早期体内力学刺激促进藻酸钙复合自体软骨细胞修复羊关节负重区软骨缺损的实验研究

目的观察膝关节持续被动活动仪(CPM)体内力学刺激对组织工程软骨修复大动物关节负重区软骨缺损效果的影响。方法研究、设计和制造能够适用于体内力学刺激羊膝关节软骨缺损修复的膝关节连续被动活动仪(CPM);将实验动物(山羊膝关节双髁负重区制造直径6 mm软骨缺损)分为三组:空白组:单纯缺损未植入修复组织;藻酸钙+骨膜+细胞组:藻酸钙复合自体软骨细胞凝胶植入软骨缺损区,自体骨膜覆盖缺损区;藻酸钙+骨膜+细胞+CPM组:藻酸钙复合自体软骨细胞凝胶植入软骨缺损区,自体骨膜覆盖缺损区,术后早期接受CPM锻炼。分别于术后3个月、6个月、12个月(12个月组仅包括CPM力学刺激组)取材,通过修复组织的大体、组织学观察及其评分比较3组软骨修复效果。结果藻酸钙复合软骨细胞能够较好地修复羊负重区关节面软骨缺损,将缺损修复的大体观察、组织学等结果进行单因素统计学分析,发现接受体内CPM力学刺激组效果最好,其修复组织中透明软骨比例最多,其次为藻酸钙+骨膜+细胞组。结论膝关节持续被动活动仪(CPM)体内力学刺激能够促进组织工程软骨修复大动物关节负重区软骨缺损的效果。

多孔明胶微球对大鼠脂肪干细胞的生物相容性实验

目的探讨明胶来源多孔微球的生物相容性,为进一步体内实验提供科学依据。方法分离培养大鼠乳鼠脂肪间充质干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)并进行三系分化诱导和鉴定。P2代ADSCs体外种植于多孔明胶微球1 d、3 d和5 d后,MTT法检测微球毒性和微球复合细胞后的增殖活性,激光共聚焦显微镜观察微球复合细胞后细胞形态、增殖活性。结果分离培养的大鼠脂肪间充质干细胞呈长梭形,生长良好且三系分化染色呈阳性结果。浸提液组与正常干细胞培养基组的OD值无显著差异。微球复合细胞组的OD值显著高于单纯细胞培养组。激光共聚焦显微镜结果显示微球复合细胞5 d后细胞大量增殖,形态良好。结论明胶多孔微球能够促进脂肪间充质干细胞增殖且无明显毒性,具有良好的细胞相容性,为进一步体内实验奠定了基础。

创伤性神经瘤模型的构建及评价

背景:创伤性神经瘤是周围神经损伤的常见并发症,国内外通过创伤性神经瘤模型进行周围神经修复、再生的基础研究较少见。目的:建立创伤性神经瘤模型并进行鉴定。方法:实验方案经中国人民解放军总医院动物实验伦理委员会批准。选择15只8周健康SD大鼠,显微镜下暴露坐骨神经,用显微剪剪断股后皮神经以远1cm处的坐骨神经,11-0显微线将神经近端缝合于周围肌肉上,远端神经反折后旷置,3周后使用超声和组织学验证神经瘤是否形成。结果与结论:(1)造模3周后,超声可见近端神经明显梭形膨大,为一低回声实质结节,不伴回声;(2)大体观察可观察到近端神经膨大,质稍硬,纤维结缔组织增生,与周围组织粘连;(3)苏木精-伊红染色可见瘤体内纤维组织增生,神经纤维杂乱生长,免疫荧光染色(S100、NF200)可见瘤体内许旺细胞和神经轴突不规则增生;(4)结果表明:实验成功构建了创伤性神经瘤模型。

