紫芽六堡茶花青素合成相关基因的转录组测序及表达分析

【目的】紫芽六堡茶(Camellia sinensis var. sinensis cv. Liupao)是六堡群体种茶树中芽叶呈紫色且富含花青素的特异品系,研究紫芽六堡茶花青素合成相关基因可为深入了解紫芽六堡茶花青素积累的分子机制奠定基础,为高花青素六堡茶树的分子育种提供遗传资源。【方法】利用盐酸乙醇分别提取紫芽和绿芽六堡茶芽中花青素,测定其含量;通过Illumina Hiseq 2 500高通量测序平台对紫芽和绿芽六堡茶进行转录组测序,分析花青素合成相关基因的表达水平,找出差异表达基因,进一步进行GO功能分析和KEGG富集分析;并通过荧光定量PCR对转录组测序结果进行验证。【结果】紫芽六堡茶花青素含量是绿芽的7倍;转录组测序共获得165 570条Unigene,平均长度1 450bp;对测序结果进行分析,筛选出与紫芽六堡茶花青素生物合成通路相关的基因243条,进一步筛选出43个差异显著表达基因,这些基因共编码14个关键酶,包括苯丙氨酸氨裂解酶(phenylalanine ammonialyase, PAL)、查尔酮合成酶(chalconesynthase,CHS)、查尔酮异构酶(chalconeisomerase,CHI)、肉桂酸4-羟化酶(cinnamateacid4-hydroxylase, C4H)、花色素苷还原酶(anthocyanidin reductase, ANR)、4-香豆酸CoA连接酶(4-coumarate-Co A ligase,4CL)、乙酰辅酶A羧化酶(acetyl-CoA carboxylase, ACC)、黄酮醇合成酶(flavonol synthase, FLS)、黄酮3′,5′-羟化酶(flavonoid-3′,5′-hydroxylase, F3'5'H)、黄酮3′-羟化酶(flavonoid 3'-hydroxylase, F3'H)、黄酮3-羟化酶(flavanone-3-hydroxylase, F3H)、二氢黄酮醇还原酶(dihydroflavonol 4-reductase, DFR)、花青素成合酶(anthocyanidin synthase,ANS)、无色花青素还原酶(leucoanthocyanidin reductase, LAR)。【结论】编码花青素生物合成的14个关键酶基因中有34个基因在紫芽六堡茶中上调表达,推测这些基因在紫芽花青素积累中起重要作用。

不同年份六堡茶中水溶性成分含量的变化

以不同年份六堡茶为原料,分析其水溶性成分含量的变化。选用冲泡法提取六堡茶中的水溶性成分,采用紫外分光光度法检测其含量。结果茶多酚含量在10.37~11.73之间,其含量随着茶样存放时间的增长而减少;咖啡碱含量在3.01~3.24之间,其含量随着茶样存放时间的增长而呈现出不同的改变趋势,但变化较小;茶褐素含量在65.89~81.24之间,随着陈化时间延长,茶褐素含量逐渐升高;游离氨基酸含量在5.21~11.54之间,随着陈化时间延长,氨基酸含量逐渐降低;可溶性糖的含量在3.39~3.67之间,放置陈化过程中无明显变化;黄酮类化合物含量在3.76~4.76之间,随着陈化时间延长,黄酮类化合物的含量逐渐升高。发现六堡茶存放时间和6种主要水溶性成分含量变化之间的关系,即茶多酚、游离氨基酸含量随着茶样存放时间的增长而减少,茶褐素、黄酮类化合物含量随着茶样存放时间的增长而增加,咖啡碱、可溶性糖的含量随着茶样存放时间的增长而无明显变化。

基于五运六气理论探析六气针法联合三因司天方辨证治疗肾病

五运六气视域下探析六气针法联合三因司天方治疗肾病的思路。中医学认为肾病病机呈虚实夹杂,表里同病之势,并在发病时体现出时相性的特点,应用五运六气理论辨证治疗肾病有着独特优势。在五运六气理论的指导下,结合患者出生时、发病时及加重时进行整体判断,能握机于发病之先,五象结合,一定程度上突破常规辨证的局限,进一步提升临床疗效。文章阐明了用五运六气理论审象握机,辨象而施针,因时而用方,针药合用,内外同调。

