定量细胞ELISA检测培养细胞ICAM-1表达水平

目的 探讨检测培养细胞细胞间粘附分子 1(ICAM 1)表达水平的细胞ELISA。方法 用不同浓度TNFα刺激接种于 96孔培养板中的HePG2 细胞 ,以抗ICAM 1McAb为第一抗体 ,用ELISA检测培养孔中的HePG2 细胞ICAM 1表达水平。结果 对相同浓度TNFα诱导的HePG2 细胞ICAM 1表达水平的 5次测定值进行方差分析显示彼此间相差不显著 (P >0 .0 5 ) ,批间变异系数均小于 5 % ,HePG2 细胞ICAM 1表达水平与TNFα浓度呈一定剂量依赖关系。结论 所建立的细胞ELISA的稳定性好 ,可用于对HePG2细胞ICAM 1表达水平进行定量分析。

丙型肝炎患者血清中高变区1(HVR1)抗体的检测与分析

目的 了解丙型肝炎患者体内抗ＨＶＲ１ 的产生情况，并探讨其与病情发展及预后的关系．方法 用含ＨＶＲ１ 序列的合成肽对４５ 例急、慢性肝炎患者血清中抗ＨＶＲ１ 作了ＥＬＩＳＡ 检测，并对所有血清作ＨＣＶＲＮＡ 检测．结果 急性丙型肝炎患者血清中抗ＨＶＲ１ 阳性率为７０－６ ％ ，与慢性丙型肝炎患者早期血清（１２－５ ％ ） 相比差异显著性（ Ｐ＜ ０－０５） ，而且两者的平均抗体滴度相差亦非常显著（４－２ ±０－６ ｖｓ ２－８ ±０－７ ，Ｐ＜ ０－０１） ． 慢性丙型肝炎现症患者血清抗ＨＶＲ１ 的阳性率为７２－７ ％ ，其中抗ＨＶＲ１ 阳性血清中ＨＣＶＲＮＡ 的阳性率也很高（７５－０ ％ ） ．结论 ＨＣＶ 感染早期抗ＨＶＲ１ 的产生及其滴度的高低可能与疾病的转归有关；慢性丙型肝炎患者体内抗ＨＶＲ１ 的存在可能反映了ＨＶＲ１ 变异引起的免疫逃避．

HDV/HBV感染树鼩肝组织Fas/FasL表达与肝细胞凋亡

目的 探讨ＨＤＶ感染树Ｑｕ肝组织中Ｆａｓ／ＦａｓＬ表达与ＨＤＶ感染之间的关系，以及Ｆａｓ／ＦａｓＬ在丁型肝炎细胞凋亡中的作用。方法 采用免疫组化和原位杂交对４５份ＨＤＶ感染树Ｑｕ肝中ＨＤＡｇ，Ｆａｓ／ＦｑｓＬ和Ｆａｓ／ＦａｓＬｍＲＮＡ的表达进行了检测；应用原位末端标记技术对肝细胞凋亡进行了检测，并应用免疫组化双重染色对ＨＤＡｇ，Ｆａｓ／ＦａｓＬ的表达以及肝细胞凋亡进行了检测。

血清TTV-DNA检测及TTV肝炎临床特点初探

目的 :了解输血传播病毒(TTV)在非甲～庚型肝炎中的感染状况 ,探讨其在肝炎发病中的作用和地位。方法 :采用套式PCR法检测血标本中的TTV DNA。结果 :检测了30例非甲～庚型肝炎病人 ,其中血清TTV DNA阳性者11例 ,阳性率36.7 %。结论 :TTV感染与ALT异常有极为密切的关系 ,可能是导致非甲～庚型肝炎重要病原。

丁型肝炎病人肝组织HDAg与HBsAg/HBcAg和HBV DNA表达及关系

目的 :探讨丁型肝炎病人肝组织中HDAg与HBsAg/HBcAg和HBVDNA表达及关系。 方法 :应用免疫组化双重染色和原位杂交 ,检测 79例丁型肝炎病人肝组织HDAg、HBsAg、HBcAg和HBVDNA表达 ,以 5 2例乙型肝炎作对照。结果 :丁型肝炎HBsAg、HBcAg检出率 ( 81%、71%)较乙型肝炎 ( 94%、92 %)低 (P<0 0 5或 0 0 1)。HDAg以肝细胞核表达为主 ,HBsAg以肝细胞浆表达为主 ,HDAg和HBsAg表达强度及阳性细胞分布呈一致性 ,且与肝组织的炎症活动和病理损害程度相关 (P <0 0 1)。HBcAg以肝细胞核表达为主 ,阳性细胞主要呈单个细胞或点状分布 ,且HBcAg阳性细胞明显少于HDAg阳性细胞。HDAg表达强度与HBVDNA表达呈负相关 (P <0 0 5 )。结论 :HDV感染会抑制HBVDNA复制或病毒抗原表达 ;在HDV致病机制中既有HDV的直接细胞毒性作用 ,也有HBV和HDV的协同作用。