小鼠多亚型热休克蛋白/肽疫苗联合PD-L1免疫检查点抑制剂的抗肿瘤实验研究

目的:应用小鼠肉瘤组织制备混合多亚型热休克蛋白/肽疫苗(mHSP/P),联合程序性死亡配体(PD-L1)抑制剂治疗小鼠肉瘤。方法:免疫组织化学染色和Elisa蛋白定量鉴定肉瘤细胞MCA207中的热休克蛋白(HSP70、HSP90、Grp94)的表达。制备蛋白悬液,通过蛋白层析技术获取mHSP/P和Grp94/肽肉瘤疫苗(Grp94/P),以Western blot(WB)鉴定。流式细胞术测定细胞毒性作用。Elisa实验测定mHSP/P和Grp94/P刺激产生的干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子(TNF-α)。小鼠实验探究肉瘤疫苗对肉瘤生长以及小鼠生存状况的影响。免疫荧光染色MCA207肉瘤细胞表面PD-L1的表达,WB测定IFN-γ对PD-L1表达的影响。动物实验探究PD-L1抑制剂联合mHSP/P对肿瘤的影响。结果:肿瘤组织携带多种亚型的HSP(HSP70、HSP90、Grp94);成功制备肉瘤组织来源的mHSP/P和Grp94/P,Western blot对肿瘤疫苗鉴定并且流式细胞学测定未发现细胞毒性;制备的mHSP/P较Grp94/P刺激产生更多的IFN-γ和TNF-α细胞因子(P<0.05)。肉瘤细胞表面PD-L1的表达随着IFN-γ的介入而增高;动物实验显示PD-L1抑制剂联合mHSP/P提高了免疫反应的抗肿瘤作用(P<0.05)。结论:肿瘤来源的mHSP/P和Grp94/P可以作为肿瘤疫苗在动物实验中使用。mHSP/P比Grp94/P能诱发更强的抗肿瘤免疫反应。IFN-γ刺激肉瘤细胞PD-L1的表达而导致免疫逃逸。PD-L1抑制剂联合mHSP/P提高了抗肿瘤作用。

猪膀胱细胞外基质对人脐带Wharton胶间充质干细胞生物相容性实验

目的探索化学法制备的猪膀胱细胞外基质(porcine bladder accellular matrix,PBAM)对人脐带Wharton胶间充质干细胞(Wharton's jelly mesenchymal stem cells,WJ-MSCs)的生物相容性,为组织工程膀胱的研究提供新的种子细胞。方法采用化学脱细胞法制备PBAM,行HE、甲苯胺蓝、Hoechst33258荧光染色检测脱细胞效果,扫描电镜观察PBAM形态,无水乙醇法检测其孔隙率。组织块法培养WJ-MSCs,观察形态并及行成骨、成脂诱导。比较不同浓度的PBAM浸提液对WJ-MSCs增殖的影响。实验组将WJ-MSCs复合至PBAM进行培养,对照组以DMEM培养,第3、5、7天收集细胞并计数,对细胞-支架复合物行Hoechst33258及AO染色,扫描电镜观察WJ-MSCs在PBAM上的生长状态。结果化学脱细胞法成功制备的PBAM。HE、甲苯胺蓝和Hoechst33258染色证实PBAM上无细胞残留,扫描电镜(SEM)观察PBAM表面呈多孔结构,孔隙率为93%。组织块法培养WJ-MSCs第6天可见WJ-MSCs呈鱼群样排列,行成脂、成骨诱导后,油红"O"和茜素红染色阳性。不同浓度PBAM浸提液对WJ-MSCs的增殖效果与DMEM培养液无差异。两组增殖高峰均在第5天,实验组细胞增加率高于对照组(P <0.05)。将WJ-MSCs复合至PBAM培养第5天后,Hoechst33258染色见大量WJ-MSCs生长于PBAM表面,AO染色提示为活细胞。电镜扫描可见大量人脐带WJ-MSCs黏附生长。结论 PBAM对WJ-MSCs具有较好的相容性,可为进一步研究组织工程膀胱提供实验基础。