搅拌吸附萃取结合气相色谱串联质谱法分析传统六堡茶挥发性成分

为了探究传统六堡茶挥发性组分及关键呈香物质,该研究采用搅拌吸附萃取-气相色谱串联质谱联用(Gas Chromatography-Mass Spectrometry,GC-MS)技术结合相对气味活度值(Relative Odor Activity Value,ROAV)、风味轮技术对三个传统六堡茶样品进行挥发性组分分析。论文鉴定出芳香烃类、醇类、酮类、醛类、烯类、杂氧化合物六大类共39种香气化合物,样品挥发性组分及相对含量差异明显:农家六堡茶含有较高醇类(62.66%)和烯类(26.64%)挥发性化合物,六堡茶果含有较高醇类(81.10%)和醛类(3.62%)挥发性化合物,六堡老茶婆含有较高的醇类(56.13%)和烯类(36.95%)挥发性化合物;α-雪松醇是传统六堡茶样品相对含量最高(38.92%~49.12%)挥发性组分。样品经ROAV值计算确定α-雪松醇、韦得醇、别雪松醇、β-芳樟醇等对8种化合物为对样品香气具有决定作用的挥发性组分(ROAV>1.00),香茅醛、反-2-辛烯醛、2-正戊基呋喃等7种化合物为对样品香气具有修饰作用的组分(0<ROAV≤1.00)。此外通过构建风味轮廓及风味轮方法,确定样品的风味主要有呈现木香、果香、花香、菌香和陈香挥发性组分构成。该研究为传统六堡茶生产加工中特殊风味形成及变化提供理论依据。

基于膜解剖之四纵两横六层面法的腹腔镜根治性膀胱切除术的临床应用价值(“大家泌尿网”观看手术视频)

目的探讨基于膜解剖的四纵两横六层面法的腹腔镜根治性膀胱切除术在膀胱癌治疗中的临床价值。方法回顾性分析暨南大学第一附属医院和第六附属医院泌尿外科2015年1月—2022年6月因膀胱癌行腹腔镜根治性膀胱切除术的51例患者的临床资料,按照“四纵两横六层面法”的手术思路,采用膜解剖技术完成膀胱根治性切除。其中术前性功能正常的男性患者行预先盆神经丛显露的保留性神经的膀胱癌根治术。结果本组患者手术均顺利完成,无中转开放手术。手术时间(502.52±108.99)min,术中失血量(275.96±155.18)mL,术后进食时间(4.14±2.41)d,术后住院时间(16.37±4.85)d,淋巴结清扫数量(17.98±11.48)枚,平均随访(30.27±19.39)个月。在末次随访中,患者均未出现Clavien≥3级的并发症,总体生存率(OS)、肿瘤特异性生存率(TSS)和无复发生存率(RFS)的比率分别为82.4%、92.2%和88.2%。淋巴结阳性和阴性患者的OS分别为60.0%和84.8%、RFS为60.0%和91.3%。行预先显露盆神经丛的保留性神经的膀胱癌根治术患者中18例采用原位新膀胱术,其日间及夜间尿控率分别为83.3%和72.2%,17例在术后6个月内恢复了性功能。结论基于筋膜解剖的四纵两横六层面法腹腔镜膀胱根治性切除术切实可行,手术步骤程序化、肿瘤控制效果好、出血少、术后并发症少、术后恢复快。