连续反应时间测定诊断亚临床肝性脑病的初步评价

为了探讨连续反应时间（CRT）测定诊断亚临床肝性脑病的意义，我们用自行研制的CRT-I型微电脑测试仪检测了60例正常人和102例不同临床类型肝病病人的CRT。结果正常人对声信号和光信号刺激CRT的P10、P50、P90、P50／（P90－P10）正常值估计分别为234．3ms、264．4ms、318．0ms和1．7560及264．4ms、323．3ms、427．6ms和1．4521。慢性重型肝炎和肝硬化病人对声和光信号刺激的CRT的P10、P50和P90均较正常对照明显延长（P＜0．01，而P50／（P90－P10）比值较正常对照明显减少（P＜0．05和0．01）；各组病例对声刺激比光刺激敏感。55％的慢性重型肝炎病人和80％肝硬化在出现临床型肝性脑病前CRT延长。初步结果显示CRT测试对亚临床型肝性脑病有一定诊断价值。

丁型肝炎患者肝组织中Fas/FasL和肝细胞凋亡表达

目的探讨Fas/FasL及肝细胞凋亡在丁型肝炎患者肝组织中的表达及作用。方法采用免疫组化双重染色和TUNEL技术,检测79例丁肝患者肝组织HDAg,Fas/FasL表达,以及肝细胞凋亡,以54例乙型肝炎作对照。结果 Fas以肝细胞浆表达为主,HDAg以核浆型表达为主,二抗原表达及分布有相关性。FasL主要表达在浸润淋巴细胞浆、肝细胞核,与HDAg表达及分布不全一致。HDAg,Fas/FasL和肝细胞凋亡在各型肝炎中的表达强度有显著性差别意义。结论 HDV感染可诱导肝细胞Fas/FasL表达,增强Fas/FasL途径介导的肝细胞凋亡,这一机制在丁型肝炎发病机制中可能有一定的重要作用。

丙型肝炎病毒HVR1抗血清体外阻断HCV的感染

目的 体外观察含HCV高变区1多抗原肽(MAP)及其抗血清对HCV感染有无阻断作用。 方法 将前期合成的MAP及其抗血清和HCV感染血清按不同比例充分混合并在37℃下孵育2h或4℃下孵育12h,再将此混合血清接种7721细胞,分别以逆转录-聚合酶链反应、免疫组化、原位杂交检测细胞的感染情况。 结果 各比例混合的阻断血清组在孵育后细胞和培养上清中均可检出HCV RNA;免疫组化证实有表达HCV抗原的阳性细胞。 结论 前期合成的HCV包膜糖蛋白及其抗血清在体外不能明确阻断HCV感染/吸附肝细胞。

重组干扰素α-2b治疗慢性乙型肝炎的疗效、影响因素及预后研究

目的观察重组干扰素α 2b(干扰能)治疗慢性乙型肝炎的疗效、影响疗效的因素和对长期预后的影响。方法88例慢性乙型肝炎病例配对分为治疗组和对照组各44例。治疗组用重组干扰素α 2b3×106U ,每周3次 ,皮下注射 ,疗程3个月 ,对照组不用抗病毒治疗。42例开放病例根据治疗剂量分为3×106U和6×106U2组,治疗方法为每周3次或隔日1次,深皮下或肌肉注射,疗程3个月。结果用重组干扰素α 2b治疗的全部病例在治疗完成时、随访6个月、1～7年的有效应答率(完全应答 +部分应答,分别为55.8 %、58.8 %、61.9 %、57.9 %、58.5 %、56.1 %、52.6 %、45.5 %和50.0 %)均显著高于对照组(分别为13.6 %、13.6 %、15.9 %、15.9 %、13.6 %、15.0 %、15.2 %、11.1 %和7.7 %),P<0.05或P<0.01。6×106 U和3×106 U治疗组间有效应答率差异无显著性(P>0.05)。中度慢性肝炎、治疗前ALT>100IU/L、病程短于3年、女性病人和治疗开始后有发热者的疗效较好(P<0.05)。治疗组的长期预后明显优于对照组(P<0.05),有效应答病例的长期预后显著优于无应答病例(P<0.05)。结论重组干扰素α 2b是一种肯定有效的抗乙型肝炎病毒药物。干扰素治疗可改善慢性乙型肝炎病人的长期预后。

丁型肝炎病毒基因组核酶的反式剪切活性

目的观察丁型肝炎病毒2种基因组核酶(HDVgenomicribozyme,g.Rz)是否存在反式剪切活性。方法合成g.Rz74和g.Rz55的cDNA ,克隆入质粒pGEM 4Z ,体外转录获取核酶RNA ;同时从质粒pRz277B上转录出同源性底物RNA ,以α 32p UTP标志 ;再将核酶与底物按比例混合 ,在一定条件下观察是否出现剪切作用。结果启动反应30min后 ,可以观察到剪切产物 ,90min后剪切反应更加明显。结论 g.Rz74和g.Rz55均具有反式剪切活性。

