放射免疫室内质量控制

随着医学技术的发展,临床检验已开创许多新的项目,对临床诊断、治疗、预后提供了可靠的依据。放射免疫虽敏感、特异、准确,但诸多因素均可造成系统误差。为保证实验结果的准确、可靠,质量控制是面临的迫切任务。我们于1989年2月始开展放射免疫的室内质控。现报告如下:

CD4^(+)和CD8^(+)T细胞在结核病免疫应答中的作用

结核分枝杆菌是世界范围内单一感染源致死亡的主要原因,并且已有大量人群被感染后处于长期潜伏感染状态。机体清除结核分枝杆菌主要依赖于特异性免疫应答,其中T淋巴细胞作为参与机体细胞免疫的主要细胞,其增殖和活化在机体特异性免疫应答中发挥着至关重要的作用。笔者分析了结核分枝杆菌感染机体后,T淋巴细胞亚群中的CD4^(+)T和CD8^(+)T细胞在结核分枝杆菌感染免疫应答中的作用,并且对机体抗结核分枝杆菌感染免疫应答的机制进行总结,为进一步深入探索适应性免疫的抗结核感染网络、结核病的诊断及临床研制新型疫苗提供借鉴。

重视IgG指数和Reiber图对寡克隆区带的补充及其在神经免疫疾病诊治中的作用

临床医生常常高度关注寡克隆带在多发性硬化(MS)中的诊断意义,但寡克隆区带(OCB)在亚洲人群的灵敏度远低于西方国家,仅关注OCB不足以满足日益增长的神经免疫疾病的诊断需求。临床医生可以使用多维度的生物标志物补充OCB的不足。IgG指数是鞘内合成免疫球蛋白G(IgG)的定量指标,成本较低且易于获取。但IgG指数因其基于脑脊液血浆浓度商之间是线性关系的假设,在血脑屏障(BBB)受损时,阴性率高,诊断价值降低。Reiber图是基于大样本研究提出的浓度商双曲线,建立在非线性关系之上,虽然国内鲜有报道,但是在国外评价颇高。在缺乏OCB阳性的情况下,通过IgG指数和Reiber图评估患者BBB的完整性和鞘内合成,无论对MS诊断的时间多发性确定还是其他神经免疫疾病的诊断和治疗方案都具有指导的意义。

酶联免疫吸附法与放射免疫法检测17羟孕酮的结果比较

目的分析酶联免疫吸附法与放射免疫法检测17羟孕酮的结果,探讨其灵敏度和特异度的差异,为临床医生正确使用、解读报告单提供有利的诊断依据。方法用酶联免疫吸附法与放射免疫法分别检测40例先天性肾上腺皮质综合征患者和50例健康对照者血清中的17羟孕酮,观察其灵敏度和特异度;用统计学方法分析两种方法的差异性。结果酶联免疫吸附法在先天性肾上腺皮质患者中测定17羟孕酮的灵敏度为90%,特异度为100%,放射免疫分析法在先天性肾上腺皮质患者中测定17羟孕酮的灵敏度为95%,特异度为100%。结论酶联免疫吸附法和放射免疫法检测17羟孕酮,二种方法结果之间的灵敏度和特异度差异均无统计学意义。二者结果之间的一致性非常高,对于一些临床上开展不了放免法的医院,开展酶联免疫吸附法也能够满足临床质量要求,同时酶联免疫吸附法较放射法操作简便,对人体无害,更具有可操作性。另外,临床医生在看不同医院结果的时候,还需了解方法学之间的差异性,综合临床诊断与其他检测项目并进行综合分析,才能对患者做出更好的诊断与治疗。

女贞子多糖免疫增强作用的体外实验研究

应用￣３Ｈ－ＴｄＲ掺入法检测女贞子多糖（ＬＬＳ）体外对小鼠免疫细胞增殖的影响。实验结果显示：１５６～１２５０μｇ／ｍｌ的女贞子多糖对正常小鼠脾淋巴细胞、Ｂａｌｂ／ｃ裸鼠脾淋巴细胞（Ｂ细胞）及通过尼龙毛柱的脾细胞（Ｔ细胞）均有直接的刺激增殖作用，量效关系明显；巨噬细胞在脾淋巴细胞增殖反应中起一定的辅助作用。