基于Illumina MiSeq高通量测序技术解析六堡茶产品中真菌群落特征

试验采用Illumina MiSeq高通量测序技术对七份不同发酵工艺六堡茶样品的真菌菌落结构及多样性进行解析,扩增真菌的ITS序列。试验结果表明,样品中真菌多样性测序共获得532,864条序列,125,975,232碱基,97操作分类单(operational taxonomic units,OUT),可以归为3个门、11个纲、23个目、34个科、44个属、60个种,其中在门水平上子囊菌属门(Ascomycota)为优势菌门,相对丰度90.61%~99.24%。在属水平上曲霉属(Aspergillus)为优势菌,相对丰度5.74%~99.89%。通过主坐标分析显示茶果(CG)、老茶婆(LCP)与其他五份样本之间真菌结构差异较大,两个主坐标叠加解释度达到73.73%;经过属水平热图分析显示老茶婆(LCP)和社前茶(SQC)两个样本具有较相似的物种组成。本文为六堡茶后发酵工艺开发与研究提供理论依据。

六堡茶真菌固态发酵优势单菌的筛选

以苍梧群体种六堡毛茶为原料,利用从六堡茶中分离到的20株真菌接种至灭菌六堡毛茶进行固态发酵,通过感官审评、生化成分检测结合主成分分析,探索不同真菌的发酵效果,筛选出可显著提升六堡茶品质或赋予六堡茶新风味的固态发酵优势真菌。结果显示,9株真菌发酵性能优异,分别为塔宾曲霉、黑曲霉、芒果青霉、角膜曲霉、赤曲霉、间型曲霉、团青霉、阿姆斯特丹曲霉、赤酵母。对9株真菌发酵茶样进行理化成分分析,结果显示:接种塔宾曲霉、黑曲霉、团青霉和阿姆斯特丹曲霉发酵能显著改变茶叶中18种化学成分的含量。综合考量确定团青霉和阿姆斯特丹曲霉为发酵优良真菌。本研究可为后期人工控菌发酵六堡茶提供优良菌种资源,并为六堡茶发酵工艺改良、产品研发创新及品质提升提供科学的理论依据。

不同陈化年份传统工艺六堡茶品质差异研究

以陈化年份分别为1、3、6、9年的传统工艺六堡茶为研究对象,开展不同陈化年份传统工艺六堡茶品质差异分析。结果表明:不同陈化年份传统工艺六堡茶感官品质特征、品质化学成分、香气主要成分均有差异。随着陈化年份增加,茶叶色泽由黑褐光润—黑褐—灰褐色转变,茶叶条索逐渐松散;茶叶汤色呈橙黄—橙红—红—红浓的变化趋势;茶叶最初的栗香消退,逐渐呈现陈香、参香;茶叶滋味最初的苦涩味消退,由浓厚转变为浓醇;叶底颜色由嫩绿—红褐—棕褐转变。9年陈的传统工艺六堡茶品质化学成分比1年陈的水浸出物降低16.2%,茶多酚含量降低34.1%,咖啡碱含量增加10.5%,游离氨基酸含量降低74.1%,茶氨酸含量降低98.9%,茶红素含量降低17.1%,茶褐素含量增加了248.2%,茶黄素变化不大。3年陈传统工艺六堡茶香气成分组成种类比1年陈明显下降,从56种下降到45种。1年陈、9年陈的香气成分以醇类、碳氢化合物为主,3年陈的香气成分以醛类、碳氢化合物为主,6年陈的香气成分以酮类、碳氢化合物为主。

基于项目式主题探究活动的六维度文化育人研究

随着教育领域的创新发展,不同的教学模式能够产生不同的教学效果。项目式主题探究活动作为一种引导学生积极参与,加强实践操作的教学活动,是当下教育体系内容拓展与挖掘的关键方法。可以从六个维度对项目式主题探究活动进行构建,以实现文化育人的根本目的。可以从理想信念教育、道德品行教育、职业生涯教育、心理健康教育、时事政治教育和法治知识教育等六个维度入手,应用项目式主题探究活动文化育人的功能,为社会体系发展与完善培养可靠人才。本文旨在研究项目式主题探究活动的六维度文化育人,以期为育人发展提供借鉴经验。

基于在线学习空间的“三维六环”深度学习模式建构

本文聚焦“互联网+教育”提出的要求,基于在线学习空间的混合式教学研究,以线上学习资源的有效应用模式为切入点,阐述学什么、为何学、学到什么程度、怎么学、学会了什么、解决什么问题六个教学核心问题,提出“三维六环”“教—学—评”一体化的深度学习模式,建构生本、协同的高中信息技术教学优化生态的应用方法。