抗乙肝特异胎盘转移因子治疗慢性乙型肝炎的Ⅱ期临床对比观察

应用抗乙肝特异胎盘转移因子治疗慢性乙型肝炎28例。结果发现抗乙肝特异胎盘转移因子治疗组的HBeAg、HBV－DNA阴转率及抗HBe阳转率在治疗结束时分别为53．6％、50．0％和42.9％，均显著高于正常胎盘转移因子治疗组（9．1％，P＜0．05）和空白对照组（6．3％，P＜0．01）；随访3个月均为46．2％，均显著高于空白对照组（8.7％，P＜0.01）。正常胎盘转移因子治疗组和猪苓多糖加乙肝疫苗治疗组与空白对照组相比均无显著性差异（P＞0．05）。提示抗乙肝特异胎盘转移因子是一种有效、价廉、使用方便的抗乙型肝炎病毒药物。

体外培养人肝癌细胞系7721中HCV复制和表达特性

目的 建立支持HCV体外长期复制的细胞培养体系 ,研究其体外复制和表达特性。方法 将HCV感染血清接种人肝癌细胞系 772 1后 ,以逆转录 聚合酶链反应、免疫组化、原位杂交检测细胞内HCV的感染和复制情况。结果 细胞内和培养上清中在孵育后的 3月余均可间断地检测出HCV正链和 /或负链RNA ,多种HCV抗原在细胞内能稳定表达 ;HCVRNA和抗原多位于胞浆中。结论 HCV在 772 1细胞系中的复制和表达与体内感染状态接近 。

HGV/GBV-C与HCV混合感染者肝组织中相关病毒表达的免疫组化研究

目的 了解HGV/GBV C与HCV混合感染者肝组织中HGV/GBV C相关抗原的分布状况 ,探讨HGV/GBV C对肝脏的损害机制。方法 以抗HGV/GBV CNS5单克隆抗体或抗HCVNS3单克隆抗体为试剂 ,采用免疫组织化学方法检测肝炎病人肝组织中HGV/GBV C、HCV相关抗原表达。结果 5 6例肝炎病人肝组织中HGV/GBV C相关抗原表达阳性率为 2 6 .79% (15 / 5 6 ) ;HCVNS3抗原表达阳性率为 39.2 9% (2 2 / 5 6 )。HGV/GBV CNS5抗原表达阳性信号主要位于肝细胞胞浆中 ,染色阳性细胞周围可见淋巴细胞浸润。结论 肝细胞中存在HGV/GBV C相关抗原表达 ,其编码产物可能作为一种靶抗原 ,诱发免疫病理反应 。

肝脏星形细胞系的建立及其应用

肝脏星形细胞（ｈｅｐａｔｉｃｓｔｅｌａｔｅｃｅｌｓ，ＨＳＣｓ），又称为储脂细胞（ｆａｔｓｔｏｒｉｎｇｃｅｌｓ，ＦＳＣｓ）、Ｉｔｏ细胞、窦周脂肪细胞（ｐｅｒｓｉｎｕｓｏｉｄａｌｌｉｐｏｃｙｔｅｓ）、储存维生素Ａ细胞（ｖｉｔａｍｉｎＡｓｔｏｒｉｎｇｃ...

丁型肝炎患者肝组织HDAg与HBsAg/HBcAg和HBV DNA相关性研究

目的探讨丁型肝炎患者肝组织中HDAg与HBsAg,HBcAg和HBV DNA表达及相关性。方法应用免疫组化双重染色及连续切片技术和原位杂交,检测了79例丁型肝炎患者肝组织佃ADAg,HBsAg,HBcAg和HBV DNA表达,以52例乙型肝炎作对照。结果丁型肝炎HBsAg,HBcAg检出率为81％,71％,乙型肝炎为94％,92％,两组比较有显著性差异(P<0.05或0.01)。HDAg以肝细胞核表达为主,其次是胞质表达,HBsAg以肝细胞浆表达为主,HDAg和HBsAg表达强度及阳性细胞分布呈一致性,两种抗原的表达程度与肝组织的炎症活动和病理损害相关(P<0.01)。HBcAg以以肝细胞核表达为主,阳性细胞主要呈单个细胞或点状分布,且HBcAg阳性细胞明显少于HDAg阳性细胞。HDAg表达强度与HBV DNA表达呈负相关(P<0.05)。结论 HDV感染会抑制HBV DNA复制或病毒抗原表达;在HDV致病机制中HDV的直接细胞毒性可能起主要作用,也有HBV的协同作用。

可溶性细胞间粘附分子-1及其在肝病中的意义

细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)与组织器官炎症、免疫损伤及移植器官排斥反应的发生关系密切。细胞表面ICAM-1表达量的增加，在病毒性肝炎、自身免疫性肝炎等多种肝疾病中已有报道，并认为肝细胞ICAM-1表达强度与肝组织炎症损伤程度密切相关。ICAM-1与其它膜受体一样。