)组和ANF 0.1、0.2、0.4μg·mL^(-1)组,缺糖缺氧6 h后,复糖复氧24 h并用相应药物进行干预。免疫荧光及实时定量PCR(RT-PCR)测定各组BV-2细胞CD86/CD206蛋白及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-10、转化生长因子-β(TGF-β)基因表达。结果与模型组比较,ANF可明显减少脑梗死体积,改善大鼠神经功能缺损,明显降低脑组织中CD86蛋白表达,明显升高CD206蛋白表达。与对照组比较,ANF 0.1、0.2、0.4μg·mL^(-1)可明显降低BV-2中CD86免疫荧光表达,明显降低CD86、IL-1β基因表达,明显升高CD206基因表达,0.2、0.4μg·mL^(-1)可明显升高CD206免疫荧光表达,明显降低TNF-α表达;升高IL-10、TGF-β基因表达水平。结论ANF可通过抑制小胶质细胞M1极化、促进M2极化,从而减轻脑缺血再灌注损伤后神经炎症反应。

芜湖市暗娼人群安全套使用情况及其影响因素

目的了解芜湖市暗娼人群安全套使用情况及其影响因素,为下一步行为干预工作提供依据。方法按高危场所档次分层抽取研究对象,通过面对面问卷调查了解其商业性行为过程中安全套使用情况,并研究分析其影响因素。结果调查的400名暗娼中,艾滋病防治知识知晓率为94.0%,最近一次商业性行为安全套使用率为95.8%,最近一个月商业性行为安全套每次使用率为83.5%。经多因素Logistic回归分析,暗娼人群最近一个月商业性行为安全套坚持使用情况与其文化程度、在当地工作时间、最近一年是否做过艾滋病检测并知道检测结果有关。结论芜湖市暗娼人群安全套坚持使用率仍较低,应继续加强对该类人群的健康教育和健康促进,极力营造社会支持环境,促进其商业性行为过程中坚持使用安全套。

安菲博肽对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的研究安菲博肽(ANF)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其作用机制。方法取SD大鼠96只,随机分为正常组,模型组,地尔硫[艹卓]组,安菲博肽高、中、低(4、2、1μg·kg^(-1))组,每组16只。腹腔注射给药连续3 d后,结扎大鼠左冠状动脉前降支30 min再灌注120 min建立心肌缺血再灌注损伤模型。氯化三苯基四氮唑(TTC)染色测定心肌梗死面积;HE染色观察心肌组织病理改变;生化试剂盒测定血清中肌酸激酶同工酶(CK-MB)、乳酸脱氢酶(LDH)活性,ELISA法测定血清中心肌肌钙蛋白I(cTnI)、白介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量;Western-blot法测定心肌组织中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子(MyD88)、核因子κB(NF-κB p65/p-NF-κB p65)蛋白表达。结果与模型组比较,ANF高、中剂量组可明显减少心肌梗死面积,改善心肌组织病理改变;高、中、低剂量组可明显降低血清中CK-MB、LDH活性及cTnI、IL-6含量;高、中剂量组可明显降低血清中IL-1β、TNF-α含量以及心肌组织中TLR4、MyD88、p-NF-κB蛋白表达水平。结论ANF对大鼠心肌缺血再灌注损伤具有明显的保护作用,其机制可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路激活从而减轻炎症反应有关。