固相萃取-气相色谱-串联质谱法测定六堡茶中52种农药残留

建立了固相萃取前处理技术结合气相色谱-串联质谱法同时测定六堡茶中52种农药残留量的快速检测方法。样品粉碎后,过筛,称取2.0 g样品,加入乙腈超声提取后,将提取液浓缩至2.0 mL,再经石墨化碳黑氨基复合固相萃取柱净化,净化液用气相色谱-串联质谱法分析,采用空白基质液配制标准曲线,内标法进行定量分析。结果表明,52种农药残留目标物在0.005~0.500μg·mL-1时线性关系良好,相关系数均大于0.995。方法检出限为0.002~0.030 mg·kg^(-1),定量限为0.004~0.060 mg·kg^(-1)。在0.005 mg·kg^(-1)、0.100 mg·kg^(-1)和0.500 mg·kg^(-1)3个加标水平下,52种农药残留的平均回收率为80.23%~99.43%,相对标准偏差为0.6%~6.3%。该方法具备操作简单、快速、准确以及灵敏度高等优点,适用于大批量六堡茶中多种农药残留量的快速测定。

追“星”更要成为“星”--记广西藤县第六中学师生畅游流动科技馆

中国流动科技馆广西巡展来到藤县啦!为了丰富同学们的课余生活,培养他们对科学技术的兴趣和爱好,增强其创新精神和实践能力,进一步弘扬科学精神、激发科学梦想和科学志向,藤县第六中学的师生开展了一次课外研学活动。

用好红光沟文化资源培育六院党建品牌

航天科技集团六院党委认真学习贯彻习近平文化思想和关于党的建设的重要思想,坚持党建引领,文化铸魂,以持续抓好红光沟航天精神文化区建设为主线,传承红色基因,弘扬航天精神,培育出了具有时代特点、航天特质的“红光沟”这一党建优质品牌。

同位素内标法—超高效液相色谱/串联质谱法测定六堡茶中苦参碱和氧化苦参碱残留量

目的:以广西六堡茶为例,建立超高效液相色谱—质谱/质谱(UPLC-MS/MS)分析方法测定苦参碱和氧化苦参碱残留量。方法:样品经乙腈水溶液(80%乙腈+0.2%氨水)超声提取,流动相为0.1%甲酸—水和0.1%甲酸—甲醇溶液,梯度洗脱,内标法定量。结果:苦参碱和氧化苦参碱在0.1~80.0 ng/mL质量浓度范围内呈线性,相关系数均>0.9996,检出限均为1.0μg/kg,定量限均为3.0μg/kg,满足茶叶中苦参碱和氧化苦参碱残留量的监管判定要求。通过加标验证,回收率均为92.0%~104.7%,相对标准偏差(RSD)均<5.4%。结论:试验方法结合净化管净化(147.7 mg PSA,15.1 mg GCB,887.2 mg硫酸镁),以Kinetex 2.6μm Biphenyl 100色谱柱(100 mm×3.0 mm)分离,解决了苦参碱和氧化苦参碱提取回收率低、前处理复杂的问题,使苦参碱和氧化苦参碱出峰良好,抗干扰性强。

六枝特区小规模生猪养殖场粪污配套设施建设与资源化利用探索

文章从源头治理减量化、过程处理无害化、末端利用资源化3个方面对六枝特区小规模生猪养殖场粪污配套设施建设与资源化利用进行探讨,以促进养殖业主完善相关配套设施,提高生猪养殖的粪污综合利用率。

兵团第六师生猪产业集群现状与发展建议

生猪产业是关系国计民生的重要产业,对保障人民生活、稳定物价、保持经济平稳运行和社会大局稳定具有重要意义。为全面落实中央一号文件、中央农村工作会议及兵团党委农村工作会议精神,推进新疆生产建设兵团第六师(以下简称六师)生猪产业高质量发展,笔者对六师生猪产业集群现状进行了深入调查,组织团场、企业相关人员进行了研究分析,并提出了一些发展建议,供同行参考。

