淫羊藿次苷Ⅱ通过激活雌激素信号通路促进骨髓间充质干细胞的成骨性分化

目的研究淫羊藿次苷Ⅱ(icarisideⅡ,ICSⅡ)对大鼠体外培养骨髓间充质干细胞(rat bone marrow stromal cells,rBMSCs)成骨性分化过程中雌激素信号通路的影响。方法贴壁筛选法体外培养rBMSCs,采用1×10-5 mol.L-1的ICSⅡ进行药物干预,比较ICSⅡ组、ICI组(ICI 182.78)、ICSⅡ+ICI组、Estrogen组、Esreogen+ICI组和不加药的对照组之间雌激素通路相关因子(包括ERα、PR和PS-2)的表达量,同时对比各组之间的成骨性指标,包括碱性磷酸酶活性、骨钙素和Ⅰ型胶原分泌量及钙盐沉积量。提取TotalRNA,Real Time RT-PCR检测Runx-2、Osterix(OSX)、ERα、PR、及PS-2 mRNA的表达情况,同时提取总蛋白,Westernblot法检测Ⅰ型胶原蛋白、ERα、PR和PS-2的分泌量。结果 ICSⅡ可明显增强碱性磷酸酶(ALP)活性,促进骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白的分泌和钙盐沉积,与成骨性分化相关的因子OSX和Runx-2的基因表达量也升高,但这些效应均可被雌激素通路的特异性阻断剂ICI 182.780所抑制。结论 ICSⅡ可促进rBMSCs的成骨性分化,但采用ICI 182.780阻断雌激素信号通路后,成骨性分化的指标随之降低,提示ICSⅡ是通过激活雌激素信号通路来促进rBMSCs成骨性分化的。

植物多糖增强肿瘤杀伤效应细胞的增殖活性和细胞毒活性

目的 观察红景天、红芪、地黄、枸杞子、沙参和芦荟的多糖成分对 T- AK细胞增殖活性和杀瘤活性的增强作用。方法 用抗 CD3单抗 ( CD3Mc Ab)和 r IL - 2激活诱生 T- AK细胞 ,观察 6种植物多糖在诱生、扩增和杀瘤过程中对 T- AK细胞增殖活性、IL- 2 R表达水平以及杀伤 Raji细胞和 L1 2 1 0 细胞活性的影响。结果 6种植物多糖( 1～ 10 0 μg/ m L)单独对 T- AK细胞的增殖无明显作用 ,但在 r IL- 2和 CD3Mc Ab存在下 ,可不同程度地增强 T-AK细胞的增殖能力和杀瘤活性 ,并增加 T- AK细胞 IL - 2 R的表达。结论 红景天、红芪、地黄、枸杞子、沙参和芦荟的多糖成分增强 T- AK细胞的增殖和杀伤活性 ,其作用效应与其促进 IL- 2

蛇床子素对体外培养成骨细胞增殖与分化成熟的影响

目的:研究蛇床子素对体外培养大鼠成骨细胞(rat calvarial osteoblasts,ROB)增殖与分化成熟的影响。方法:取新生SD大鼠颅骨,多次酶消化法获得成骨细胞,培养于含10%FBS的MEM培养液中,3d后首次换液,铺满90%皿底后传代培养。增殖分析采用96孔板MTT法分析,加入培养液中终浓度分别为1×10-4、1×10-5、1×10-6、1×10-7mol/L的蛇床子素;分化分析采用24孔板,于成骨性诱导培养第3、6、9、12、15天分别测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性,第8天用免疫组织化学法观察Ⅰ型胶原合成情况,第12天进行ALP组织化学染色,第14天进行茜素红染色和钙化结节计数。结果:终浓度为1×10-4mol/L蛇床子素对细胞增殖有抑制作用,而1×10-5mol/L浓度虽对ROB增殖无明显影响,但能显著提高ALP活性,促进Ⅰ型胶原表达,并增加钙化结节数量。结论:1×10-5mol/L蛇床子素能促进ROB分化成熟,应为中药蛇床子抗骨质疏松的有效成分。

独一味水提取物止血作用及其机理的初步研究

目的研究藏药独一味水提取物(HLRE)的止血、促凝血作用及其机理。方法小鼠灌胃给予HLRE高、中、低剂量,3天后测定止血时间(BT)和凝血时间(CT),同时进行血小板计数(PLC);大鼠不同剂量口服给药14d后,颈总动脉采血,测定凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)含量以及肝功能和血脂等指标。结果HLRE2g/kg剂量组与1g/kg剂量组与生理盐水组比,出血时间和凝血时间都显著缩短,但各给药组血小板计数无显著性差异。PT、APTT无差异;TT明显缩短;FIB、Alb(白蛋白)显著增加;转氨酶、血脂有降低趋势。结论HLRE具有较好的止血、促凝血作用,推测其可能是通过增加纤维蛋白原(FIB)的含量,缩短大鼠凝血酶时间(TT)来发挥上述作用的。