黄芪提取物免疫调节活性的体外实验研究

目的 :研究黄芪提取物 (Astragalusmembranaceusextract ,AME)对人的外周血免疫细胞(PBIC)免疫功能的调节作用。方法 :采用3H TdR掺入法分析AME对外周血单个核细胞 (PBMC)的增殖活性及对外周血粘附单核细胞 (PBAM )吞噬肿瘤细胞的影响 ;采用51Cr释放法测定AME对杀伤性T细胞(CTL)杀伤肿瘤细胞的影响 ;用ELISA法和生物学法研究AME对外周血B细胞 (PBBC)产生IgG及对PBAM产生细胞因子的影响 ;采用SDS PAGE分析AME的蛋白组成。结果 :AME能促进PBMC的增殖 ;提高CTL对肿瘤细胞的杀伤活性 ;增强PBAM对肿瘤细胞的吞噬和产生细胞因子的功能 ;促进了PBBC产生IgG ;AME含有多种蛋白成分。结论 :AME对人免疫功能有增强作用 ,提高了抗肿瘤免疫效应 。

免疫异常增高型反复自然流产的中西医结合治疗

目的：探讨以中药为主的中西医结合疗法治疗免疫异常增高型反复自然流产的临床价值及其作用机理。方法：免疫异常增高型反复自然流产透明带抗体阳性者采用知柏地黄丸治疗；磷脂抗体及ＡＢＯ血型机体阳性者采用清热利湿、养血活血中药复方治疗，磷脂抗体阳性者加用阿司匹林口服。结果：经治疗后，再次妊娠成功率为９２．３％。在治疗过程中，透明带抗体、磷脂抗体及ＡＢＯ血型抗体水平呈明显下降。妊娠后透明带抗体水平无明显再次升高现象；而磷脂抗体及ＡＢＯ血型抗体水平于妊娠后再度升高，但经继续治疗后又呈明显下降。结论：中药复方主要通过降低异常增高的自身及同种抗体水平，可有效治疗免疫异常增高型反复自然流产。

黄芪对维持性血液透析病人细胞免疫功能的影响

２１例维持性血液透析（ＭＨＤ）病人，在透析治疗的同时，加用黄芪注射液治疗，３个月后患者的免疫功能获得明显改善。与正常人相比，ＭＨＤ患者外周血ＣＤ８Ｔ细胞、血清ｓＩＬ－２Ｒ水平、血清ＴＮＦ含量均明显升高；而外周血中ＣＤ４／ＣＤ８比值和淋巴细胞ｍＩＬ－２Ｒ阳性细胞数明显下降，显示ＭＨＤ患者的细胞免疫功能降低。经黄芪注射液治疗３个月后，患者外周血ＣＤ４Ｔ细胞、ＣＤ４／ＣＤ８比值明显升高，ＣＤ８Ｔ细胞下降至正常人水平，ＣＤ４／ＣＤ８比值上升到正常水平。治疗后患者血清ｓＩＬ－２Ｒ和血清ＴＮＦ含量较治疗前明显降低，外周血ｍＩＬ－２Ｒ和ＬＦＡ－１阳性淋巴细胞也有一定增加。结果显示黄芪有显著改善ＭＨＤ患者细胞免疫功能的作用。

