adr型乙型肝炎病毒全基因组转基因小鼠的制备

目的制备能用于人乙型肝炎研究的HBV转基因小鼠模型。方法将首尾相连的adr型HBV全基因组克隆至pBR322质粒,经扩增纯化后,用显微注射法导入C57BL/6小鼠受精卵原核,让外源HBV自然整合至小鼠受精卵基因组。用PCR、DNA测序、放免及免疫组化等方法分析HBV在小鼠体内的整合、复制、表达情况。结果显微注射1712枚卵,产仔128只,其中有14只鼠尾HBV PCR检测阳性,12只在血清中检测到HBV DNA及HBsAg,对其中10只HBV DNA阳性鼠用基因分析仪测序,9只与所转基因序列完全相同,1只于1739、1740位缺失2个碱基。待这批首建鼠性成熟后,交配产仔,分别在其子代血清中检测到HBV DNA及HBsAg;肝组织切片免疫组化分析,发现散在点状HBsAg表达。结论本实验结果表明,HBV DNA已整合至小鼠基因组,并能复制、表达。证明我们已获得HBV转基因小鼠模型。