二氯氧锆比色法测定镰形棘豆水提取物中的总黄酮

目的比色法测定镰形棘豆水提取物中的总黄酮。方法以芦丁为对照品、2.5 mo.lL-1盐酸甲醇溶液于90℃水解30min,3.0%二氯氧锆显色剂于453 nm测定镰形棘豆水提取物中的总黄酮。结果水提物中总黄酮含量为5.79%。结论方法简便,结果可靠。

分光光度法测定藏药独一味及其制剂中总环烯醚萜苷的含量

目的建立藏药独一味及其制剂中总环烯醚萜苷的含量测定方法。方法采用分光光度法,以8-乙酰氧基山栀苷甲酯(8-O-acetylshanzhisidemethylester)为对照品,75%乙醇为反应溶剂,加入50%HCl,80℃水解20min,以对二甲氨基苯甲醛为显色剂,在620nm处测定其含量。结果8-乙酰氧基山栀苷甲酯显色化合物稳定,在5.1～42.0μg/mL范围内有良好的线性关系(r=0.999);平均回收率为102.16%,RSD为3.92%。结论该实验建立了对二甲氨基苯甲醛比色法测定独一味及其制剂中总环烯醚萜苷含量的方法,该方法简便、可靠,可作为独一味及其制剂中总环烯醚萜苷的质量控制方法。

独一味环烯醚萜苷外用止血作用研究

目的研究藏药独一味有效部位总环烯醚萜苷外用止血效果。方法采用小鼠断尾出血模型、兔腹主动脉出血模型、兔耳中动脉出血模型和大鼠肝脏组织损伤出血模型,比较淀粉、云南白药、独一味水提物和独一味总环烯醚萜苷的外用止血效果。结果独一味总环烯醚萜苷组断尾出血停止时间为(64.8±25.0)s,独一味水提物组为(97.2±44.0)s,云南白药组为(105.1±65.0)s,淀粉对照组为(124.8±43.2)s。总环烯醚萜苷组平均肝脏损伤出血停止时间为(93.8±39.5)s,独一味水提物组为(101.1±25.9)s,云南白药组为(74.0±26.3)s,淀粉对照组为(152.8±47.1)s。独一味总环烯醚萜苷外用使兔腹主动脉、耳中动脉平均出血时间显著缩短,与淀粉对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),而且优于同剂量的云南白药,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。独一味水提物与淀粉对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),但止血时间长于总环烯醚萜苷组。结论独一味总环烯醚萜苷外用对小鼠断尾、兔腹主动脉和耳中动脉以及大鼠肝脏止血效果明显,且优于水提物和云南白药。

西地那非促进体外培养大鼠骨髓间充质干细胞的成骨性分化

目的研究西地那非对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(Rat bone marrow stromal stem cells,rBMSCs)增殖与成骨性分化的影响。方法取大鼠股骨及胫骨全骨髓,贴壁筛选法培养rBMSCs,每3天换液1次,9d后传代培养。采用终浓度分别为1×10-4、1×10-5、1×10-6、1×10-7mol·L-1的西地那非进行药物干预,MTT法检测细胞增殖率,同时检测成骨性诱导培养后9d的碱性磷酸酶(ALP)活性,筛选出最佳浓度。以最佳药物浓度干预rBMSCs的成骨性分化,比较西地那非组和不加药的对照组之间的钙化结节数量及阳性克隆数(colonies stained positive for alkaline phosphatase,CFU-FALP);提取Total RNA,Real-Time PCR检测Runx-2与Osterix mRNA的表达情况;Western blot法检测Ⅰ型胶原蛋白的分泌量。结果西地那非剂量依赖性抑制细胞的增殖,但可强烈促进成骨性分化,最佳药物浓度为1×10-5mol·L-1。该浓度下的西地那非可明显增加钙化结节和CFU-FALP数量,促进与成骨相关的转录因子Runx-2与Osterix mRNA的表达,同时也可增强Ⅰ型胶原蛋白的分泌。结论浓度为1×10-5mol·L-1的西地那非可明显促进rBMSCs的成骨性分化,提示西地那非在具备其他药理作用的同时,也有较强的抗骨质疏松活性,具备开发为抗骨质疏松药物的潜力。