自身免疫性卵巢功能损伤与TH1/TH2型细胞因子表达关系的研究

目的 :探讨TH1 TH2型细胞因子的表达与自身免疫性卵巢功能损伤机理关系。方法 :分别用猪卵透明带 (PZP)、猪卵透明带单克隆抗体靶抗原 (17D3mAb ZP)和PZP的抗独特型抗体 (Ab2 )免疫小鼠 ,并测定各免疫组IL 2、IL 4水平 ,观察卵巢组织形态学改变。结果 :Ab2 免疫组主要介导TH2型免疫应答 ,而PZP和 17D3mAb ZP免疫组主要介导TH1型免疫应答 ,PZP和 17D3mAb ZP免疫组对卵巢组织形态的影响较明显。结论 :自身免疫性卵巢功能损伤与TH1型免疫应答有关。

慢性活动性乙型肝炎患者细胞免疫功能检测及其临床意义

测定了例慢性活动性乙型肝炎患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）产生的白细胞介素２（ＩＬ－２）活性。其中部分病人检测了血清可溶性白细胞介素２受体（ｓＩＬ－２Ｒ）水平，膜白细胞介素２受体（ｍＩＬ－２Ｒ）表达，ＬＡＫ活性及外周血Ｔ淋巴细胞亚群，并分析了它们之间的相关性，结果表明：ＩＬ－２活性、ｍＩＬ－２Ｒ表达，ＬＡＫ活性，ＣＤ４￣＋／ＣＤ８￣＋比值显著低于正常对照组（Ｐ＜０．００１），而ｓＩＬ－２Ｒ水平、ＣＤ８￣＋细胞显著高于正常对照组（Ｐ＜０．００１）。提示慢活肝患者细胞免疫功能低下，为临床过继免疫治疗提供了依据。

利用小鼠模型评价含有5'-GTCGTT-3'特征序列的人CpG寡脱氧核苷酸的免疫刺激活性

为了寻找合适的动物模型来评价人CpG寡脱氧核苷酸 (CpG ODN)的活性 ,研究了CpG2 0 0 6等含有 5 ' GTCGTT 3'特征序列的人CpG ODN对小鼠的免疫刺激活性。在体外它们能够促进小鼠脾淋巴细胞转化 ,促进B细胞分泌IgM ,但不能诱生高水平的IFN γ。研究了CpG2 0 0 6等序列在体内作为疫苗佐剂对HBsAg免疫效果的影响 ,发现 :(1)人CpG ODN能够明显提高抗 HBs抗体水平 ,并逆转Al(OH) 3 对Thl类免疫应答的抑制 ;(2 )初免时以CpG2 0 0 6为佐剂可以使免疫应答“锁定”在Thl类免疫应答 ,而加强免疫时以CpG2 0 0 6为佐剂可以在一定程度上逆转初免时Al(OH) 3 诱生的Th2类免疫应答 ;(3)CpG2 0 0 6联合Al(OH) 3 作为佐剂的单剂量疫苗的免疫效果强于两剂量以Al(OH) 3 为佐剂的常规疫苗。上述结果表明 :小鼠可以作为动物模型用于含有 5 ' GTCGTT 3'特征序列的人CpG ODN免疫效果的研究。

猪苓多糖对S180细胞培养上清免疫抑制作用影响的研究

目的 :研究猪苓多糖对肿瘤细胞系S180培养上清免疫抑制作用的影响。方法 :用MTT比色法检测有或无猪苓多糖作用的肿瘤细胞S180培养上清 (简称肿瘤上清 ) ,对ConA诱导的小鼠脾细胞增殖和IL 2产生 ,对小鼠脾细胞的杀伤活性 ,以及对CTLL 2细胞对IL 2反应性的影响。用流式细胞仪检测该培养上清对小鼠脾细胞表面IL 2Rα表达的影响。结果 :无猪苓多糖作用的肿瘤上清可强烈抑制上述 5项指标 ;而猪苓多糖作用的肿瘤上清则可明显上调上述方法中所测 5项指标。若先用含猪苓多糖培养液培养肿瘤细胞 2 4h或 48h ,而后洗去或不洗去猪苓多糖 ,再培养肿瘤细胞 2 4h ,所获肿瘤上清也可明显上调上述 5项指标。结论 :猪苓多糖可抵消肿瘤上清的免疫抑制作用 ,下调肿瘤细胞S180合成和