人脐带间充质干细胞复合脱细胞软骨细胞外基质取向支架修复山羊膝关节全层软骨缺损的实验研究

目的探索人脐带间充质干细胞复合脱细胞软骨细胞外基质取向支架构建组织工程软骨,用于修复山羊膝关节负重区全层软骨缺损的可行性。方法从人脐带中分离、扩增培养人脐带间充质干细胞,并进行鉴定;以猪源脱细胞软骨细胞外基质取向支架为组织工程软骨支架载体;在成年山羊膝关节负重区股骨髁处造全层软骨模型;实验分为两组,以人脐带间充质干细胞复合脱细胞软骨细胞外基质取向支架修复组为实验组,单纯全层软骨缺损造模作为对照组,每组3只山羊。术后7 d、14 d分别抽取关节液涂片行H&E染色,观察炎症反应。在术后3、6个月后分别处死两组实验动物,取材进行大体形态学观察及评分、组织学染色及评分、软骨特异性基质成分定量检测。结果①关节液涂片H&E染色结果显示,术后两组膝关节炎症反应未见明显差异。②大体形态学观察及组织学染色结果均证实,实验组修复区再生的关节软骨更加接近天然软骨,且与周边整合良好,获得更好的修复效果。大体形态学及组织学评分均证实,实验组的评分均要明显高于对照组(P<0.05);③糖胺多糖定量检测结果显示实验组明显高于对照组(P<0.05)。结论人脐带间充质干细胞复合脱细胞软骨细胞外基质取向支架构建组织工程软骨,可用于修复山羊膝关节负重区全层软骨缺损,是未来治疗软骨损伤较有应用前景的方法之一。

甲基丙烯酰化透明质酸/脱细胞华通胶水凝胶支架的制备与表征

背景:随着组织工程为关节软骨损伤修复这一世界难题带来了新的希望,构建成分仿生的光固化3D打印水凝胶支架对软骨组织工程具有重要意义。目的:通过数字光处理3D打印技术构建成分仿生的甲基丙烯酰化透明质酸/脱细胞华通胶水凝胶支架,评价其生物相容性。方法:从人脐带中分离提取华通胶组织后进行脱细胞处理,冷冻干燥后磨成粉末,溶于PBS中制备50 g/L的脱细胞华通胶溶液。制备甲基丙烯酰化透明质酸,冻干后溶于PBS中制备50 g/L的甲基丙烯酰化透明质酸溶液。将脱细胞华通胶溶液与甲基丙烯酰化透明质酸溶液以体积比1∶1混合,加入光引发剂后作为生物墨水。通过数字光处理3D打印技术分别制备甲基丙烯酰化透明质酸水凝胶支架(记为HAMA水凝胶支架)与甲基丙烯酰化透明质酸/脱细胞华通胶水凝胶支架(记为HAMA/WJ水凝胶支架),表征支架的微观结构、溶胀性能、生物相容性与促软骨分化性能。结果与结论:①扫描电镜下见两组支架均呈三维立体的网状结构,其中HAMA/WJ水凝胶支架纤维连接更加均匀;两组支架均在10 h内达到溶胀平衡,HAMA/WJ水凝胶支架的平衡溶胀比低于HAMA水凝胶支架(P<0.05)。②CCK-8实验显示相较于HAMA水凝胶支架,HAMA/WJ水凝胶支架可促进骨髓间充质干细胞的增殖;死活染色显示骨髓间充质干细胞在两组支架上生长良好,并且HAMA/WJ水凝胶支架上的细胞立体分布均匀、细胞数量更多;鬼笔环肽染色显示相较于HAMA水凝胶支架,HAMA/WJ水凝胶支架上的骨髓间充质干细胞黏附与铺展更佳。③将骨髓间充质干细胞接种于两组支架后进行成软骨诱导培养,qRT-PCR检测结果显示,HAMA/WJ水凝胶支架组聚集蛋白聚糖、SOX9、Ⅱ型胶原mRNA表达量均高于HAMA水凝胶支架组(P<0.05,P<0.01)。④结果表明,数字光处理3D生物打印HAMA/WJ水凝胶支架可促进骨髓间充质干细胞的增殖、黏附及成软骨分化。