六种常用血清学诊断模型对成人乙型肝炎e抗原阳性患者肝纤维化的诊断价值比较

目的比较六种常用血清学诊断模型对成人乙型肝炎e抗原阳性患者肝纤维化的诊断价值。方法选取山东省淄博市中心医院和中国人民解放军总医院第六医学中心2018年1月至2023年6月诊断为慢性乙型肝炎并行肝病理组织活检的265例患者为研究对象。采集临床常用的球蛋白与血小板比值(GPR)、纤维化4因子指数(FIB-4)、天冬氨酸转氨酶-血小板比率指数(APRI)、天冬氨酸转氨酶与丙氨酸转氨酶比值(AAR)、纤维化硬化指数(FCI)、S指数(S-index)六种血清学诊断模型的相关指标,以肝组织穿刺活检结果为“金标准”,应用受试者操作特征曲线评估六种模型的诊断效能。结果F1~F4期年龄、血小板计数、丙氨酸转氨酶、天冬氨酸转氨酶、碱性磷酸酶、γ-谷氨酰转肽酶、白蛋白、APRI、FIB-4、GPR、S-index和FCI比较,差异有统计学意义(P<0.05)。区分F_(1)~F_(4)时,GPR、APRI、FIB-4、FCI和S-index模型的曲线下面积均>0.70,AAR模型曲线下面积的95%CI为0.50。区分F_(1)与F_(2)~F_(4)、F_(1)~F_(2)与F_(3)~F_(4)、F_(1)~F_(3)与F_(4)时,GPR、APRI、FIB-4、FCI和S-index模型的曲线下面积均大于AAR模型(P<0.05)。结论FIB-4、GPR、S-index和FCI均能较好地区分乙型肝炎e抗原阳性慢性乙型肝炎患者肝纤维化的严重程度,APRI区分效能则按F_(1)~F_(4)的顺序呈逐渐降低趋势,AAR基本不能对肝纤维化的严重程度作出判断。

梧州六堡茶出口历史、现状及发展建议

六堡茶是历史上著名的“侨销茶”,经“茶船古道”畅销东南亚。近年来,梧州市不断拓展六堡茶海外市场,六堡茶出口均价长期高于全国茶叶出口均价,但也存在着出口市场单一,出口企业数量少,出口量持续下降等问题。文章概述了六堡茶出口的历史及出口路线,分析了六堡茶出口的现状及问题,并提出对策,旨在为进一步推动六堡茶乃至我国茶叶外贸出口提供借鉴和参考。

长城六矿中硬顶板倾斜工作面切顶留巷关键参数研究

针对长城六矿1301S工作面沿空巷道围岩破坏失稳控制难题,首先,采用UDEC数值模拟方法揭示了1301S工作面侧向覆岩破断运动规律,发现侧向覆岩破断位置均位于巷道上方,且直接顶悬臂结构长度约为1.8m;其次,通过构建侧向覆岩结构力学模型,获得了切顶前后实体煤和矸石支撑体支承应力解析表达式,根据表达式进行算例分析得到切顶前后实体煤支承应力保持不变,均为1.27MPa,靠近巷道左侧矸石支撑体支承应力降低了56.89%;再次,通过理论计算确定了巷旁切顶参数,即切顶高度11m、切顶角度20°、切缝孔间距500mm;最后,设计了1301S工作面运输顺槽切顶留巷技术方案并开展了工业性试验。研究结果表明:切顶后巷道顶底板移近量和两帮移近量分别为1240mm和265mm,与未切顶相比分别降低了12.68%和70.22%,围岩整体稳定性较好。该研究可为相同或相似条件下切顶留巷技术应用及关键参数设计提供参考和借鉴。

三部六病讲座(三) 三部六病里部病的证治

里阳证和里阴证是里部发生对立性反应的表现，里部部证是里部发生统一性反应的表现。里阳证为实为热，里阴证为虚为寒，里部部证寒热虚实属性并不明显，只表现出里部的部性。