肺癌患者手术前后细胞免疫功能的动态研究

目的 探讨原发性肺癌患者手术前后外周血T细胞亚群和NK细胞的动态变化规律 ,并分析相关的因素。方法 应用免疫荧光法检测 60例肺癌患者、15例肺良性肿瘤患者和 15例正常健康者外周静脉血T细胞亚群和NK细胞活性 ;肺癌组还进行了术后第 2、7、14和 2 8天外周血T细胞亚群和NK细胞的活性测定。结果 1.除CD8+ 外 ,肺癌组术前各项检测指标与肺良性肿瘤组和正常组比较有显著性差异 (P <0 .0 5 )。 2 .肺癌组术后第 2天 ,CD3 + 、CD4+ 、CD4+ /CD8+ 和NK细胞较术前显著性降低 ,而CD8+ 显著性升高 (P<0 .0 1) ;术后第 7～ 14天 ,各项指标基本上恢复到术前水平 (P >0 .0 5 ) ;术后第 2 8天 ,CD3 + 、CD4+ 、CD4+ /CD8+ 和NK细胞均较术前显著性增加 ,而CD8+ 显著性减少 (P <0 .0 5 )。 3 .术前ⅢA期和ⅢB期与ⅠB期比较 ,术前淋巴结转移N2 组与N0 组比较 ,各项指标均有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;术后第 2 8天根治性切除组和姑息性切除组与剖胸探查组比较有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;术后第 14天输血组与未输血组相比较 ,T细胞亚群有显著性差异 (P <0 .0 5 )。结论 肺癌患者的细胞免疫功能低于肺良性肿瘤患者和正常人 ;肺癌患者术后的免疫状态呈现先降后升的变化 ;TNM分期和淋巴结转移与术前细胞免疫功能有相关?

不育的免疫性因素分析研究

应用ＢＡ－ＥＬＩＳＡ法分析了４４７对不育夫妇男女双方血清及宫颈粘液中精子抗体及女方血清中透明带抗体。结果显示，不孕组与精子抗体及透明带抗体的发生明显相关。无论是血清中还是宫颈粘液中精子抗体仅与原发性不孕相关；而与继发性不孕及反复自然流产无明显关系。透明带抗体与不孕及反复自然流产均有关，因此，透明带抗体比精子抗体在更大范围内影响人类生育。

黄芪对S180肿瘤培养上清免疫抑制作用的影响

目的 :研究黄芪对S180肿瘤培养上清免疫抑制作用的影响。方法 :用有或无中药作用的肿瘤培养上清 ,以MTT法检测其对小鼠脾细胞转化、IL 2产生、NK杀伤活性及CTLL 2细胞IL 2反应性的影响 ,以流式细胞仪检测其对小鼠脾细胞表面IL 2Rα表达的影响。结果 :单纯肿瘤上清可强烈抑制所测 5项指标。在单纯肿瘤上清中加入中药可明显上调上述 5项指标。先用含中药培液培养肿瘤细胞 ,而后洗去或不洗去中药再培养肿瘤细胞所得的上清 ,也可明显上调所测 5项指标。结论 :黄芪可以直接对抗肿瘤上清的免疫抑制作用 ;下调S180肿瘤细胞合成和 /或分泌免疫抑制物质。

CIK细胞中CD4^+T细胞亚群抗肿瘤免疫活性

目的 :观察CIK细胞中CD4 + T细胞亚群抗肿瘤免疫活性。方法 :体外大规模扩增CIK细胞 ,利用磁珠分离系统富集纯化CIK细胞中的CD4 + T细胞亚群。采用胞内染色法分析其中Th1/Th2的比例变化 ;LDH法和荧光染色法比较 4h和 2 0h其对raji细胞的杀伤率和raji凋亡。 结果 :经磁珠分离法富集的CD4 + CIK细胞纯度高达 96 % ,其中Th1/Th2的分布较PBMC有显著的改变 :Th1亚群、Th0亚群明显升高 ,Th2亚群无显著变化。CD4 + CIK细胞虽然不能在 4h之内溶解raji细胞 ,但可在 2 0h时产生同CD4 -CIK细胞同样强大的杀伤活性 ,荧光染色可见其在 4h之内诱导raji出现早期凋亡的迹象。 结论 :本研究提示CD4 + CIK细胞具有明显的“Th1优势”可以调节宿主免疫细胞活性 ;同时CD4 + CIK细胞可通过诱导肿瘤细胞凋亡实现对肿瘤的抑制和杀伤。

