pGL3-4×PRE-E4-luc报告基因质粒的构建及在p44信号通路中的应用鉴定

p53基因是一种重要的抑癌基因,其产物能够与靶DNA特异性结合并激活转录参与诱导细胞凋亡,调控细胞周期,控制细胞的增殖与分化.p44蛋白主要定位于前列腺癌细胞的细胞质,促进癌细胞的增殖.通过shRNA沉默p44的表达后,LNCaP细胞的生长受抑制,p53靶基因TIGAR和GLIPR1的表达增加.为探寻p53是否介导p44对TIGAR和GLIPR1的作用,本研究构建了pGL3-4×PRE-E4-luc报告基因质粒,并将其分别转染经NT-shRNA慢病毒和p44-shRNA慢病毒感染的LNCaP细胞,比较两者荧光素酶活性.结果显示,重组质粒pGL3-4×PRE-E4-luc构建成功,为进一步研究p53在肿瘤发生发展过程中的作用通路提供了新的手段.但LNCaP细胞中p44并非通过p53作用于TIGAR和GLIPR1基因,具体机制仍有待进一步研究.

ErbB3/Her3基因重组慢病毒的构建及应用

目的:构建慢病毒Lenti-Her3,探索ErbB3/Her3在p44通路中的作用。方法:将ErbB3/Her3基因的两个片段Her3-1和Her3-2分段克隆至p CDH-CMV-MCS-EF1-Puro,构建慢病毒载体p CDH-Her3,然后将其包装成慢病毒Lenti-Her3;用Lenti-Her3感染经p44-shRNA沉默的A549细胞,细胞计数法检测细胞的生长情况,Western blot法检测P44、Her3蛋白的表达。结果:转染p44-shRNA的A549细胞P44蛋白不表达,Her3蛋白表达显著降低,细胞计数显著降低;Lenti-Her3感染后,p44沉默的A549细胞Her3蛋白表达显著增强,细胞计数有所升高(P<0.05),但未达到正常水平。结论:成功构建了重组慢病毒Lenti-Her3;p44可部分通过Her3促进肺癌A549细胞的生长,可能成为肺癌药物研究的新靶点。

胶质瘤致病相关蛋白1对肺癌A549细胞生长及分化的影响

目的:观察胶质瘤致病相关蛋白1(GLIPR1)对肺癌A549细胞生长及分化的影响,以期为肺癌药物的研制提供线索。方法:构建重组慢病毒Lenti-GLIPR1和包含GLIPR1胞外可溶性区段(GLIPR1-S)基因片段的LentiGLIPR1-S,感染A549细胞后,通过Western blot法检测GLIPR1或GLIPR1-S蛋白的表达,细胞计数法检测细胞生长,免疫细胞化学法观察细胞分化。结果:A549细胞经慢病毒Lenti-GLIPR1和Lenti-GLIPR1-S感染后,均可表达相应蛋白,细胞生长受抑,细胞形态发生改变,向肺上皮细胞分化。结论:感染GLIPR1和GLIPR1-S均可促进A549细胞向肺上皮细胞分化,抑制A549细胞的生长。