基于脱细胞方法制备3D植物肝组织工程支架及表征

背景:组织工程为肝衰竭这一临床困境带来了新的希望,通过简单的制备方法制备植物脱细胞纤维支架对肝脏组织工程具有重要意义。目的:采用新鲜苹果切片和十二烷基硫酸钠溶液制备苹果组织脱细胞支架材料,并评估其生物相容性。方法:将新鲜苹果分别采用磷酸盐缓冲液和十二烷基硫酸钠溶液进行脱细胞处理,然后用磷酸盐缓冲液进行脱毒获得处理后的苹果组织和苹果脱细胞支架材料,然后在扫描电镜下观察苹果材料的脱细胞效果。实验从BALB/C小鼠腹股沟脂肪中提取脂肪干细胞,并且通过流式细胞术鉴定其干细胞相关标记物(CD45,CD34,CD73,CD90,CD105)的表达。然后分为无支架对照组和有支架组,在两组中接种等量脂肪干细胞,通过CCK-8、苏木精-伊红染色、鬼笔环肽骨架染色评价该脱细胞支架与脂肪干细胞的生物相容性,在光学显微镜、扫描电镜下观察细胞在支架上的黏附及生长情况。然后将支架分为非诱导组和成肝诱导组,将脂肪干细胞种植在脱细胞苹果支架上,分别在普通培养基和成肝诱导培养基中培养14 d后进行对比,通过肝细胞标记物(白蛋白、细胞角蛋白18、细胞色素P450家族1亚家族1)进行免疫荧光染色,通过酶联免疫吸附实验来检测白蛋白、甲胎蛋白的分泌情况,并通过扫描电镜观察支架上诱导培养的细胞形态,验证该脱细胞支架材料上肝细胞相关蛋白的表达。最后,实验通过将钴60照射消毒后的苹果脱细胞支架移植于小鼠肝脏表面,28 d后通过大体观及苏木精-伊红染色观察该支架的降解情况。结果与结论:①扫描电镜结果显示,脱细胞后的苹果支架材料具有约100μm大小的孔隙结构,不存在残余细胞。②通过流式细胞学鉴定,提取培养的细胞为脂肪间充质干细胞。③CCK-8结果表明,所制备的苹果组织脱细胞支架材料无细胞毒性;苏木精-伊红染色和鬼笔环肽骨架染色观察到脂肪间充质干细胞能够在苹果组织脱细胞支架上黏附和聚集生长。④免疫荧光染色、酶联免疫吸附实验结果显示,培养在苹果组织脱细胞支架上的脂肪间充质干细胞高表达白蛋白、甲胎蛋白、细胞角蛋白18及细胞色素P450家族1亚家族1肝脏相关蛋白,说明被诱导分化为了具有肝细胞功能的肝细胞样细胞。⑤干预7 d时植入的苹果脱细胞支架与肝脏融合,部分支架已经降解,干预28 d时苹果脱细胞支架已完全降解,被新生组织替代。⑥结果表明,来源于苹果组织制备的脱细胞支架材料具有良好的生物相容性,可促进脂肪间充质干细胞的增殖、黏附及成肝细胞分化。

人源化六基因编辑猪红细胞治疗恒河猴急性失血性休克的疗效观察

背景临床上血液制品短缺是一项世界难题,猪红细胞与人类红细胞有诸多相似之处,有望解决这一难题。目的将人源化基因编辑猪(GTKO/β4GalNT2KO/CMAHKO/hCD55/hCD46/hTBM)的红细胞输注至非人灵长类动物恒河猴体内,探讨异种输血的可能性。方法采用盐水介质交叉配血法,检测六基因编辑猪红细胞(6GE-pRBC)与恒河猴的血液凝集情况。通过IgG、IgM结合实验和补体介导的细胞毒性实验验证异种输血安全性,从恒河猴体内抽取25%血容量血液后输注等量的异硫氰酸荧光素标记6GE-pRBC,通过流式细胞分析术监测在其体内的存活状态,并定期采集受体血液样本验证异种输血的有效性,观察6GE-pRBC输注治疗失血性休克恒河猴的可能性。结果6GE-pRBC与恒河猴主次侧交叉配血试验均为阴性;其基因表型鉴定符合预期结果;恒河猴血清与6GE-pRBC的IgG、IgM结合实验结果显示IgG(3.35%)、IgM(4.13%)表达量较低;6GE-pRBC的补体介导细胞毒作用(CDC)显著低于野生猪红细胞(P<0.0001)。输血后60 h 6GEpRBC在恒河猴体内仍存活;血细胞比容失血后为28.6%,60 h升高至35%;血红蛋白含量失血后为92 g/L,60 h升高至116 g/L并维持于失血前正常水平。结论6-GE-pRBC输注给恒河猴在一定时间内能有效地纠正恒河猴休克症状,且未发现免疫排斥反应。随着基因编辑技术不断创新,基因编辑猪红细胞有望替代人红细胞治疗人类急性失血性休克。