独一味止血有效部位的实验研究

目的研究藏药独一味的止血有效部位。方法应用聚酰胺色谱柱和大孔树酯柱分离独一味乙醇提取物,得到独一味总黄酮(P1),独一味环烯醚萜苷(P2),大极性部分(P3),各部位以2g·kg-1在小鼠ig给药3d后,断尾止血法和毛细管凝血法比较各部位的止血作用。结果与生理氯化钠溶液组比较独一味醇提取物(2g·kg-1,ig)、独一味环烯醚萜苷(P2)(2g·kg-1,ig)分别缩短小鼠断尾出血时间37.4%和49.3%;分别缩短小鼠凝血时间23.1%和28.0%。均与阳性对照药云南白药相当。而独一味总黄酮(P1)和大极性部分(P3)不能缩短小鼠断尾出血时间和凝血时间。结论独一味醇提取物及其中的环烯醚萜苷类成分,小鼠ig给药均有较好的止血作用,环烯醚萜苷类成分为其止血活性部位。

8-异戊烯基柑橘素促进体外骨髓基质干细胞成骨性分化的研究

目的研究8-异戊烯基柑橘素对体外培养大鼠骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)的增殖与成骨性分化的影响。方法取大鼠股骨及胫骨全骨髓,利用全骨髓培养法培养于含体积分数为10%FBS的DMEM-F12培养液中。以碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)为指标,96孔板梯度筛选作用最佳浓度。增殖分析采用MTT法。以1×10-6 mol.L-1的最佳浓度作用并成骨性诱导(1×10-7mmol.L-1地塞米松、10 mmol.L-1β-甘油磷酸钠和50 mg.L-1抗坏血酸)培养的d 4、8、12、16测ALP活性、钙盐沉积量,d 16进行ALP和钙化结节组织化学染色及计数。成骨性诱导后不同时间点提取Total RNA,RT Real-Time PCR法检测bFGF、IGF-1、Osterix、Runx-2、BMP-2及COL-Ⅰ的基因表达情况。结果 8-异戊烯基柑橘素不能促进BMSCs增殖,但8-异戊烯基柑橘素在1×10-6 mol.L-1时能促进其向成骨性分化,表现为提高BMSCs的ALP活性、促进钙盐沉积、增加钙化结节数量、提高bFGF、IGF-1、Osterix、Runx-2、BMP-2及COL-Ⅰ的mRNA表达水平。结论 8-异戊烯基柑橘素可诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,作为促进骨修复和抗骨质疏松的有效成分具有较大的药用价值。

大孔吸附树脂富集藏药镰形棘豆总黄酮的工艺研究

目的:建立镰形棘豆总黄酮的大孔吸附树脂富集工艺。方法:二氯氧锆比色法测定样品中总黄酮苷含量,考察D-101大孔吸附树脂富集镰形棘豆水提取物中总黄酮的动态吸附能力,解吸附溶媒浓度及体积,以及树脂的重复利用能力等。结果:富集后总黄酮苷含量达到26%,接近富集前的5倍。结论:D-101型大孔吸附树脂对镰形棘豆水提物中总黄酮成分有较好的吸附能力,60%乙醇溶液解吸附快速有效,树脂重复利用度高。

MTT快速比色法在肺癌化疗药物敏感性试验的研究

本文采用改进的简便、快速、半自动的MTT比色分析法测试了31份临床肺癌标本对7种常用肿瘤化疗药物的体外敏感性。结果肺癌细胞对丝裂霉素C、鬼臼乙叉甙、表阿霉素和顺铂较敏感,对长春新碱和甲氨喋呤反应较差。不同病理类型的肺癌和同一类型的不同个体对化疗药物的敏感性差异较大。9份肺癌标本同时进行了干细胞软琼脂集落培养药敏试验。相关分析表明,MTT比色法与干细胞软琼脂集落培养试验所得的药敏结果具有较好的相关性。

HPLC法测定人血清中氨甲喋呤血药浓度

目的：建立反相高效液相色谱法测定血清中氨甲喋呤浓度的方法。方法：以甲醇∶醋酸盐缓冲液为流动相，茶碱作内标，检测波长为３０６ｎｍ。结果：在０～８μｇ·ｍｌ－１范围内呈良好线性关系，ｒ＝０．９９９９。日内及日间测得ＲＳＤ分别为３．６６％，４．０３％。平均回收率为９５．７％，血清中最低检测浓度为５０ｎｇ·ｍｌ－１。结论：本法具有快速、准确，操作简便，流动相成本低等优点。

葛根素注射液致发热的回顾性调查

目的:了解葛根素引起发热的发生情况及影响因素.方法:通过回顾性方法收集本院1997年7～12月份使用葛根素病例92份,对用药期间出现发热者进行登记.结果:在调查的92份病例中,有18人出现发热;发热与性别及用药时间有明显的关系.

