妊高征患者胎盘中一氧化氮合酶含量的变化及其意义

为探讨胎盘中一氧化氮合酶（ Ｎ Ｏ Ｓ）在妊高征发病中的作用，采用免疫组化 Ａ Ｂ Ｃ法分析了３２例妊高征患者胎盘和３２例正常足月孕胎盘中，内皮型一氧化氮合酶（ｅ Ｎ Ｏ Ｓ）和诱导型一氧化氮合酶（ｉ Ｎ Ｏ Ｓ）含量的变化情况。结果：①正常足月孕胎盘和妊高征患者胎盘中均存在ｅ Ｎ Ｏ Ｓ和ｉ Ｎ Ｏ Ｓ抗原，两者均分布于绒毛血管内皮细胞和合体滋养细胞胞浆内；②妊高征患者胎盘中ｅ Ｎ Ｏ Ｓ含量显著低于正常足月孕者（ Ｐ＜ ０．０００５），且轻度妊高征患者胎盘ｅ Ｎ Ｏ Ｓ含量显著高于中度及重度患者（ Ｐ＜ ０．０２５， Ｐ＜ ０．００５）。妊高征患者的血压与 ｅ Ｎ Ｏ Ｓ含量之间有显著的负相关（ｒ＝ － ０．６０１１， Ｐ＜ ０．０００５）；③妊高征患者胎盘ｉ Ｎ Ｏ Ｓ含量与正常足月孕者无显著差异。轻度与中度、轻度与重度以及中度与重度妊高征患者胎盘ｉ Ｎ Ｏ Ｓ含量均无显著差异。妊高征患者的血压与ｉ Ｎ Ｏ Ｓ含量之间无相关性。以上说明：妊高征患者胎盘中ｅ Ｎ Ｏ Ｓ含量的减少与其发病有关。

慢性肾脏病患者肾组织Klotho基因启动子的超甲基化与临床病理的相关性

目的评价慢性肾脏病（CKD）患者肾组织和外周血单个核细胞（PBMC）Klotho基因启动子的甲基化水平，探讨Klotho基因启动子超甲基化与CKD患者临床病理特征的关系。方法以47例接受肾脏活组织病理检查的CKD患者为研究对象，47例肾癌根治术患者肾脏切除标本中的正常肾脏组织和48例健康志愿者的PBMC分别作为肾组织和PBMC的对照组。采用焦磷酸测序（PS）法检测肾组织和PBMCKlotho基因启动子的甲基化水平。结果CKD患者肾组织Klotho基因启动子甲基化率显著高于对照组，差异有统计学意义[（17．04±6．42）％比（9．34±2．43）％，P〈0．011；PBMCKlotho基因启动子甲基化率亦显著高于对照组，差异有统计学意义[（14．19±5．86）％比（6．90±2．39）％，P〈0．01]。CKD患者PBMC与肾组织Klotho基因启动子甲基化率呈正相关r=0．811，P〈0．01），PBMCKlotho基因启动子甲基化率预测肾组织Klotbo基因启动子超甲基化的受试者工作曲线下面积为0．958（P〈0．01）。肾组织和PBMCKlotho基因启动子甲基化率与eGFR均呈负相关（分别r=-0．827，P〈0．01；r=-0．626，P〈0．01），与肾小管问质纤维化面积呈正相关（r=0．865，P〈0．01；r=0．748，P〈0．01），与24h尿蛋白量无相关。结论CKD患者。肾组织和PBMCKlotho基因启动子甲基化率升高，PBMCKlotho基因启动子甲基化率可作为肾组织Klotho基因启动子超甲基化的无创评价指标。Klotho基因启动子超甲基化与肾脏纤维化的关系值得进一步研究。

正常细胞与镉转化细胞抑制消减cDNA文库构建

目的构建正常人支气管上皮细胞(16HBE)与氯化镉诱导转化16HBE细胞间差异表达基因的消减cDNA文库。方法以16HBE为驱动子,氯化镉诱导转化16HBE细胞为检测子,应用抑制性消减杂交(SSH)方法构建cDNA文库,经2次消减杂交和2次PCR后,将巢式PCR产物插入载体,随机挑选克隆进行鉴定。结果得到纯度高及完整性好的总RNA和mRNA,并扩增出良好的双链cDNA,cDNA与接头的连接效率>25%,最终使差异表达基因得到富集;经蓝白菌落筛选,获得1 200余个白色阳性克隆;随机挑选50个白色克隆进行PCR扩增,显示96%克隆均有100～600 bp的插入片段,这些片段可能是差异表达基因cDNA片段,提示用SSH法及T/A克隆技术有效构建了两细胞株间差异表达基因的消减cDNA文库。结论成功创建正常16HBE细胞与镉转化16HBE细胞差异表达基因消减cDNA文库。