猪苓多糖下调Colon26细胞肿瘤免疫抑制的体外研究

目的体外研究猪苓多糖(polyporus umbellatus polysacharide,PUP)对结直肠癌Colon26细胞肿瘤免疫抑制的影响。方法获取经PUP作用后的Colon26再培养上清,未经作用的同步培养上清作对照,检测PUP对Colon26肿瘤细胞所致NK杀伤和诱导转化(MTT法测定),以及IL-2Rα、CD3ε+ζ+和CD3ε-ζ+表达(流式细胞计数分析)5项免疫功能抑制的影响,定量ELISA法测定上清中TGF-β1、VEGF、IL-4、IL-6和IL-10五种免疫抑制分子含量,多元相关分析PUP下调Colon26免疫抑制与分泌免疫抑制分子的关系。结果对照上清中5种免疫抑制分子均可测到,TGF-β1含量最高,对5项免疫功能均有显著抑制。PUP作用后的第一次再培养上清,TGF-β1含量及对5项免疫功能的抑制均明显降低;与其相比,第二次再培养上清的5种免疫抑制分子含量及对NK杀伤、IL-2Rα和CD3ε-ζ+表达抑制均明显提高。TGF-β1与抑制诱导转化、NK杀伤及CD3ε+ζ+表达正相关。结论通过下调肿瘤细胞分泌免疫抑制分子而削弱肿瘤免疫抑制,可能是PUP抗瘤效应机制之一。

双价痢疾菌苗滴鼻免疫小鼠诱导粘膜与系统免疫反应

目的 :探讨双价痢疾菌苗滴鼻免疫后对小鼠不同粘膜部位和系统免疫部位的影响。方法 :BALB/c小鼠随机分为3组 ,每组 2 0只 ,FSM 2 117或FS 5 416 4× 10 7CFU/只经滴鼻途径免疫小鼠 ,间隔 2w ,3次免疫后 7d活杀 ,分离NALT、鼻通道、脾、小肠PP及MLN淋巴细胞 ,采用流式细胞术检测其淋巴细胞表型的变化 ;收集鼻咽、肺、肠、生殖道冲洗液和血清 ,采用ELISA法检测其中特异性抗福氏、宋内氏LPSIgA和IgG。结果 :两株菌苗经鼻内免疫都诱发了鼻咽、肺、胃肠道和生殖道等不同粘膜部位及血清中特异性抗福氏、宋内氏LPSIgA、IgG的显著增加 (P <0 0 1) ;NALT、NP和PP淋巴细胞中CD3+ T细胞显著增加 ,其中以CD4+ T细胞增加为主 ;FSM 2 117免疫组的脾细胞中B2 2 0 + 细胞显著增加 ,而FS 5 416免疫组的脾细胞中CD3+ T细胞显著增加。结论 :两株菌苗经鼻粘膜免疫均可诱导不同粘膜部位及系统免疫反应的发生 ,鼻粘膜是一个安全有效的免疫途径。

刺参酸性粘多糖对细胞免疫的增强作用

从丰富的祖国医学宝库中发掘作用于免疫系统的药物是一种重要的工作。刺参酸性粘多糖(SJAMP)是现在已知的有效药物。深入研究这类药物的药理作用对临床具有重要意义。本文采用经典免疫学方法对SJAMP的细胞免疫增强作用进行了探讨,同时从细胞表面电荷的角度观察了它对淋巴细胞的作用。