4-〔4''-(2'',2'',6'',6''-四甲基哌啶氮氧自由基)氨基〕-4'-去甲表鬼臼毒及其自由基还原物抗肿瘤作用比较

目的：比较鬼臼毒氮氧自由基衍生物４－〔４″－（２″，２″，６″，６″－四甲基哌啶氮氧自由基）氨基〕－４′－去甲表鬼臼毒（ＧＰ－７）及其自由基还原物ＧＰ－７－Ｈ和ＧＰ－７－ＯＨ的抗肿瘤活性和急性毒性。方法：采用小鼠移植性肿瘤Ｓ１８０、ＨｅＰＳ和腹腔注射ＬＤ５０值。结果：ＧＰ－７、ＧＰ－７－Ｈ、ＧＰ－７－ＯＨ５～１０ｍｇ·ｋｇ－１给药１０ｄ，对Ｓ１８０肉瘤的抑制率分别为３９．７％～４６．８％、１７．３％～２９．５％和１９．９％～２２．４％，对ＨｅＰＳ的抑制率分别为３８．７％～４８．８％、１５．５％～３５．１％和１８．４％～３３．３％。昆明种小鼠腹腔注射一次给药，ＬＤ５０分别为２３１．２、８９．７和１２９．５ｍｇ·ｋｇ－１。结论：ＧＰ－７对Ｓ１８０、ＨｅＰＳ生长抑制作用均较其还原物ＧＰ－７－Ｈ、ＧＰ－７－ＯＨ强，急性毒性较其还原物ＧＰ－７－Ｈ和ＧＰ－７－ＯＨ小；提示ＧＰ－７中的自由基在加强抗肿瘤作用和降低毒性方面起着重要的作用。

2002-2006年我院头孢菌素类药物应用分析

目的了解医院2002-2006年头孢菌素类药物的临床应用情况及趋势,为临床用药提供科学的理论依据。方法应用频度分析法和药物经济学方法对医院2002-2006年头孢菌素类药物的销售金额、用药频度(DDDs)等进行统计分析。结果5年来,医院头孢菌素类药物的用药金额和DDDs呈逐年上升的趋势,而且其年度用药金额占医院总抗感染药物销售金额的55.09%～71.79%;第3代头孢菌素类药物用药金额最高,增长幅度最快。结论医院头孢菌素类抗生素用药情况基本合理,符合军队医院的实际情况。

治疗药物监测进展

目的 :阐述治疗药物监测的必要性和测定技术。方法 :对所监测的药物、取样和分析方法进行综述。结果 :说明了药物监测的范围和指标 ,样品需求的条件 ,重点比较了色谱技术和免疫分析法在TDM中的应用和各自的优越性。结论 :确保TDM的顺利进行 ,必须具备临床知识和掌握分析技术。

麻黄碱的生物活性及测定方法研究进展

麻黄为临床用途较为广泛的中药药材之一,其味辛、微苦、性温,归肺、膀胱经,具有发汗解表、宣肺平喘、利水消肿等功效,用于风寒感冒、胸闷咳嗽、风水水肿、支气管哮喘等症,研究表明其有效化学成分为麻黄碱。本文将近年来关于麻黄碱的药理作用和测定方法的研究进展与应用情况进行综述,为麻黄药材中麻黄碱主要成分的进一步研究提供参考。

脂质体干扰素α对小鼠Lewis肺癌转移及脾细胞增殖的影响

C57BL／6N小鼠尾静脉注射Lewis肺癌细胞后，腹腔注射脂质体干扰素α（L-IFN－α）和未包裹干扰素α（IF－α），连续10d；测小鼠肺湿重、肺转移给节数和ConA诱导的脾细胞DNA参入量。结果IFN－α5×104、20×104U／kg组，小鼠肺湿重较对照组减少14．1％、19．6％，肿瘤肺转移结节数减少32．7％、50.0％，ConA刺激的脾细胞DNA参入量增加24．6％、46．8％。1／10剂量的L-IFN－α可产生相同的药理活性。小鼠环磷酰胺50mg／kgip3d后，尾静脉注射瘤细胞，实验处理同上。结果L-IFN-α和IFN－α对环磷酰胺处理小鼠的Lewis肺癌细胞肺转移的抑制作用更为明显。本文结果表明，IFN－α可抑制小鼠Lewis肺癌肺转移，促进ConA刺激的脾细胞增殖，并与剂量明显相关。脂质体包裹IFN－α可使其生物活性提高约10倍。对免疫功能受抑小鼠作用更为显著。