常温机械灌注技术在离断肢体保存中的作用研究进展

肢体离断伤在临床工作中较为常见,对离断肢体实施安全有效的保护是肢体再植成功的关键。常温机械灌注技术已经在器官移植领域取得很大突破,可长时间维持器官和组织的活性功能,延长其保存时间,在大动物模型以及临床应用中得到了很好的验证。同时这项技术有望为离断肢体的保存和功能恢复提供新的参考。因此,本文就静态冷保存在离断肢体保存中存在的问题、机械灌注的发展历程、离断肢体常温机械灌注的临床应用现状以及有待解决问题进行综述,并展望其发展方向和临床应用前景,以期推动该技术在临床广泛应用。

周围神经损伤与再生:新型修补材料的应用研究与进展

背景:虽然自体神经移植是当前治疗大段神经缺损的金标准,但因其应用受到诸多限制,因此科学家从未放弃探索新型神经修补材料。目的:回顾近年来周围神经损伤领域产生的新观点、再生过程中的关键细胞及新型神经导管的应用。方法:由第一作者检索2001至2016年Pub Med数据库收录的与组织工程神经支架材料相关的文献,检索词为"peripheral nerve injury,peripheral nerve regeneration,nerve scaffold",按纳入、排除标准最后共纳入文献76篇进行综述。结果与结论:周围神经的修复主要集中在如何让再生的神经长得"快"与长得"准"上,未来除了应继续拓展开发生物相容性更好的材料外,还应优化设计,在分子细胞和组织层面多层次模拟神经再生微环境,模拟建立取向纳米结构、化学组分、生物信号时空分布等多重仿生神经移植物。应明确的是,神经导管不应只是简单的力学支撑,还应具有一定功能,如导电、细胞因子梯度缓释等。仿生也不应只局限于形态学上,还应拓展到如细胞因子的时空变化、细胞生物电刺激等方面上来。

逆行螺钉置入固定骨盆耻骨上支骨折的数字解剖学参数

目的对骨盆3D模型进行数字螺钉模拟及置入,以获取逆行螺钉在耻骨联合下角入钉时的最佳通道参数,为临床安全置入螺钉固定骨盆耻骨上支骨折提供理论依据。方法随机收集解放军总医院CT室于2016年7月-2017年9月归档的50例非骨盆骨折患者的CT图像,导入MIMICS软件重建骨盆3D模型。分别用数字螺钉进行模拟置入,从耻骨结合处开始测量逆行钉道的直径和钉道长度以及钉道与矢状面和冠状面的夹角。结果男性最狭窄区平均直径为(7.54±1.02)mm;女性最狭窄区平均直径为(6.23±1.61)mm;以φ4.5 mm数字螺钉模拟置入时,样本中钉道与矢状面、冠状面和横截面的平均夹角:男性[(51.10±3.26)°、(8.24±1.33)°、(39.47±2.58)°],女性[(53.44±3.78)°、(8.45±2.15)°、(35.26±4.76)°]。结论根据Nakatani骨折分型,当耻骨上支骨折发生在Ⅰ区时,以耻骨联合下角作为穿针点,参考上述夹角可以获得内侧骨折部分足够的螺钉通道长度。

干细胞在软骨再生中的应用

软骨损伤是最常见的膝关节疾病之一。由于软骨无血管、神经、淋巴组织,营养成分主要来自膝关节的滑液,这些组织学的特点使得软骨损伤的自我修复能力极为有限。创伤性的软骨损伤和早期的骨性关节炎（OA）会引起患者关节的疼痛和肿胀,若损伤不予处理则会加速关节的退变,引起更严重的功能障碍。

改善骨髓间充质干细胞迁移归巢方法的研究进展

骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)是一类具有自我更新能力和多向分化潜能的组织干细胞,已有研究证实BMSCs移植可治疗多种疾病,并取得理想结果。然而,当前研究表明移植后的BMSCs仅有少量能到达并停留在靶组织,限制了BMSCs的治疗效果。本文主要对当前研究中提高BMSCs的迁移及归巢效应的策略进行综述,旨在为BMSCs的临床应用提供理论依据。

骨软骨一体化仿生支架的研究现状与展望

关节软骨在日常关节活动中发挥着重要的作用,而随着社会人口老龄化所导致的退行性软骨损伤与年轻患者不恰当的运动带来的运动损伤等,使得关节软骨损伤的发病率在不断地上升,且损伤患者也渐趋于年轻化。关节软骨虽有其相应的代谢活动,但因其缺乏神经、血管及淋巴组织,软骨一旦破坏便难以自我恢复与再生。如图1所示,常见的关节软骨损伤中,

重组人脂联素对SD大鼠胫骨骨折愈合过程的影响

背景脂联素是血清中最普遍的脂肪因子,可以影响骨形成和骨吸收。而脂联素能否促进骨折愈合仍未确定。目的研究重组人脂联素对SD大鼠胫骨闭合性骨折愈合的影响。方法使用2月龄SD雄性大鼠24只,体质量约200 g,采用骨折造模器制作SD大鼠胫骨骨折模型。造模成功后,将大鼠随机分为3组(每组n=8),并即刻局部注射0.5 mL药物1次,治疗1组注射脂联素剂量为1 mg/kg、治疗2组注射脂联素剂量为2 mg/kg,对照组注射等量0.9%氯化钠注射液。在造模成功后第6周时处死大鼠并取出双侧胫骨,通过HE染色观察骨痂结构,Masson染色评价骨痂成熟度,免疫荧光染色观察成骨相关因子表达,micro-CT检测骨痂微结构评价脂联素对SD大鼠胫骨骨折愈合的影响。结果骨折后6周时HE染色显示:治疗组骨痂明显增厚,板层骨形成均优于对照组。Masson染色显示:治疗组大鼠胫骨骨痂处胶原蛋白更多,骨痂成熟度优于对照组。免疫荧光染色显示:脂联素1 mg/kg组和2 mg/kg组在骨膜处、骨陷窝和生发层处的促成骨因子骨钙素(osteocalcin,OCN)表达量(0.61%±0.21%和0.44%±0.17%vs 0.27%±0.17%)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)表达量(0.85%±0.62%和0.70%±0.34%vs 0.35%±0.15%)均高于对照组(P<0.05)。micro-CT分析显示:脂联素1 mg/kg治疗组骨痂处骨体积分数(BV/TV)(53.76±7.89 vs 26.37±4.32)%、骨小梁厚度(Tb.Th)[(363.9±51.45)μm vs(269.6±36.80)μm]、骨小梁数量(Tb.N)[(15.68±2.11)/cm vs(10.51±1.49)/cm]和骨小梁分离度(Tb.Sp)[(344.6±98.79)μm vs(604.3±78.27)μm]均优于对照组(P<0.05)。脂联素2 mg/kg治疗组骨痂处BV/TV 45.10%±5.45%、Tb.N(14.4±1.83)/cm和Tb.Sp(436.1±63.75)μm也优于对照组(P<0.05),骨小梁厚度与对照组比较,差异无统计学意义。脂联素1 mg/kg组与2 mg/kg组各指标差异无统计学意义。结论脂联素可以促进SD大鼠的骨痂生长,骨微结构重建,促进成骨因子表达,缩短骨折愈合时间。

CD146阳性亚群有作为软骨组织工程种子细胞的应用潜力

背景:再生医学的发展、组织工程技术的出现为软骨缺损重建提供了新的解决思路。在组织工程中,间充质干细胞是应用广泛的种子细胞,然而干细胞作为一个异质性的细胞群体其不同亚群发挥着不同的功能。因此,应用间充质干细胞关键功能亚群进行软骨修复具有广泛应用前景。目的:从人脂肪间充质干细胞中分离出CD146阳性亚群细胞,验证其生物学特性及其作为软骨组织工程种子细胞的潜力。方法:人脂肪间充质干细胞由浙江金时代生物技术有限公司提供,通过流式细胞术对人脂肪间充质干细胞表面标志物进行鉴定,应用免疫磁珠分选方法从人脂肪间充质干细胞中分选出CD146阳性表达的细胞亚群。通过基因芯片检测技术及生物信息学分析技术揭示2种细胞的分子特性;体外诱导2种细胞成软骨分化并进行鉴定;冻存复苏前后检测2种细胞的细胞活性及凋亡情况。结果与结论:①人脂肪间充质干细胞表达高水平干细胞相关标志物CD73、CD90,不表达造血干细胞相关标志物CD34、CD45、HLA-DR;②生物信息分析结果表明CD146阳性亚群细胞与脂肪间充质干细胞相比在炎症通路及骨骼肌肉系统疾病有不同功能;③CD146阳性亚群细胞能够成球软骨分化,并且其成软骨分化能力要优于人脂肪间充质干细胞;④CD146阳性亚群细胞复苏后凋亡情况和活性均要优于人脂肪间充质干细胞;⑤结果表明,CD146阳性亚群细胞具有良好的成软骨分化潜力,是一种具有前景的软骨组织工程种子细胞。

人脐带华通胶细胞外基质源性软骨组织工程支架的制备及相关研究

目的采用人脐带华通胶细胞外基质为材料制备软骨组织工程支架,并对其性能进行相关检测。方法人脐带去除外膜及动、静脉,通过机械粉碎、差速离心去细胞、冷冻干燥、紫外及化学交联等方法将华通胶组织制备成三维多孔的软骨组织工程支架,并通过组织化学和免疫组织化学方法检测其成分保留情况;将人骨髓间充质干细胞复合至支架,光镜及电镜下观察细胞在支架上的生长状况及基质分泌情况,初步了解其生物相容性;将人脐带去细胞华通胶支架植入兔背部皮下,通过组织化学及CD4^+/CD8^+T淋巴细胞免疫荧光染色,了解其炎症情况及免疫原性。结果制备得到的人脐带华通胶细胞外基质源性支架为三维多孔支架,保留了华通胶中糖胺多糖和Ⅱ型胶原等成分,糖胺多糖含量为7.05%,总胶原含量为22.5%;接种于支架上的细胞黏附于支架孔壁上,生长状态良好,并有基质分泌;在体试验未见明显免疫反应。结论人脐带华通胶细胞外基质的成分与软骨细胞外基质类似,有利于细胞黏附和生长,无明显免疫原性,是一种较有前景的软骨组织工程支架材料。

共培养系统在软骨组织工程中的应用和发展

背景:近年来大量的研究证明,共培养应用到软骨组织工程中能够成功构建具有更好生物学特性的组织工程软骨。目的:通过对共培养概念的提出及共培养系统中种子细胞来源、细胞混合比率、共培养空间模式及生物材料各方面分别进行整理和深入阐述,归纳分析各因素对组织工程软骨生物学特性的效应,展望未来共培养系统在组织工程软骨研究中的发展方向。方法:第一作者检索1976年1月至2016年5月Pub Med数据库、Web of Science数据库和中国知网中的相关文献,检索关键词为"Co-culture,Co-culture systems;articular cartilage,chondrocytes,mesenchymal stem cells;tissue engineering,articular cartilage tissue engineering;共培养,共培养系统;关节软骨,软骨细胞,间充质干细胞;组织工程,软骨组织工程"。最后纳入文献共计60篇,中文1篇,英文59篇。结果与结论:(1)共培养强调了细胞处理过程中生物微环境的重要性,即在体外为细胞生长提供物理-化学-生物三位一体的刺激因素;(2)在软骨组织工程中,共培养很好地维持了软骨细胞的活性和天然细胞表型,能够诱导具有多项分化潜能的间充质干细胞分化成软骨。另外,为软骨组织工程软骨细胞的来源受限问题和骨软骨复合伤的治疗带来新的途径;(3)但是共培养中细胞间相互作用的具体机制仍然有待进一步研究,从而为优化共培养系统培养条件提供有力依据,以更好地应用到软骨组织工程中构建优良的组织工程软骨组织。

周围神经损伤后瓦勒氏变性及神经导管的研究与进展

背景:如何促进损伤的周围神经再生尤其是大段神经缺损是一个棘手的临床难题,亟待解决。目的:回顾近些年瓦勒氏变性机制及神经导管的发展。方法:检索PubM ed数据库,检索词为"peripheral nerve regeneration;Wallerian degeneration;nerve guidance conduits。根据纳入排除标准,选出有关瓦勒氏变性分子机制及神经修复的文献74篇进行探讨。结果与结论:研究发现大鼠SARM1和同源物果蝇d SARM在促进瓦勒氏变性中起关键作用,推断烟酰胺腺嘌呤单核苷酸/烟酰胺腺嘌呤二核苷酸比例的改变可能对SARM1的激活起一定的作用。对于延迟瓦勒氏变性到底是好是坏,目前还存在争议。周围神经损伤后短时间内抑制瓦勒氏变性并积极促进再生达到周围神经损伤及时修复是未来努力的方向。